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【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子标记,尤其涉及一种用于青蒿育种的引物及其应用。
技术介绍
1、ferrira等在温室和田间条件下对青蒿素产生的广义遗传性状进行分析,发现青蒿素的质量分数高低是由遗传性状决定的。
2、在青蒿育种中对目标性状的选择,常规育种手段易受环境条件和育种者主观经验的影响,而且育种周期长、效率低,特别是青蒿属异花授粉植物,青蒿的花极小,自交率低于5%,青蒿素质量分数和青蒿干叶产量均属数量性状,又增加了育种的难度。近年来,随着高通量测序技术的发展,青蒿基因组开发的单核苷酸多态性(single nucleotidepolymorphism,snp)和插入缺失(indels)等标记被广泛用于基因的精细定位、关联分析等研究,由lgc公司(laboratory ofgovernment chemist)研发的竞争性等位基因特异性pcr技术(kompetitive allele specific pcr,kasp)是一项灵活准确的snp检测方法,代替了传统的高通量测序,在snp分析研究中发挥重要作用,qian shen等对青蒿的基因组进行了细致的研究。
3、现在生产上大面积使用的黄花蒿品种中青蒿素的量在1.0%左右,且长期人工栽培植株出现耐涝性差、病虫害严重等问题。随着医学发展,青蒿素类药品的需求量不断增加,黄花蒿资源已远远不能满足市场需求。因此采用新的育种方法提高青蒿素的产量具有重要的实际意义。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种筛选具有高青蒿素含
2、优选地,所述反向引物的5’端连接有荧光基团fam或hex。
3、更优选地,所述序列如seq id no.33所示的正向引物的5’端连接有荧光分子hex,所述序列如seq id no.34所示的正向引物的5’端连接有荧光分子fam。
4、本专利技术的目的之二在于提供上述引物在制备筛选具有高青蒿素含量的青蒿的产品中的应用。
5、优选地,所述产品为试剂。
6、优选地,所述产品为试剂盒。
7、本专利技术的目的之三在于提供上述引物在青蒿辅助选择育种中的应用。本专利技术的目的之四在于提供一种筛选具有高青蒿素含量的青蒿的试剂盒,所述试剂盒包括上述引物。
8、本专利技术的目的之五在于提供一种筛选具有高青蒿素含量的青蒿的方法,所述方法包括以下步骤:以待测青蒿样品的dna为模板,上述引物seq id no.35、seq id no.33和seqid no.34为引物,进行pcr扩增,若待测青蒿样品的基因型为a:a,则待测青蒿样品具有高含量青蒿素;若待测青蒿样品的基因型为a:t或t:t,则待测青蒿样品具有低含量青蒿素。
9、优选地,所述pcr反应条件为:94℃预变性15min;第一步扩增反应,94℃变性20s,65℃~57℃退火并延伸60s,10个循环,每个循环退火及延伸的温度降低0.8℃;第二步扩增反应,94℃变性20s,57℃退火并延伸60s,30个循环。
10、与现有技术相比,本专利技术具有如下有益效果:
11、本专利技术利用青蒿基因组图谱和发表的青蒿素功能基因的kasp标记,对159份青蒿样品进行检测,筛选出青蒿素含量高的纯合体基因型品种。kasp标记对选育高青蒿素含量的青蒿品种提供了保障,目标性强,大大缩短了育种年限。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种筛选具有高青蒿素含量的青蒿的引物,其特征在于,所述引物为序列如SEQ IDNO.33、SEQ ID NO.34所示的正向引物,以及序列如SEQ ID NO.35所示的反向引物。
2.根据权利要求1所述的引物,其特征在于,所述正向引物的5’端连接有荧光基团FAM或HEX。
3.根据权利要求2所述的引物,其特征在于,所述序列如SEQ ID NO.33所示的正向引物的5’端连接有荧光分子HEX,所述序列如SEQ ID NO.34所示的正向引物的5’端连接有荧光分子FAM。
4.权利要求1-3中任一项所述的引物在制备筛选具有高青蒿素含量的青蒿的产品中的应用。
5.根据权利要求4中所述的应用,其特征在于,所述产品为试剂。
6.根据权利要求4中所述的应用,其特征在于,所述产品为试剂盒。
7.权利要求1-3中任一项所述的引物在青蒿辅助选择育种中的应用。
8.一种筛选具有高青蒿素含量的青蒿的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1-3中任一项所述的引物。
9.一种筛选具有高青蒿素含量的青蒿
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于,所述PCR反应条件为:94℃预变性15min;第一步扩增反应,94℃变性20s,65℃~57℃退火并延伸60s,10个循环,每个循环退火及延伸的温度降低0.8℃;第二步扩增反应,94℃变性20s,57℃退火并延伸60s,30个循环。
...【技术特征摘要】
1.一种筛选具有高青蒿素含量的青蒿的引物,其特征在于,所述引物为序列如seq idno.33、seq id no.34所示的正向引物,以及序列如seq id no.35所示的反向引物。
2.根据权利要求1所述的引物,其特征在于,所述正向引物的5’端连接有荧光基团fam或hex。
3.根据权利要求2所述的引物,其特征在于,所述序列如seq id no.33所示的正向引物的5’端连接有荧光分子hex,所述序列如seq id no.34所示的正向引物的5’端连接有荧光分子fam。
4.权利要求1-3中任一项所述的引物在制备筛选具有高青蒿素含量的青蒿的产品中的应用。
5.根据权利要求4中所述的应用,其特征在于,所述产品为试剂。
6.根据权利要求4中所述的应用,其特征在于,所述产品为试剂盒。
7.权利要...
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