【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程，具体而言，涉及编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子及其疫苗的应用。
技术介绍
1、2019-ncov其基因组序列也被相关科学家分析出来并发布于ncbi。但目前新型冠状病毒野生型的e（small envelope），m（membrane），n（nucleocapsid）和s（spike）等四种结构蛋白的基因序列在真核细胞中的蛋白表达量十分低，使得新冠的疫苗生产变的更加困难。
2、鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子及其疫苗的应用。本专利技术提供的核酸分子经过密码子优化，能够更高效地表达新型冠状病毒的结构蛋白，该核酸分子可用于制备结构蛋白、新型冠状病毒样颗粒以及相关疫苗。
2、本专利技术是这样实现的：
3、一方面，本专利技术提供一种编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子，其碱基序列如seq id no.1-4中的任意一者所示。
4、其中，seq id no.1编码e蛋白，seq id no.2编码m蛋白，seq id no.3编码n蛋白，seq id no.4编码s蛋白。
5、本专利技术通过对野生型e蛋白，m蛋白，n蛋白和s蛋白的四种基因的核苷酸序列分别进行密码子优化，优化后得到的核酸分子序列能够在真核生物细胞中高效表达；利用本专利技术提供的核酸分子，能够快速、大量地制备新型冠状病毒的e蛋白、m蛋白、n蛋白和s蛋白4种结构蛋白，为新
6、另一方面，本专利技术提供一种载体，其含有如上所述的核酸分子。
7、在可选的实施方案中，所述载体为pci或 pcdna3.1(+)。
8、在可选的实施方案中，所述核酸分子位于所述载体的kpni和noti酶切位点之间。
9、需要说明的是，本领域技术人员可以根据需要，选择合适的载体，无论何种载体，只要其含有本专利技术上述的核酸分子即属于本专利技术的保护范围。
10、另一方面，本专利技术提供一种重组细胞，其含有如上所述的核酸分子，或者含有如上所述的载体。
11、另一方面，本专利技术提供一种新型冠状病毒的结构蛋白的制备方法，其包括：将如上所述的载体转染宿主细胞进行表达，从培养产物中提取分离得到所述结构蛋白。
12、在可选的实施方案中，所述宿主细胞为真核生物细胞。
13、进一步地，在可选的实施方案中，所述真核生物细胞选自hek293t细胞。
14、本专利技术的宿主细胞包括但不限于hek293t细胞，其他类型被转染后也能够产生上述结构蛋白的细胞也属于本专利技术的保护范围。
15、另一方面，本专利技术提供如上所述的核酸分子以及如上所述的载体在制备新型冠状病毒样颗粒或新型冠状病毒疫苗中的应用。
16、病毒样颗粒（vlps）是不含病毒核酸的空壳结构，在形态结构上与天然的病毒颗粒相似，由于其不含有病毒完整的遗传物质，因此不具有感染性，但具有和新冠病毒相似的免疫原性，可以作为高效的疫苗，其中有些已作为疫苗成功应用于临床。但由于新型冠状病毒野生型的e（small envelope），m（membrane），n（nucleocapsid）和s（spike）基因在真核细胞系中的表达量很低，导致vlps包装效率很低。本专利技术通过利用上述优化后的e（smallenvelope），m（membrane），n（nucleocapsid）和s（spike）核酸分子序列重组表达质粒进行vlps的病毒包装，可大幅度提高其产量，也为新型疫苗研发提供了另一条途径。
17、本专利技术提供的核酸分子能够高效地表达新型冠状病毒的结构蛋白，基于此，这些核酸分子可以用于制备新型冠状病毒样颗粒，且采用本专利技术所提供的核酸分子制备新型冠状病毒样颗粒，具有更高的产量，优化的蛋白组合有更高的免疫原性，同时该新型冠状病毒样颗粒能够刺激机体产生针对新型冠状病毒的抗体，因此，本专利技术提供的新型冠状病毒样颗粒可以作为新型冠状病毒疫苗。
18、在可选的实施方案中，所述新型冠状病毒样颗粒含有e蛋白、m蛋白、n蛋白和s蛋白中的至少一种。
19、在可选的实施方案中，所述新型冠状病毒样颗粒含有e蛋白、m蛋白、n蛋白和s蛋白。
20、另一方面，本专利技术提供一种新型冠状病毒样颗粒，其由如上所述的应用得到。
21、本专利技术所提供的新型冠状病毒样颗粒结构稳定，具有抗原性，用该新型冠状病毒样颗粒能够刺激机体产生免疫反应，该新型冠状病毒样颗粒具有作为疫苗的潜力。
22、另一方面，本专利技术提供一种针对新型冠状病毒的疫苗，其包括作为活性成分的如上所述的新型冠状病毒样颗粒。
23、方案1.一种编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子，其特征在于，其碱基序列如seq id no.1-4中的任意一者所示。
24、方案2.一种载体，其特征在于，其含有方案1所述的核酸分子。
25、方案3.根据方案2所述的载体，其特征在于，所述载体为pci或 pcdna3.1(+)；优选地，所述核酸分子位于所述载体的kpni和noti酶切位点之间。
26、方案4.一种重组细胞，其特征在于，其含有方案1所述的核酸分子，或者含有方案2或3所述的载体。
27、方案5.一种新型冠状病毒的结构蛋白的制备方法，其特征在于，其包括：将方案2或3所述的载体转染宿主细胞进行表达，从培养产物中提取分离得到所述结构蛋白。
28、方案6.根据方案5所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为真核生物细胞；优选地，所述真核生物细胞选自hek293t细胞。
29、方案7.如方案1所述的核酸分子、方案2或3所述的载体在制备新型冠状病毒样颗粒或新型冠状病毒疫苗中的应用。
30、方案8.根据方案7所述的应用，其特征在于，所述新型冠状病毒样颗粒含有e蛋白、m蛋白、n蛋白和s蛋白中的至少一种；
31、优选的，所述新型冠状病毒样颗粒含有e蛋白、m蛋白、n蛋白和s蛋白。
32、方案9.一种新型冠状病毒样颗粒，其特征在于，其由方案7或8所述的应用得到。
33、方案10.一种针对新型冠状病毒的疫苗，其特征在于，其包括作为活性成分的如方案9所述的新型冠状病毒样颗粒。
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1.一种编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子，其特征在于，其碱基序列如SEQ IDNO.3-4中的任意一者所示。
2.一种载体，其特征在于，其含有权利要求1所述的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体为PCI或 pCDNA3.1(+)。
4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述核酸分子位于所述载体的KpnI和NotI酶切位点之间。
5.一种重组宿主细胞，其特征在于，其含有权利要求1所述的核酸分子，或者含有权利要求2-4任一项所述的载体。
6.一种新型冠状病毒的结构蛋白的制备方法，其特征在于，其包括：将权利要求2-4任一项所述的载体转染宿主细胞进行表达，从培养产物中提取分离得到所述结构蛋白。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述宿主细胞为真核生物细胞。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述真核生物细胞选自HEK293T细胞。
9.权利要求1所述的核酸分子、权利要求2-4任一项所述的载体在制备新型冠状病毒样颗粒或新型冠状病毒疫苗中的
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述新型冠状病毒样颗粒含有N蛋白和S蛋白中的至少一种。
...【技术特征摘要】
1.一种编码新型冠状病毒的结构蛋白的核酸分子，其特征在于，其碱基序列如seq idno.3-4中的任意一者所示。
2.一种载体，其特征在于，其含有权利要求1所述的核酸分子。
3.根据权利要求2所述的载体，其特征在于，所述载体为pci或 pcdna3.1(+)。
4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述核酸分子位于所述载体的kpni和noti酶切位点之间。
5.一种重组宿主细胞，其特征在于，其含有权利要求1所述的核酸分子，或者含有权利要求2-4任一项所述的载体。
6.一种新型冠状病毒的结...
【专利技术属性】
技术研发人员：董飚，刘瑜，干春梅，杨荔，叶静娅，陈治安，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：
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