【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122及其制备方法和应用。
技术介绍
1、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistantstaphylococcus aureus，mrsa)属于葡萄球菌科，是一种直径约1μm的球形革兰氏阳性细菌，形成葡萄状簇。mrsa是一种“超级耐药病原菌”，具有一系列毒力因子和对大多数抗生素产生耐药性的能力，可以引起严重的临床感染，如败血症、肺炎和心内膜炎等，感染多发于免疫缺陷或者低下患者、老弱患者，也是临床引起创面感染的常见病原菌，从而形成慢性难愈合创面，使愈合周期延长，极大加重个人和社会医疗负担。因此，迫切需要研究和开发新的抗菌制剂用于mrsa感染的防控。
2、噬菌体(bacteriophage)作为自然界天然存在的细菌“天敌”，噬菌体及其衍生物裂解酶具有特异杀菌和强烈的裂解活性、能破坏细菌生物膜、不易使细菌产生耐药性，因此噬菌体及其衍生物裂解酶具有新型抗菌制剂的巨大潜力，目前在治疗耐药细菌感染研究方面得到了高度重视。
3、公开于该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122，旨在克服mrsa菌对现有抗生素易产生耐药性，现有抗生素治疗mrsa菌疗效差的缺陷。
<...【技术保护点】
1.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122，其特征在于，所述裂解酶LysLP-122的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，在步骤S1中，所述表达载体为原核表达载体pET-30a。
4.根据权利要求1所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，所述对重组质粒pET-30a-LysLP-122进行转化和诱导表达，获得菌体沉淀物的具体步骤如下：
5.根据权利要求4所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，所述将菌液按1％的接种量转接至100mL含终浓度为50μg/mL卡那霉素的LB培养液，震荡培养至OD600预设值，加入诱导剂后，振摇过夜诱导融合蛋白表达，得诱导后菌液的步骤中，所述OD600预设值为0.6-0.8，所述诱导剂为IP
6.根据权利要求2所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，对所述菌体沉淀物进行超声破碎处理，获得包涵体蛋白，对所述包涵体蛋白进行洗涤、溶解、过柱纯化和复性，获得纯LysLP-122裂解酶的具体步骤如下：
7.根据权利要求6所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，在取菌体沉淀物重悬于裂解液，超声破碎、离心，取沉淀，获包涵体的步骤中，所述裂解液为pH＝8.0，浓度20mM Tris-HCl。
8.根据权利要求6所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，在包涵体用包涵体洗涤剂洗涤3-4次，获洗后包涵体的步骤中，所述包涵体洗涤剂由pH＝8.050mM Tris、300mM NaCl含1％Triton X-1141％TritonX-100、2mM EDTA和5mM DTT制成。
9.根据权利要求6所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122的制备方法，其特征在于，在洗后包涵体置于包涵体溶解液过夜溶解，离心取上清液，得溶解后的包涵体的步骤中，所述包涵体溶解液由pH＝8.050mM Tris、300mM NaCl、8M Urea和20mMImidazole制成。
10.一种如权利要求2-8任一所述制备方法制备获得的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶LysLP-122在抑制或杀灭耐甲氧西林金黄色葡萄球菌感染方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122，其特征在于，所述裂解酶lyslp-122的核苷酸序列如seq id no:2所示。
2.一种耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122的制备方法，其特征在于，在步骤s1中，所述表达载体为原核表达载体pet-30a。
4.根据权利要求1所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122的制备方法，其特征在于，所述对重组质粒pet-30a-lyslp-122进行转化和诱导表达，获得菌体沉淀物的具体步骤如下：
5.根据权利要求4所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122的制备方法，其特征在于，所述将菌液按1％的接种量转接至100ml含终浓度为50μg/ml卡那霉素的lb培养液，震荡培养至od600预设值，加入诱导剂后，振摇过夜诱导融合蛋白表达，得诱导后菌液的步骤中，所述od600预设值为0.6-0.8，所述诱导剂为iptg。
6.根据权利要求2所述耐甲氧西林金黄色葡萄球菌噬菌体裂解酶lyslp-122的制备方法，其特征在于，对所述菌体沉淀物进行超声破碎处理，获得包涵体蛋白...
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