【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物的及医学检验的，特别是涉及一种靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用。
技术介绍
1、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，sle)是一种典型的自身免疫性疾病，临床发病率逐年升高，主要累及青年女性，而且后期多合并其他自身免疫性疾病，加大了治疗难度，造成社会与家庭的负担。sle疾病的发生包括环境因素和遗传因素，但患者免疫功能异常是疾病发生的关键。
2、sle是一种自身抗体介导的自身免疫性疾病，约70％患者体内存在抗ds-dnaigg抗体，成为发病和复发的主要致病基础，而这种自身igg抗体的产生离不开cd4+t细胞。
3、cd4+t细胞在sle等自身免疫性疾病中发挥关键作用，不仅参与b细胞免疫反应；而且可分化为促炎性th1和th17细胞，介导组织炎性反应，造成组织损伤。dna与ds-dnaigg抗体形成dna抗ds-dna抗体免疫复合物，在肾脏等器官沉积造成进一步的损伤，从而引发狼疮肾炎，成为sle患者致死的首要原因。
4、研究表明，dna作为sle疾病的启动源，主要来源于凋亡细胞。同时，自身dna诱发sle疾病依赖于cd4+t细胞，当损耗cd4+t细胞后，也从根本上消除了抗ds-dnaigg抗体的产生，以及减缓sle疾病进展。自身dna包括核dna(ndna)和线粒体dna(mtdna)，先前研究发现，在sle患者t细胞中，mtdna显著升高，说明mtdna有更强烈的免疫原性。自身dna会促使效应t细胞的分化和功能，其中经典的dna传感通
5、enpp1又称pc-1，是一种具有核苷酸焦磷酶和二酯活性的ii型跨膜糖蛋白。enpp1在许多组织中表达，对嘌呤信号转导至关重要，在哺乳动物心血管、神经、免疫、肌肉骨骼、激素和血液功能的调节中发挥重要作用。在我们最新的研究中发现，enpp1会特异性地与线粒体dna(mtdna)结合，调控cd4+t细胞的分化和功能。
6、目前，sle患者的治疗主要应用免疫抑制剂治疗，但是大剂量激素及免疫抑制剂的使用会导致明显的不良反应。此外，新型靶向治疗药物的使用目前基本均未达到预期效果或出现严重的非特异性毒性反应。目前对sle发病机制尚不清楚，临床上也有近50年没有在sle疾病靶向治疗方面取得突破性进展，因此，亟需探讨sle发病机制以寻找治疗靶点。
7、因此，关注mtdna对cd4+t细胞分化和功能的影响，尤其是enpp1，将有助于开发sle疾病靶向治疗策略。
技术实现思路
1、本专利技术主要解决的技术问题是提供一种靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，挖掘mtdna调控cd4+t细胞分化异常的机制，基于enpp1靶点，探究enpp1在系统性红斑狼疮中的临床转化价值，提出红斑狼疮靶向治疗新技术。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的一个技术方案是：提供了一种靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，所述系统性红斑狼疮具有cd4+t细胞异常分化和诱导所述cd4+t细胞异常分化的mtdna，所述mtdna存在新的可识别分子enpp1，通过enpp1来调控mtdna诱导的cd4+t细胞的分化，以所述enpp1作为治疗所述系统性红斑狼疮的靶点。
3、可选的，所述enpp1的引物序列为：caaaggtcgctgtttcgagag，tgcacgtctcctggtaatctaaa。
4、可选的，所述mtdna存在识别分子enpp1，包括：
5、用所述mtdna转染健康人的所述cd4+t细胞，进行rna测序并与分子特征数据库msigdb进行交叉分析，得出enpp1、enox1和znf705e上调；
6、用所述mtdna转染健康人的所述cd4+t细胞，检测了所述enpp1、enox1和znf705e的mrna水平，得出所述enpp1在mtdna诱导的cd4+t细胞中选择性升高；
7、提取系统性红斑狼疮患者所述cd4+t细胞，检测所述cd4+t细胞中enpp1的mrna和蛋白表达，得出enpp1的mrna和蛋白水平升高。
8、可选的，通过所述enpp1在mtdna调控所述cd4+t细胞的分化，包括：
9、检测所述enpp1是否与所述mtdna特异性结合；
10、所述enpp1对所述mtdna诱导的cd4+t细胞分化的影响；
11、建立人源化sle小鼠模型，并用所述enpp1的抑制剂enpp1-in-1进行治疗。
12、可选的，检测所述enpp1是否与所述mtdna特异性结合，包括：
13、在健康人和系统性红斑狼疮患者的cd4+t细胞中，所述enpp1与所述mtdna有效特异性结合，系统性红斑狼疮患者的cd4+t细胞中所述enpp1与所述mtdna的结合高于健康人；
14、在健康人的cd4+t细胞中转染mtdna或ndna，所述enpp1始终与所述mtdna有效结合；
15、通过alexafluor 488标记mtdna，通过免疫沉淀实验进一步验证所述enpp1和所述mtdna是特异性结合的。
16、可选的，所述enpp1对所述mtdna诱导的cd4+t细胞分化的影响，包括：用enpp1sirna敲低所述enpp1的表达后，所述mtdna诱导的所述cd4+t细胞向效应t细胞分化减少，而调节性t细胞分化增加。
17、可选的，所述建立人源化sle小鼠模型，包括：利用系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞重建nsg小鼠的免疫系统，尾静脉输入107系统性红斑狼疮患者pbmcs进入nsg小鼠。
18、本专利技术的有益效果是：本专利技术提供的一种靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，通过探索mtdna对cd4+t细胞分化的作用机制，聚焦了新的识别mtdna的分子enpp1，通过enpp1可调控mtdna诱导的cd4+t细胞的分化，以enpp1作为治疗系统性红斑狼疮的靶点，，挖掘系统性红斑狼疮疾病治疗新策略。
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1.一种靶向ENPP1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，所述系统性红斑狼疮具有CD4+T细胞异常分化和诱导所述CD4+T细胞异常分化的mtDNA，其特征在于，所述mtDNA存在新的可识别分子ENPP1，通过所述ENPP1来调控mtDNA诱导的所述CD4+T细胞的分化，以所述ENPP1作为治疗所述系统性红斑狼疮的靶点。
2.根据权利要求1所述的靶向ENPP1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，所述ENPP1的引物序列为：CAAAGGTCGCTGTTTCGAGAG，TGCACGTCTCCTGGTAATCTAAA。
3.根据权利要求1所述的靶向ENPP1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，所述mtDNA存在识别分子ENPP1，包括：
4.根据权利要求1所述的靶向ENPP1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，通过所述ENPP1调控mtDNA诱导的所述CD4+T细胞的分化，包括：
5.根据权利要求4所述的靶向ENPP1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，检测所述ENPP1是否与所述mtDNA特异性结合，包括：
7.根据权利要求3所述的靶向ENPP1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，所述建立人源化SLE小鼠模型，包括：利用系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞重建NSG小鼠的免疫系统，尾静脉输入107系统性红斑狼疮患者PBMCs进入NSG小鼠。
...【技术特征摘要】
1.一种靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，所述系统性红斑狼疮具有cd4+t细胞异常分化和诱导所述cd4+t细胞异常分化的mtdna，其特征在于，所述mtdna存在新的可识别分子enpp1，通过所述enpp1来调控mtdna诱导的所述cd4+t细胞的分化，以所述enpp1作为治疗所述系统性红斑狼疮的靶点。
2.根据权利要求1所述的靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，所述enpp1的引物序列为：caaaggtcgctgtttcgagag，tgcacgtctcctggtaatctaaa。
3.根据权利要求1所述的靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，所述mtdna存在识别分子enpp1，包括：
4.根据权利要求1所述的靶向enpp1在系统性红斑狼疮治疗中的应用，其特征在于，通过所...
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