【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药制剂领域，涉及一种外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒及其制备方法。
技术介绍
1、痛风性关节炎是由尿酸盐结晶沉积于组织、关节等而诱发的炎性疾病，主要表现为反复发作的关节红肿疼痛、功能障碍，严重者可见痛风石、关节畸形和肾功能损害。急性期常用非甾体抗炎药、秋水仙碱或皮质类固醇或多种药物联合治疗，预防和慢性期主要采用减少尿酸的生成或促进尿酸的排泄的策略降低尿酸水平。黄嘌呤氧化酶抑制剂非布司他和别嘌醇通过抑制尿酸生成降低尿酸浓度，但易产生肝损伤和心血管疾病等毒副作用；丙磺舒和苯溴马隆等药物通过抑制肾小管尿酸重吸收，从而促进尿酸排泄以降低尿酸浓度，但长期用药易产生肾损伤等毒副作用。盐酸小檗碱可通过炎症信号级联和介导凋亡缓解痛风炎症，同时能抑制尿酸生成和促进尿酸排泄以降低尿酸，但生物膜渗透性低导致其难以跨膜转运、发挥药效，限制了临床应用。外泌体是细胞间通讯的重要介质，作为药物载体具有可跨越生物膜、避免吞噬系统清除、体外稳定性良好和生物相容性好等优点。将药物制备成不同递送系统，使其更好满足临床需求是目前研究的热点之一。
2、经查询专利及文献，目前尚无盐酸小檗碱/苯溴马隆复方制剂的任何研究报道，尚无活性氧响应性环糊精包裹盐酸小檗碱、苯溴马隆中的一种或两种药物的任何研究报道，尚无活性氧响应性环糊精包裹盐酸小檗碱纳米粒、或苯溴马隆纳米粒、或盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒的任何研究报道。尚无外泌体包裹的活性氧响应性环糊精纳米粒的任何研究报道，尚无外泌体包裹的活性氧响应性环糊精包裹盐酸小檗碱纳米粒、或苯溴马隆纳米粒、或盐酸
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是提供外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒及其制备方法。外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒含有的活性氧响应性环糊精能够实现炎症靶向释药，克服盐酸小檗碱生物膜渗透性低的缺点，降低苯溴马隆的毒性，并通过消除相应氧化物质使细胞免受氧化应激，同时其外层包裹的外泌体具有免疫逃逸能力，能跨越生物膜增加药物吸收和纳米粒稳定性，盐酸小檗碱可以抗炎、抑制尿酸生成、促进尿酸排泄，苯溴马隆可以促进尿酸排泄，两药复方制剂可以安全高效地治疗痛风性关节炎，实现增效减毒。本专利技术提供的外泌体包裹的纳米载药系统制备工艺简单，成本较低，易于控制，易于工业化生产。本研究为盐酸小檗碱/苯溴马隆提供了可供选择的新型制剂，可用于痛风性关节炎和高尿酸血症的治疗。
2、本专利技术提供的一种外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒，其特征在于，包括盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒、外泌体包裹层；所述的外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒包含活性氧响应性环糊精，活性氧响应性环糊精包括以下各组分，其组分质量比为：环糊精80-320份，4-(羟甲基)苯硼酸频哪醇酯40-160份，羰基二咪唑45-180份，4-二甲氨基吡啶15-60份，n,n-二甲基甲酰胺2000-7000份；所述的环糊精包括：羟丙基-α-环糊精、羟丙基-β-环糊精、磺丁基-β-环糊精、β-环糊精、甲基-β-环糊精、羟丁基-β-环糊精、羟丙基-γ-环糊精、磺丁基-γ-环糊精的一种；所述的外泌体包括：牛奶外泌体、羊奶外泌体、兔奶外泌体和其它哺乳动物的奶源外泌体的一种；所述的外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒，包括以下各组分，其组分质量比为：盐酸小檗碱10-100份，苯溴马隆1-10份，活性氧响应性环糊精20-200份，超纯水1000-10000份；所述的一种外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒的制备包括下列步骤：(1)活性氧响应性环糊精的制备方法：将处方量的4-(羟甲基)苯硼酸频哪醇酯、羰基二咪唑醇溶解于二氯甲烷、三氯甲烷、无水乙醇、甲醇、乙醚中的一种或多种溶剂中，得到液体a，20-60℃搅拌0.2-2小时，旋转蒸发，得到白色固体b；将环糊精、4-二甲氨基吡啶和固体b溶解于n,n-二甲基甲酰胺中得到液体c，20-60℃搅拌后得到白色粘稠液体d，置于透析袋中透析8-24小时，取出液体d，离心10-20分钟，收集沉淀e，干燥，得到活性氧响应性环糊精；(2)盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒的制备方法：将处方量盐酸小檗碱、苯溴马隆和步骤(1)得到的活性氧响应性环糊精溶解于二氯甲烷、三氯甲烷、无水乙醇、二甲基亚砜、乙醚中的一种或多种溶剂中，得到黄色液体f，滴加到超纯水中，搅拌0.5-2小时，得到淡黄色液体g，置于透析袋中透析8-24小时，得到盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒；(3)外泌体的制备方法：取牛奶、羊奶、兔奶或其他哺乳动物的奶在2-6℃下以10000-15000g离心20-40分钟，取上清液，2-6℃以80000-120000g离心0.5-2小时，取上清液，2-6℃经100000-150000g离心1-2小时后，收集沉淀，分散于ph 7.4的磷酸盐缓冲液，得到外泌体；(4)将步骤(2)得到的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒与步骤(3)得到的外泌体以体积比1:2至2:1混匀，冰浴超声10-30分钟，得到外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒。
3、本专利技术提供的活性氧响应性环糊精被成功合成，由于羟基的存在，以及活性氧响应性环糊精光谱中羰基(1747cm-1)和苯基(1567cm-1)相关的明显信号的出现，导致在3364cm-1处吸收减弱(图1)。本专利技术提供的外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒平均粒径小于200nm(图2)。本专利技术提供的外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒在活性氧环境下会触发降解，分散液颜色逐渐消失，而在超纯水环境中颜色不变(图3)。本专利技术提供的外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒与外泌体的聚丙酰胺凝胶电泳(sds-page)结果相比较，在各个特征蛋白对应分子大小处，均出现与外泌体相同大小的蛋白条带(图4a)，蛋白免疫印迹实验表明表明外泌体上的特征蛋白cd9(25kda)、cd81(25kda)、tsg101(50kda)、hsc70(70kda)在外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒上发现(图4b)。
4、本专利技术提供的外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒巨噬细胞给药后，在不同浓度的药物组细胞活力均超过90％(图5)，外泌体包裹的盐酸小檗碱/本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒，其特征在于，包括盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒、外泌体包裹层；
【技术特征摘要】
1.一种外泌体包裹的盐酸小檗碱/苯溴马隆纳米粒，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：张景勍，燕雄，刘煜莹，袁誉铭，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：
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