【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，具体涉及一种采用膜吸附的磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒的制备以及应用。
技术介绍
1、随着社会的发展以及经济的增长，环境问题日益突出，尤其是水环境的恶化已经成为了世界范围内高度关注的话题。并且，水环境还是疾病传播的媒介之一，一旦受到污染，可能导致介水传染病在人群的暴发，并造成致畸、致癌、致突变等潜在的健康危害，以及水的感官性状发生变化，从而影响人们的正常生活饮用水，给国民健康及经济安全等造成严重损失。而且，病原体介水传播一旦未被及时防控，将借助水环境广泛传播，导致病情的大规模爆发，据美国《麻省理工学院技术评论》报道在多地废水中均已检测出猴痘病毒，若饮用了受污染的水源可能会导致猴痘病毒的传播，严重威胁公共卫生健康，而且恢复已破坏的生态系统需要投入大量的人力、物力和财力，因此，如何提升水环境治疗效果是需要解决的问题。
2、水环境污染能引起人体的病原体感染，水体病原体主要包括病毒、病原菌、病原原生生物和病原寄生虫等，而且几乎任何水体都含有病原体，病原微生物主要来自受病毒感染的人体，肠道病毒感染的人排遗、排泄等方式进入污水，污水排放后尽管被稀释上千倍，但在水体中仍能检测出，且一定范围内对水产造成不可逆转损失。
3、为了检测水体中的病原体，在专利cn114250316a中公开了一种对养殖塘水土样本中检测病原体的方法，主要提取加入酚-氯仿等有机物质，其试剂使用中酚-氯仿具有毒性以及挥发性，易对实验人员健康造成影响；在专利cn115369096a公开了一种浓缩水中猪源性病毒的方法，主要依靠玻璃棉过滤
技术实现思路
1、针对现有技术的缺陷，本专利技术设计了一种采用膜吸附的磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，还提供了所述试剂盒的提取方法。所述试剂不仅简化了核酸提取过程，还可高效富集提取较大水样中的病毒核酸，灵敏度更高，操作简单。
2、为了实现上述目的，本专利技术解决技术问题采用如下技术方案：
3、一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，所述核酸提取试剂盒包括0.1mm-20mm研磨珠、萃取液、除杂液、裂解结合液、洗涤液1、洗涤液2和洗脱液；
4、所述研磨珠的组分包括氧化锆、不锈钢，用于研磨滤膜水体中杂质，打击破碎微生物细胞。
5、所述萃取液的组分包括离液盐、阴离子表面活性剂及离子螯合剂；所述除杂液的组分包括离液盐、金属螯合剂及缓冲盐；对过滤后样本有着较强的变性作用，可以悬浮颗粒、溶解大部分腐植酸，有利于对下游实验的非dna物质，如腐植酸、蛋白质的沉淀除去效果，减少对下游检测影响。
6、所述裂解结合液的组分包括离液盐、非离子表面活性剂、缓冲盐、醇类、阴离子表面活性剂及离子螯合剂。
7、所述洗涤液1的组分包括离液盐、非离子表面活性剂、缓冲盐及醇类。
8、所述洗涤液2的组分包括缓冲盐及醇类。
9、所述洗脱液的组分包括离子螯合剂与缓冲盐。
10、优选地，所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、高氯酸钠、高碘酸钠、高氯酸锂、碘化钠中的一种或多种，浓度为0.5-6mol/l。
11、优选地，所述阴离子表面活性剂为sds（十二烷基硫酸钠）、sls（十二烷基肌氨酸钠）、tls（十二烷基硫酸三乙醇胺）、sds（十二烷基磺酸钠）、lds（十二烷基硫酸锂）与sdbs（十二烷基苯磺酸钠）中的一种或多种，使用量为0.1%-5%。
12、优选地，所述离子螯合剂为edta（乙二胺四乙酸）、edta·na2（乙二胺四乙酸二钠）、egta【乙二醇双(2-氨基乙基醚)四乙酸】、8-hq（8-羟基喹啉）中一种或多种，使用量为1-50 mmol/l。
13、优选地，所述醇类为乙醇、异丙醇的一种或两种，使用量为10%-100%，可增加核酸沉淀能力，提高核酸灵敏度。
14、优选地，所述缓冲盐为tris-hcl（三羟甲基氨基甲烷盐酸）、mops（3-吗啉丙磺酸）、hepes（4-羟乙基哌嗪乙磺酸）、柠檬酸钠、醋酸钠、醋酸钾、tricine【n-三(羟甲基)甲基甘氨酸】中一种或多种，使用量为0.01%-1%。
15、优选地，所述非离子表面活性剂为peg 200（聚乙二醇200）、peg 600（聚乙二醇600）、np-40（壬基酚聚氧乙烯醚）、triton x-100（曲拉通x-100）、triton x-114（曲拉通x-114）、triton x-305（曲拉通x-305）、tween-20（吐温-20）、tween-80（吐温-80）、brij-58（十六烷基聚氧乙烯醚）、aeo-7【脂肪醇聚氧乙烯醚(n=7)】、aeo-9【脂肪醇聚氧乙烯醚(n=9)】中的一种或多种，使用量为0.1%-10%；有利于对抑制物的祛除，使试剂内其他有效成分发挥出更大作用。
16、进一步优选地，所述萃取液由3mol/l异硫氰酸胍、2%十二烷基硫酸三乙醇胺、10mmol/l柠檬酸钠组成；
17、所述除杂液由2mol/l异硫氰酸胍、4%edta·na2、20mmol/l柠檬酸钠组成；
18、所述裂解结合液由3mol/l异硫氰酸胍、2mol/l高氯酸钠、1%吐温-20、5% peg 200、2%十二烷基硫酸钠、10mmol/l edta·na2和25mmol/l tris-hcl组成；
19、所述洗涤液1由1mol/l盐酸胍、2%吐温-20、25mmol/l edta·na2、15mmol/l tris-hcl和30%异丙醇组成。
20、所述洗涤液2由10mmol/l tris-hcl和80%乙醇组成；
21、所述洗脱液由10mmol/l tris-hcl和0.2mmol/l edta·na2组成。
22、本专利技术还提供了一种水体样本核本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒包括0.1mm-20mm研磨珠、萃取液、除杂液、裂解结合液、洗涤液1、洗涤液2和洗脱液；
2.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、高氯酸钠、高碘酸钠、高氯酸锂、碘化钠中的一种或多种，浓度为0.5-6mol/L。
3.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为SDS、SLS、TLS、SDS、LDS与SDBS中的一种或多种，使用量为0.1%-5%。
4.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述离子螯合剂为EDTA、EDTA·Na2、EGTA、8-HQ中一种或多种，使用量为1-50 mmol/L。
5.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述醇类为乙醇、异丙醇的一种或两种，使用量为10%-100%。
6.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述缓冲盐为T
7.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述非离子表面活性剂为PEG 200、PEG 600、NP-40、Triton X-100、Triton X-114、Triton X-305、Tween-20、Tween-80、Brij-58、AEO-7、AEO-9中的一种或多种，使用量为0.1%-10%。
8.如权利要求1-7所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述萃取液由3mol/L异硫氰酸胍、2%十二烷基硫酸三乙醇胺、10mmol/L柠檬酸钠组成；
9.一种水体样本核酸提取方法，其特征在于，使用权利要求1-8任一项所述的磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒。
10.如权利要求9所述的提取方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述核酸提取试剂盒包括0.1mm-20mm研磨珠、萃取液、除杂液、裂解结合液、洗涤液1、洗涤液2和洗脱液；
2.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述离液盐为异硫氰酸胍、盐酸胍、高氯酸钠、高碘酸钠、高氯酸锂、碘化钠中的一种或多种，浓度为0.5-6mol/l。
3.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述阴离子表面活性剂为sds、sls、tls、sds、lds与sdbs中的一种或多种，使用量为0.1%-5%。
4.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述离子螯合剂为edta、edta·na2、egta、8-hq中一种或多种，使用量为1-50 mmol/l。
5.根据权利要求1所述的一种磁珠法水体病原体核酸提取试剂盒，其特征在于，所述醇类为乙醇、异丙醇的一种或两种，使用量为10%-100%。
6.根据权...
【专利技术属性】
技术研发人员：许锦涛，黄庚锐，谭杰峰，
申请(专利权)人：广州奕昕生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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