【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及海洋多糖，具体涉及一株海洋真菌桔青霉菌penicilliumcitrinum scau 307，以及该菌株发酵产生的胞外多糖其制备方法及其在抗人结直肠癌中的应用。
技术介绍
1、桔青霉(penicillium citrinum)是一种具有广谱抗菌活性的真菌，其粗提物对人类致病菌嗜水气单胞杆菌(aeromonas hydrophila)、大肠杆菌(escherichia coli)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)、粪肠球菌(enterococcus faecalis)、须毛癣菌(trichophyton mentagrophytes)和白色念珠菌(candida albicans)均有抑制作用。
2、目前，对桔青霉(penicillium citrinum)的研究主要集中在其次级代谢产物，例如：杨素梅等从海藻内生真菌penicillium citrinum scsio41402中发现了两个新的化合物sorbicillfuransa和sorbicillfurans b，这两个化合物是含双环[2.2.2]辛烷和四氢呋喃结构的山梨素加合物，其中sorbicillfurans b对人白血病细胞系hl-60有细胞毒作用。杨素梅，海洋来源真菌penicillium citrinum的化学成分及其活性研究，广西科学，2022年，29卷，第4期guangxi sciences，2022，vol.29no.4。或者中国专利cn201910858205.6一株桔青霉及其在生产桔青霉素中的应用，该
技术实现思路
1、为了解决上述的技术问题，本专利技术的第一个目的是提供一株海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)scau307，保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地点广东省广州市天河区先烈中路100号广东省微生物研究所59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no:63135，保藏日期2023年1月12日。
2、本专利技术的海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)scau307是从深圳大亚湾海参样品分离筛选出来的。其真菌分类学表明：scau307接种在琼脂板上，置于28℃环境下培养5～14天，为青灰色近圆形菌落、呈花瓣形，表面些许绒状，边缘相对齐整，易挑取。根据菌落形态结构特征，参照《真菌鉴定手册》和《中国真菌志》进行比对分析，可初步确定菌株scau307为桔青霉属。
3、本专利技术的桔青霉菌(penicillium citrinum)scau307的分类学地位根据下述方法确定：
4、常规方法提取菌株scau307的总dna，扩增菌株的its区域rdna序列，其序列如seqid no.1所示，将该序列在ncbi数据库中进行blast比较分析，并从数据库获得相关种属的its序列，构建系统发育树，如图1所示。经比较分析，本专利技术的菌株scau307属于桔青霉菌属，将其命名为桔青霉菌(penicillium citrinum)scau307，该菌于2023年1月12日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地点广东省广州市天河区先烈中路100号广东省微生物研究所59号楼5楼，保藏编号为gdmcc no:63135。
5、本专利技术的另一个目的提供海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)scau 307在制备胞外多糖中的应用。根据目前文献报道海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)次级代谢产物有生物碱类化合物、聚酮类化合物、萜类化合物和甾体类化合物，但其次级代谢产物为多糖类少有报道，特别是如式1所示的多糖。檀振，两珠海洋真菌次级代谢产物及其抗植物病原真菌活性研究，硕士学位论文，海南师范大学。
6、本专利技术将海洋真菌桔青霉胞外多糖是将海洋桔青霉菌penicillium citrinumscau 307菌株接种至发酵液培养基中发酵，得发酵液，对发酵液除菌体、浓缩、除蛋白、透析、冻干后得粗多糖，粗多糖再经deae52阴离子交换柱分离纯化，得均一多糖pcp。并通过hpgpc测定多糖分子量(mw:重均分子量)和纯度测试，得该海洋真菌桔青霉胞外多糖pcp平均分子量为6514da的均一多糖。并分析了该多糖的单糖组成，通过甲基化、红外光谱和核磁共振图谱分析，确定了该多糖的结构。同时采用cck-8法检测桔青霉胞外多糖对人结直肠癌细胞ht29增殖的影响，认为其具有抗人结直肠癌效果。
7、进一步的，所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖的制备方法，包括如下步骤：
8、(1)海洋桔青霉菌penicillium citrinum scau 307的分离；该海洋桔青霉菌penicillium citrinum，分离自中国广东省深圳市大亚湾(22°30′-22°50′n、114°29′-114°49′e)的海参样品。
9、(2)制备发酵液培养基：所述发酵液组成为：麦芽糖10.0g/l、葡萄糖10.0g/l、甘露醇20.0g/l、l-半胱氨酸0.5g/l、硫酸镁0.5g/l、磷酸二氢钾0.5g/l、玉米浆1.0g/l、酵母膏3.0g/l以及海盐30.0g/l，ph值为6，灭菌，得发酵液培养基；
10、(3)接种培养：将海洋桔青霉penicillium citrinum scau 307接种至步骤(2)发酵液培养基中培养7天，得发酵液；
11、(4)除菌丝体、浓缩：将所述步骤(3)中的发酵液过滤，滤液减压浓缩，得浓缩液；
12、(5)除蛋白：向步骤(4)所述的粗多糖液中加入饱和硫酸铵和等体积叔丁醇，搅拌，离心，取下层溶液，透析，截留分子量3000da的多糖，冻干后得粗多糖；
13、(6)deae5本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株海洋真菌桔青霉菌(Penicillium citrinum)SCAU307，其特征在于：保藏编号为GDMCC NO:63135。
2.海洋真菌桔青霉菌(Penicillium citrinum)SCAU 307的ITSDNA，其特征在于：其序列如SEQ ID NO.1所示。
3.根据权利要求1所述的海洋真菌桔青霉菌(Penicillium citrinum)SCAU 307在制备胞外多糖中的应用。
4.一种海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖PCP为具有式1所示的结构的多糖：
5.根据权利要求4所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋真菌桔青霉胞外多糖PCP的单糖摩尔比组成为葡萄糖96.4％、甘露糖3.1％和甘露糖醛酸0.5％，且胞外多糖PCP平均分子量为6514Da。
6.根据权利要求4所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋真菌桔青霉胞外多糖PCP的糖苷键类型为：→4)-α-Glcp-(1→、α-Glcp-(1→、→4,6)-α-Glcp-(1→、→3)-α-G
7.根据权利要求4所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋真菌桔青霉胞外多糖是将海洋桔青霉菌Penicillium citrinum SCAU 307菌株接种至发酵液培养基中发酵，得发酵液，对发酵液除菌体、浓缩、除蛋白、透析、冻干后得粗多糖，粗多糖再经DEAE52阴离子交换柱分离纯化，得平均分子量为6514Da的均一海洋真菌桔青霉胞外多糖PCP。
8.一种权利要求4-7任意一项所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
9.权利要求1所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖SCAU307在制备抗结直肠癌试剂中的应用。
10.根据权利要求8所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖SCAU307在制备抗结直肠癌试剂中的应用，其特征在于：所述抗结直肠癌试剂为抑制人结直肠癌细胞HT29细胞增殖的试剂。
...【技术特征摘要】
1.一株海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)scau307，其特征在于：保藏编号为gdmcc no:63135。
2.海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)scau 307的itsdna，其特征在于：其序列如seq id no.1所示。
3.根据权利要求1所述的海洋真菌桔青霉菌(penicillium citrinum)scau 307在制备胞外多糖中的应用。
4.一种海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖pcp为具有式1所示的结构的多糖：
5.根据权利要求4所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋真菌桔青霉胞外多糖pcp的单糖摩尔比组成为葡萄糖96.4％、甘露糖3.1％和甘露糖醛酸0.5％，且胞外多糖pcp平均分子量为6514da。
6.根据权利要求4所述的海洋真菌桔青霉胞外多糖，其特征在于：所述海洋真菌桔青霉胞外多糖pcp的糖苷键类型为：→4)-α-glcp-(1→、α-glcp-(1→、→4,6)-α-glcp...
【专利技术属性】
技术研发人员：王宾，赵凝，黄日明，匡维阳，张晓勇，
申请(专利权)人：深圳市中西医结合医院，
类型：发明
国别省市：
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