【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胰岛纯化，具体涉及一种磁珠分离纯化胰岛方法及应用。
技术介绍
1、胰岛移植中，保证供体胰岛的数量和质量是胰岛移植成功的关键；从事糖尿病研究的实验也常常需要胰岛细胞。因此，早在20世纪60年代就已经开始了小动物胰岛分离方法的探索，hellerstrom等曾直接从有高血糖的肥胖小鼠分离胰岛用于检测酶活性，后来用同样的方法分离正常小鼠、大鼠和豚鼠的胰岛。由于胰岛散在分布于胰腺的外分泌组织中，并与周围组织紧密连接，胰岛的分离过程实际上是将其从富含消化酶的腺泡中分离出来。所以无论使用何种方法，都会不可避免地引起胰腺外分泌部的破坏、释放的多种酶影响胰岛的数量和质量。因此，胰岛分离是组织细胞分离中最困难的，而提取胰岛的方法存在缺欠、胰腺缺血时间过长、损伤和胰岛的纯化方法等，都是影响胰岛得率的重要因素。
2、传统的胰岛纯化是借助于连续/不连续梯度密度离心法，其原理是基于胰岛与外分泌腺组织细胞具有不同的密度，即胰岛的密度小于外分泌腺细胞的密度。它的缺点是纯度难以控制，因为外分泌腺细胞污染的胰岛移植后的效果不佳，因此，我们追求高纯度胰岛；另外，ficoll为介质的梯度离心液对胰岛是一种化学物质的刺激，有研究表明，其可以上调促炎因子的表达，从而不利于胰岛初期的定植和功能发挥。
3、为此，本专利技术申请提出基于磁珠原理的磁珠分离纯化胰岛方法及应用，以解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了解决上述问题，提供一种磁珠分离纯化胰岛方法及应用。
3、本专利技术提供了磁珠分离纯化胰岛方法，所述方法通过磁珠分离纯化装置实现，所述磁珠分离纯化装置包括分离纯化结构装置和设置于分离纯化结构出口端正下方的收集装置，所述分离纯化结构包括分液漏斗，分液漏斗的底端外部至连接管的底端外部设有磁场装置；
4、所述方法具体包括以下步骤：
5、s1、将制备的消化细胞悬液由磁珠分离纯化装置的入口处置入，使消化细胞悬液经过分液漏斗并流经外部具有磁场的连接管，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，消化细胞悬液中的胰岛外分泌腺由于磁珠原理被吸附富集于连接管内壁，消化细胞悬液中的含胰岛细胞的液体经过连接管流出至收集装置中；
6、s2、待消化细胞悬液完全经过连接管出口端后，将流入至收集装置内含胰岛细胞的液体清洗收集，实现胰岛分离纯化；
7、s3、去除磁场，然后由分液漏斗入口处进行冲洗工作，将被吸附富集于连接管内壁的胰岛外分泌腺冲洗至另一收集装置中，实现cd99抗体偶联磁珠再利用。
8、进一步地，所述步骤s1中，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，先控制连接管出口封闭，待消化细胞悬液在分离纯化结构静置一段时间，然后打开连接管出口使消化细胞悬液由连接管出口端流出。
9、进一步地，所述磁场装置为包裹连接管的永磁体材料。
10、进一步地，所述cd99抗体用于选择胰岛和胰岛外分泌腺。
11、本专利技术还提供了上述所述的磁珠分离纯化胰岛方法的应用，将所述方法应用于胰岛功能的研究及治疗糖尿病胰岛细胞的制备。
12、本专利技术解决技术问题的难度及意义在于：
13、胰岛的体积仅占全部胰岛腺组织的1％-2％，胰岛包括以下几种细胞：a(或α2)细胞、b(或β)细胞、d(或δ或α1)细胞和pp细胞，其中，b(或β)细胞占一个胰岛的80％。胰岛是一个直径为50μm-200μm/300μm的球体(类球体)，由于胰岛b细胞位于胰岛外围，胰岛a细胞位于胰岛内层，胰岛b细胞表达cd99，胰岛a细胞表达cd9-/cd99-，外腺细胞表达cd9+/cd99+。如何从浩瀚的外分泌腺细胞中像大海捞针一样将胰岛分离出来呢？由于cd99+抗体能够与磁珠功能识别并与胰岛外分泌腺特异性结合，本专利技术方案提出了磁珠原理，即通过磁场的磁珠的吸附原理，实现胰岛的分离纯化，提高胰岛纯化的纯度，且对胰岛的功能无影响。
14、与现有技术相比，本方案的有益效果：
15、1、本专利技术的基于磁珠原理的分离纯化胰岛方法，能够克服传统的离心法的分离纯化难以控制纯度的问题，能够控制并提高分离纯化胰岛的纯度，且本专利技术的方法规避了现有方法中以ficou为介质的梯度离心液对胰岛的化学刺激，确保了分离纯化后的胰岛的功能不受影响。
16、2、本专利技术的方法操作容易，分离纯化工序简单，cd99抗体偶联磁珠可重复利用，耗时明显缩短，便于广泛推广应用。
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1.磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述方法通过定制抗体CD99偶联磁珠和分离纯化装置实现，所述磁珠分离纯化装置包括分离纯化结构和设置于分离纯化结构出口端正下方的收集装置，所述分离纯化结构包括分液漏斗，分液漏斗的底端外部至连接管的底端外部设有磁场装置；
2.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述步骤S1中，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，先控制连接管出口封闭，待消化细胞悬液在分离纯化结构静置一段时间，然后打开连接管出口使消化细胞悬液由连接管出口端流出。
3.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述磁场装置为包裹连接管的永磁体材料。
4.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述CD99抗体用于选择胰岛和胰岛外分泌腺。
5.如权利要求1-4任意一项所述的磁珠分离纯化胰岛方法的应用，其特征是：所述方法应用于胰岛功能的研究及治疗糖尿病移植胰岛细胞的制备。
【技术特征摘要】
1.磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述方法通过定制抗体cd99偶联磁珠和分离纯化装置实现，所述磁珠分离纯化装置包括分离纯化结构和设置于分离纯化结构出口端正下方的收集装置，所述分离纯化结构包括分液漏斗，分液漏斗的底端外部至连接管的底端外部设有磁场装置；
2.如权利要求1所述的磁珠分离纯化胰岛方法，其特征是：所述步骤s1中，消化细胞悬液经过外部具有磁场的连接管过程中，先控制连接管出口封闭，待消化细胞悬液在分离纯化结构...
【专利技术属性】
技术研发人员：张雷，
申请(专利权)人：连云港市第一人民医院，
类型：发明
国别省市：
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