【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物领域，具体涉及一株对氧气具有耐受性的产气荚膜梭菌及其应用。
技术介绍
1、产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)属于革兰氏阳性菌，厌氧生长，在有氧气的条件下不能生长，且会很快死亡。因此，需要在厌氧培养箱中进行培养。该菌可引起禽类的坏死性肠炎，通常的治疗方法为使用抗生素，但是随着细菌耐药性的产生及国家出台了替抗减抗的号召，噬菌体日益被人们重视起来。
2、但是在生产产气荚膜梭菌噬菌体之前，要将宿主菌产气荚膜梭菌培养良好才行，而产气荚膜梭菌的发酵主要依靠控制严格的厌氧环境，一旦发酵的过程中有空气的混入，那么就会引起发酵的失败。
3、因此，提供一种对氧气具有耐受性的产气荚膜梭菌菌株，对于保障大规模生产产气荚膜梭菌噬菌体具有重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术旨在针对现有技术的不足，为了解决产气荚膜梭菌噬菌体发酵过程中需要严格厌氧的问题，提供一株对氧气具有耐受性的产气荚膜梭菌及其应用。
2、本专利技术的第一个目的在于筛选出一株对氧气具有一定耐受性的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，丰富了菌种资源，为研究开发产气荚膜梭菌噬菌体奠定了基础。
3、本专利技术的第二个目的在于提供一种产气荚膜梭菌作为宿主菌在无氧或含氧条件下进行生产噬菌体的应用。
4、本专利技术的第三个目的在于提供一种噬菌体的生产方法。
5、本专利技术上述目的通过以下技术方案实现：
6、一株产气荚膜梭
7、如上所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，该菌株具有对氧气的耐受能力。
8、如上所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，该菌株在有氧条件下或者微氧的条件下具有活性。该菌株在有氧条件下放置24h该菌依然有活性，可以复苏成功，另外，该菌株在微氧条件下，菌种密度为1×108～6×108cfu/ml。优选的，该菌株在微氧条件下，菌种密度为3.9×108cfu/ml。本专利技术中，有氧条件是指将菌种放在普通培养箱中，不隔离氧气的条件下培养；微氧条件是指将菌种放在2.5l厌氧培养罐中然后加入1个微氧产气袋提供8％-9％的氧气和7％-8％的二氧化碳，以此保证去除大部分氧气，保留微量氧气的条件下培养。
9、基于同一个专利技术构思，本专利技术还提供了一种如上所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556作为宿主菌在无氧或含氧条件下进行生产噬菌体的应用。
10、基于同一个专利技术构思，本专利技术还提供了一种噬菌体的生产方法，使用如上所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556生产噬菌体，包括以下步骤：
11、s1.首先进行菌种活化，取保存的菌种，于血平板上进行平板划线，置于40～50℃厌氧培养箱中培养，复苏产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，接着再制备菌悬液复苏噬菌体；
12、s2.然后制备实验室种子液，将气荚膜梭菌菌株bcp-23556及噬菌体转接到培养基中培养；
13、s3.最后放大生产，待灭菌后发酵罐中培养基温度降到30～50℃时，将实验室种子液转接到发酵罐中扩大培养，待发酵结束后，通过双层平板法测定发酵液噬菌体效价，即得大规模高效价的产气荚膜梭菌噬菌体。
14、如上所述的一种噬菌体的生产方法，所述步骤s3中扩大培养的条件为：发酵罐的溶氧控制为0，罐压为0.03～0.05mpa，转速为30～50pm，培养5～8小时。优选的，所述步骤s3中扩大培养的条件为：发酵罐的溶氧控制为0，罐压为0.03mpa，转速为50pm，培养6小时。
15、如上所述的一种噬菌体的生产方法，其特征在于，所述步骤s3中所得的产气荚膜梭菌噬菌体的效价大于109pfu/ml。优选的，所述步骤s3中所得的产气荚膜梭菌噬菌体的效价为1×1011～2×1011pfu/ml。
16、本专利技术的有益效果是：
17、1、本专利技术提供的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，对氧气具有很好的耐受性，微量氧气存在的条件下，菌种密度可达到3.9×108cfu/ml。
18、2、本专利技术提供的噬菌体的生产方法，将该产气荚膜梭菌菌株bcp-23556应用到产气荚膜梭菌噬菌体生产的过程中去，既解决了发酵过程中需要严格厌氧的环境，降低了发酵时的生产条件，提高发酵的成功率，又保证了噬菌体效价的合格。
19、3.本专利技术提供的噬菌体的生产方法，降低了对生产设备和生产过程的厌氧需求，大大降低了生产成本。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一株产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)菌株BCP-23556，其特征在于，该菌株于2023年11月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC NO.29174。
2.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌菌株BCP-23556，其特征在于，该菌株具有对氧气的耐受能力。
3.根据权利要求2所述的产气荚膜梭菌菌株BCP-23556，其特征在于，该菌株在有氧条件下或者微氧的条件下具有活性。
4.根据权利要求3所述的产气荚膜梭菌菌株BCP-23556，其特征在于，该菌株在微氧条件下，菌种密度为1×108～6×108CFU/mL。
5.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌菌株BCP-23556作为宿主菌在无氧或含氧条件下进行生产噬菌体的应用。
6.一种噬菌体的生产方法，其特征在于，使用如权利要求1所述的产气荚膜梭菌菌株BCP-23556生产噬菌体，包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述的一种噬菌体的生产方法，其特征在于，所述步骤S3中扩大培养的条件为：发酵罐的溶
8.根据权利要求6所述的一种噬菌体的生产方法，其特征在于，所述步骤S3中所得的产气荚膜梭菌噬菌体的效价大于109PFU/mL。
9.根据权利要求6所述的一种噬菌体的生产方法，其特征在于，所述步骤S3中所得的产气荚膜梭菌噬菌体的效价为1×1011～2×1011PFU/mL。
...【技术特征摘要】
1.一株产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)菌株bcp-23556，其特征在于，该菌株于2023年11月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：cgmcc no.29174。
2.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，其特征在于，该菌株具有对氧气的耐受能力。
3.根据权利要求2所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，其特征在于，该菌株在有氧条件下或者微氧的条件下具有活性。
4.根据权利要求3所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-23556，其特征在于，该菌株在微氧条件下，菌种密度为1×108～6×108cfu/ml。
5.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌菌株bcp-2...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，马如霞，王卿君，白静，
申请(专利权)人：青岛润达生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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