【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种taq dna聚合酶突变体及其应用，属于pcr。
技术介绍
1、pcr技术由kary mullis于1988年首创，是一种应用十分广泛的体外扩增dna技术。自问世以来，已扩展到各个领域。在临床疾病诊断发挥了重大作用。pcr反应主要依赖于dna聚合酶，最初使用的dna的酶是来源于大肠杆菌聚合酶的klenow片段，此酶不耐热，每扩增一个反应需要开盖添加一次酶，极不方便。
2、1969年在美国黄石国家森林公园火山温泉中分离得到一种水生栖热菌(thermusaquaticus)yt-1，它耐受高温，适宜生长在70℃-75℃极富含矿物质的环境中。1976年，a.chien从中分离纯化到了耐热的taq dna聚合酶(简称，taq酶)。这种酶非常适合pcr技术，可使pcr过程实现自动连续循环，大大提高pcr的效率。
3、1992年，higuchi等人开发了实时pcr(qpcr)。这种增强的pcr方法通过荧光染料或荧光共振能量转移探针实时检测反应过程中形成的产物量。实时pcr使反应中dna的起始量和整个过程中dna的产生量实现可视化。与一般的培养方法相比，实时pcr的检测方法在速度、特异性、灵敏度等多方面具有明显的优势，现已大规模应用于检测市场。
4、实时pcr非常依赖taq dna聚合酶，taq dna聚合酶的性能很大部分决定检测试剂的性能好坏。野生型taq dna聚合酶在结构上的缺陷，使其在许多应用领域受到限制。一种本身具有热启动功能、耐抑制物的taq酶非常具有临床应用价值。具有热启动功
5、现有的一些突变taq dna聚合酶具有以上热启动功能、耐抑制物优势，但是，在进一步实验过程中发现此突变taq dna聚合酶具有37℃热稳定性差、酶比活力低等关键性缺陷，导致无法应用于临床检测。
技术实现思路
1、本专利技术提供了一种taq dna聚合酶突变体及其应用，可以有效解决上述问题。
2、本专利技术是这样实现的：
3、一种taq dna聚合酶突变体，其氨基酸的序列如seq id no:4。
4、在一些实施例中，所述的taq dna聚合酶突变体的核苷酸的序列如seq id no:8所示。
5、在一些实施例中，所述的taq dna聚合酶突变体为野生型taq dna聚合酶发生r536n、i707l、e708q位点突变而成。
6、一种核酸，包括上述的taq dna聚合酶突变体的核苷酸序列。
7、一种表达载体，其能表达上述的taq dna聚合酶突变体。
8、一种重组细胞，其包括上述的表达载体。
9、一种qpcr反应试剂，其包括上述的重组taq dna聚合酶突变体。
10、一种试剂盒，包括上述的重组taq dna聚合酶突变体或上述的核酸。
11、一种pcr方法，将如上述的taq dna聚合酶突变体应用于pcr。
12、在一些实施例中，所述的pcr方法为qpcr。
13、本专利技术的有益效果是：
14、本专利技术提供一种taq dna聚合酶的突变体，具有热启动功能和耐抑制物优势，同时具有37℃热稳定性、比活力高的特点，有利于taq dna的大规模的临床应用。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种Taq DNA聚合酶突变体，其特征在于，其氨基酸的序列如SEQ ID NO:4。
2.根据权利要求1所述的Taq DNA聚合酶突变体，其特征在于，其核苷酸的序列如SEQID NO:8所示。
3.根据权利要求1所述的Taq DNA聚合酶突变体，其特征在于，其为野生型Taq DNA聚合酶发生R536N、I707L、E708Q位点突变而成。
4.一种核酸，其特征在于，包括权利要求1至3任一项所述的Taq DNA聚合酶突变体的核苷酸序列。
5.一种表达载体，其特征在于，其能表达权利要求1至3任一项所述的Taq DNA聚合酶突变体。
6.一种重组细胞，其特征在于，其包括权利要求5所述的表达载体。
7.一种PCR反应试剂，其特征在于，其包括权利要求1至3任一项所述的重组Taq DNA聚合酶突变体。
8.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1至3任一项所述的重组Taq DNA聚合酶突变体或权利要求4所述的核酸。
9.一种PCR方法，其特征在于，将如权利要求1至3任一项所述的Taq DNA聚合
10.根据权利要求9所述的PCR方法，其特征在于，所述的PCR方法为qPCR。
...【技术特征摘要】
1.一种taq dna聚合酶突变体，其特征在于，其氨基酸的序列如seq id no:4。
2.根据权利要求1所述的taq dna聚合酶突变体，其特征在于，其核苷酸的序列如seqid no:8所示。
3.根据权利要求1所述的taq dna聚合酶突变体，其特征在于，其为野生型taq dna聚合酶发生r536n、i707l、e708q位点突变而成。
4.一种核酸，其特征在于，包括权利要求1至3任一项所述的taq dna聚合酶突变体的核苷酸序列。
5.一种表达载体，其特征在于，其能表达权利要求1至3任一项所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：周斌，陈胜男，李旸欣，杨萍萍，李萌萌，邱丽萍，王雅莹，章永垒，
申请(专利权)人：厦门康基生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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