【技术实现步骤摘要】
技术介绍
0、技术背景
1、疼痛是寻求医疗救助最常见的症状之一，并且是所有求医患者的一半的主要疾病。尽管存在许多疼痛药物并得到广泛使用，对于疼痛尤其是慢性疼痛的消除仍然未获成功。因此，社会的负担依然高昂。据多项研究评价，疼痛导致每年5千万工作日损失和612亿美元的生产力损失。对于慢性疼痛罹患者而言，仅有约一半能以可用的处方治疗选择来管控疼痛。并且，总的处方疼痛药物市场约为每年250亿美元。如这些数据所提示的，对于安全有效的新镇痛药的巨大需求依然存在。
2、降低分泌的神经生长因子(ngf或β-ngf)的组织水平或抑制其效果的治疗剂正是具有成为此种新镇痛药的潜力。ngf在神经系统发育中起着众所周知的关键作用；然而，ngf还是公认的疼痛靶标，因为其在动物和人中引起疼痛。具体而言，在成人中ngf促进一部分中枢和周围神经元的健康和生存(huang&reichardt,ann.rev.neurosci.24:677-736(2001))。ngf还有助于这些神经元的功能特性的调整(modulation)并对痛感受体(称为伤害性感受器(nociceptor))的敏感性或兴奋性发挥紧张控制(tonic control)(priestley等,can.j.physiol.pharmacol.80:495-505(2002)；bennett,neuroscientist 7:13-17(2001))。伤害性感受器感觉到各种引发疼痛知觉的伤害性刺激并将其传递至中枢神经系统(伤害感受)。ngf受体定位在伤害性感受器上。n
3、ngf的皮下注射本身在人和动物产生疼痛。注射的ngf引起快速热痛觉过敏，然后是延迟的热痛觉过敏和机械异常性疼痛(allodynia)(petty等,ann.neurol.36:244-46(1994)；mcarthur等,neurology 54:1080-88(2000))。内源性分泌的ngf是类似地促伤害感受性的(pro-nociceptive)。组织损伤诱导的ngf释放及其随后的在周围的作用，通过“周围致敏作用”的过程在热痛觉过敏的诱导中其主要作用(mendell&arvanian,brainres.rev.40:230-39(2002))。组织损伤促进促伤害感受性细胞因子和促炎性细胞因子的释放，其转而诱导ngf从角质形成细胞和成纤维细胞释放。这种释放的ngf直接作用于伤害性感受器上，在伤害性侵犯数分钟内诱导疼痛或伤害感受性状态。因此，ngf在前馈释放中还间接作用诱导并维持伤害感受性/疼痛状态。其诱发肥大细胞脱颗粒作用，释放促伤害感受性剂如组胺和血清素，以及更重要的是释放更多的ngf，并且还能刺激交感神经末梢释放促伤害感受性神经递质，如去甲肾上腺素(ma&woolf,neuroreport.8:807-10(1997))。
4、ngf的组织水平在注射了完全弗氏佐剂(cfa)和角叉菜胶(carrageenan)的动物中是升高的(ma&woolf,neuroreport.8:807-10(1997)；amann&schuligoi,neurosci.lett.278:173-78(2000))。在大鼠中，ngf增强drg(背根神经节)辣椒素(capsaicin)响应。在罹患类风湿性关节炎(aloe&tuveri,clin.exp.rheumatol.15:433-38(1997))或膀胱炎(lowe等,br.j.urol.79:572-77(1997))的患者中记录到了提高的ngf水平。在啮齿类动物中，周围神经损伤增加巨噬细胞、成纤维细胞、和施旺细胞(schwanncell)中的ngf mrna的表达(heumann等,j.cell biol.104:1623-31(1987))。在神经损伤后，转基因小鼠中ngf的过表达导致了高于野生型小鼠的增强的神经性疼痛行为(ramer等,pain,supp.6:s111-20(1998))。在数小时和15天后，升高的ngf水平在促进“中枢致敏作用”(脊髓的伤害感受性途径中突触处神经传递的增强)中起作用。中枢致敏作用导致持续且慢性的痛觉过敏和异常性疼痛。这个过程被认为涉及ngf与其高亲和力受体，酪氨酸受体激酶a(trka)的复合体的内化。这些复合体在drg中向伤害性感受器细胞体的逆向运输增强脊髓背角(dorsal horn)中伤害感受性神经肽(例如p物质、或降钙素基因相关肽(cgrp))的分泌、蛋白激酶c(pkc)活化、和n-甲基-d-天冬氨酸(nmda)受体活化(sah等,nat.rev.drugdisc.2:460-72(2003))——所有促进伤害感受性途径的致敏作用的过程。ngf还在电压依赖性离子通道和配体门控离子通道的上调和重分布中起作用，包括钠通道亚型和辣椒素受体，瞬时受体电位阳离子通道亚家族v成员1(trpv1)(mamet等,j.biol.chem.278:48907-13(1999)；fjell等,j.neurosci.res.57:39-47(1999)；priestley等,can.j.physiol.pharmacol.80:495-505(2002))。递质、受体、和阳离子通道的改变的活性和/或表达是神经性疼痛相关的伤害性感受器的增加的敏感性和兴奋性的基础。
5、ngf诱导的伤害感受/疼痛是由高亲和力ngf受体trka(酪氨酸受体激酶a)所介导的(sah,等,nat.rev.drug disc.2:460-72(2003))。drg中约40-45％的伤害性感受器细胞体表达trka。这些是小直径纤维或c-纤维的细胞体，其表达分泌的促伤害感受性肽、p物质和cgrp。这些纤维末端是背角的i层或ii层，其中它们将周围伤害性感受器所感觉到的伤害性刺激传递至中枢神经系统。在人(indo,clin.auton.res.12(supp 1):i20-i32(2002))和在trka敲除小鼠(de castro等,eur.j.neurosci.10:146-52(1998))中trka基因中的突变或删除产生特征为痛觉丧失的表型。值得关注的是，在处于关节炎(pozza等,j.rheumatol.27:1121-27(2000))或膀胱炎疼痛(qiao&vizzard,j.comp.neurol.454:200-11(2002))模型的动物中或处于炎性疼痛(其由注射cfa或角叉菜胶入爪中所诱导)的动物(cho等,brain res.716:197-201(1996))中trka的表达是上调的。
6、ngf还结合至p75神经营养蛋白受体(p75ntr)。p75ntr的作用取决于其细胞环境和其他受体的存在，据信所述其他受体起辅助受体或共同受体的功能。trka和p75ntr的相互作用导致对ngf的高亲和力结合位点的形成。此类受体相互作用在ngf介本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种结合分子，其包含NGF拮抗剂域和TNFα拮抗剂域。
2.权利要求1的结合分子，其中所述NGF拮抗剂是抗NGF抗体或其抗原结合片段。
3.权利要求2的结合分子，其中所述抗NGF抗体或其片段包含抗体VH域和抗体VL域，所述抗体VH域包含一组CDR，即HCDR1、HCDR2、HCDR3，所述抗体VL域包含一组CDR，即LCDR1、LCDR2、和LCDR3，其中
4.权利要求3的结合分子，其中所述抗NGF抗体或其片段包含VH和/或VL，所述VH具有与SEQ ID NO:3的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或99％相同的氨基酸序列，所述VL具有与SEQ ID NO:7的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或99％相同的氨基酸序列。
5.权利要求3的结合分子，其中所述抗NGF抗体或其片段包含VH和/或VL，所述VH具有与SEQ ID NO:94的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或99％相同的氨基酸序列，所述VL具有与SEQ ID NO:95的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或99％相同的氨基酸
6.权利要求1-5中任一项的结合分子，其中所述TNFα拮抗剂包含可溶的、TNFR的TNFα结合片段。
7.权利要求6的结合分子，其中所述TNFα拮抗剂包含SEQ ID NO:13中所示的氨基酸序列或其功能性片段。
8.一种分离的多核苷酸，其编码权利要求1-7任一项的结合分子。
9.一种药物组合物，其包含权利要求1-7任一项的结合分子，以及药学上可接受的赋形剂。
10.根据权利要求1-7任一项的结合分子或根据权利要求9的组合物在制备用于治疗疼痛的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.一种结合分子，其包含ngf拮抗剂域和tnfα拮抗剂域。
2.权利要求1的结合分子，其中所述ngf拮抗剂是抗ngf抗体或其抗原结合片段。
3.权利要求2的结合分子，其中所述抗ngf抗体或其片段包含抗体vh域和抗体vl域，所述抗体vh域包含一组cdr，即hcdr1、hcdr2、hcdr3，所述抗体vl域包含一组cdr，即lcdr1、lcdr2、和lcdr3，其中
4.权利要求3的结合分子，其中所述抗ngf抗体或其片段包含vh和/或vl，所述vh具有与seq id no:3的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或99％相同的氨基酸序列，所述vl具有与seq id no:7的氨基酸序列至少80％、85％、90％、95％或99％相同的氨基酸序列。
5.权利要求3的结合分子，其中所述抗ngf抗体或其片段包...
【专利技术属性】
技术研发人员：D·斯科菲尔德，M·A·斯利曼，I·P·切赛尔，J·哈彻，D·洛，
申请(专利权)人：麦迪穆有限责任公司，
类型：发明
国别省市：
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