【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药，具体涉及一种抗幽门螺杆菌口服制剂及其制备方法。
技术介绍
1、幽门螺杆菌(helicobacter pylori，hp)是一种常见的胃部细菌，它可以引起胃炎、胃溃疡和胃癌等疾病。幽门螺杆菌感染是范围广且常见的健康问题，在人群中的检出率在20-80%之间，因此，研发抗幽门螺杆菌口服制剂成为一项重要的研究领域。传统的抗幽门螺杆菌治疗方法通常是使用抗生素，如克拉霉素、阿莫西林和呋喃妥因等，与质子泵抑制剂(ppi)联合使用。然而，这些治疗方法存在一些问题。首先，抗生素的使用可能导致耐药性的产生，使治疗效果降低。其次，抗生素还可能引起一些不良反应。因此，寻找新的抗幽门螺杆菌口服制剂具有重要的临床意义。含抗体或抗体等成分的生物制剂，可利用特异性识别能力，直接作用于幽门螺杆菌，从而达到治疗的目的，口服可以减少患者注射给药的不适感和疼痛，提高了患者的遵从性和治疗依从性。同时此类制剂针对幽门螺杆菌的特定抗原或蛋白质结构设计，具有高度特异性，可以精确地靶向幽门螺杆菌，减少对人体正常菌群的干扰。相对于抗生素治疗，不容易导致幽门螺杆菌的耐药性产生，副作用少。有望成为幽门螺杆菌感染治疗的有效方法。然而，口服含抗体或抗体等成分的生物制剂，可能引发免疫反应，包括过敏反应和免疫复合物病等，导致治疗效果的降低或不良反应的发生；也可能出现耐药性问题；减弱治疗效果；在胃酸等不利环境中的稳定性较低，无法保持较高的生物活性。因此，如何提供一种稳定性强、治疗效果好的抗幽门螺杆菌口服制剂是亟待解决的技术问题。
技术实现思路b>
1、针对现有技术的不足，本专利技术提出了一种抗幽门螺杆菌口服制剂及其制备方法。本专利技术采用预处理剂、岩藻糖和木糖醇协同增效，制得预处理抗幽门螺杆菌抗体，可以改变抗体的蛋白空间结构，有效提高抗体的稳定性，保持较高的生物活性，提高幽门螺杆菌感染的治疗效率。本专利技术制备了三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑，与预处理抗幽门螺杆菌抗体协同增效，互为补充，有效治疗幽门螺杆菌感染。本专利技术制备了脂质体，包裹预处理抗幽门螺杆菌抗体，可以显著提高贮存的稳定性，又能使脂质体中的抗体持续释放，延长抗体在体内的滞留时间，提高生物利用度，达到高效、长效的目的。本专利技术将脂质体和三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑偶联，减弱或消除免疫原性、抗原性和毒性，增强了治疗效果。本专利技术制得的抗幽门螺杆菌口服制剂，能够在不使用抗生素的情况下治愈幽门螺杆菌感染，既提高了治愈率，又消除了使病原体产生耐药性和愈后复发的潜在性，同时大大降低了不良反应率。
2、本专利技术是通过以下技术方案实现的：
3、一种抗幽门螺杆菌口服制剂，包括以下原料：预处理抗幽门螺杆菌抗体、三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑。
4、进一步地，所述预处理抗幽门螺杆菌抗体的制备方法，包括以下步骤：
5、(1) 用接种环从幽门螺杆菌平板上将菌膜刮入冰浴pb缓冲液中，至浓度为109cfu/ml，pb缓冲液浓度为0.05 mol/l，ph 7.2，150 w超声15 min，4℃、8000 g离心30min，取上清，得到超声抗原液，将超声抗原液与尿素酶按照12:1的质量比混合，加入等体积弗氏完全佐剂或弗氏不完全佐剂，50 hz的速度匀浆5 min，得到免疫原；
6、(2) 取步骤(1)与弗氏完全佐剂制得的免疫原于蛋鸡的翼腹四处的肌肉内注射，每个位点250 μl，首次注射后每隔2周用不完全佐剂制成的免疫原进行3次加强注射，注射方法同第一次；
7、(3) 收集免疫1个月后所产鸡蛋，清水洗净蛋壳，75vol%的酒精溶液擦拭消毒，去蛋清留蛋黄，用针头刺破蛋黄，将蛋黄液转移到量筒中，加入蛋黄液10倍体积的双蒸水，混匀后用1 mol/l的醋酸溶液调ph值至4.8-5.5，-20℃过夜，室温解冻，4℃下12000 r/min离心30 min，将上清液用滤纸过滤，加入硫酸铵晶体至浓度为19wt%，静置1 h后，再次于4℃下12000 r/min离心15 min，得到沉淀1；
8、(4) 将步骤(3)所得沉淀1与pbs溶液混合，沉淀1与pbs的质量体积比为1 g:15ml，再加入硫酸铵晶体至浓度为14wt%，静置1 h后，于4℃下12000 r/min离心15 min，得到沉淀2；
9、(5) 将步骤(4)所得沉淀2与pbs溶液混合，沉淀2与pbs的质量体积比为1 g:10ml，加入质量比为1:1.2的岩藻糖和木糖醇，岩藻糖与pbs溶液的质量比为1 g:8 ml，180rpm搅拌30-40 min后，加入预处理剂，预处理剂的加入量为0.1 g/ml，放入摇床内，25℃、50r/min下震荡40-50 min，用双蒸水透析14 h，过0.22 μm滤膜，冷冻干燥，得到预处理抗幽门螺杆菌抗体。
10、进一步地，步骤(1)所述幽门螺杆菌平板的制备方法为：将购自中国典型培养物保藏中心，编号cctcc ab 2018334的幽门螺杆菌活化后，采用接种环密集涂布的方式接种于哥伦比亚琼脂培养基上，10% co2、5% o2、85% n2，37℃培养3天。
11、进一步地，步骤(4)和步骤(5)所述pbs溶液浓度为0.01 mol/l，ph值为7.4。
12、进一步地，步骤(5)所述预处理剂的制备方法为：将棕榈酸甲酯、山梨酸与80vol%的乙醇溶液按照1 g:0.7 g:15 ml的比例混合得到混合液1，将圣草酚与1 mol/l的碳酸氢钠溶液以1 g:20 ml的比例混匀，得到混合液2，将混合液1和混合液2等体积混合，200 rpm、25℃下搅拌1-1.5 h，10-3 mpa、60℃下浓缩至原体积的20%，喷雾干燥，制得预处理剂。
13、进一步地，所述三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑的制备方法，包括以下步骤：
14、i. 将三氟乙酸、3-氨基苯硫酚和4-二甲氨基吡啶按照10:13:11的质量比，加入dmf中，三氟乙酸与dmf的质量体积比为1 g:30 ml，在28-35℃下，通入氮气，180 rpm搅拌3-4 h，得到反应混合物i；
15、ii. 向步骤i所得反应混合物i中加入4-氯甲基咪唑，4-氯甲基咪唑与反应混合物i的质量体积比为1 g:35 ml，在冰水浴下180 rpm搅拌2-3 h，升温至35℃反应30-40 min，用20wt%的乙酸调节ph值至6，加入与反应混合物i等体积的冰水，抽滤后得到沉淀i；
16、iii. 将步骤ii所得沉淀i加入95vol%的乙醇溶液中，沉淀i与乙醇溶液的质量体积比为1 g:10 ml，200 rpm搅拌30 min，控制温度在10-20℃，以0.5 ml/s的速度加10wt%的双氧水溶液，双氧水溶液与沉淀i的质量比为1:3，加完后加入与乙醇溶液等体积的超纯水，过滤后用饱和碳酸钠、丙酮、去离子水依次分别洗涤3次，40℃下烘干，得到三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑。
17、本专利技术还提供了所述抗幽门螺杆菌口服制剂的制备方法，包括以下步骤：
18、s1：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，包括以下原料：预处理抗幽门螺杆菌抗体、三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑；
2. 根据权利要求1所述的一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，步骤(1)所述幽门螺杆菌平板的制备方法为：将购自中国典型培养物保藏中心，编号CCTCC AB 2018334的幽门螺杆菌活化后，采用接种环密集涂布的方式接种于哥伦比亚琼脂培养基上，10% CO2、5%O2、85% N2，37℃培养3天。
3. 根据权利要求2所述的一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，步骤(4)和步骤(5)所述PBS溶液浓度为0.01 mol/L，pH值为7.4。
4. 根据权利要求3所述的一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，步骤(5)所述预处理剂的制备方法为：将棕榈酸甲酯、山梨酸与80vol%的乙醇溶液按照1 g:0.7 g:15 mL的比例混合得到混合液1，将圣草酚与1 mol/L的碳酸氢钠溶液以1 g:20 mL的比例混匀，得到混合液2，将混合液1和混合液2等体积混合，200 rpm、25℃下搅拌1-1.5 h，10-3 MPa、60℃下浓缩至原体积
5.一种如权利要求1-4任一项所述的一种抗幽门螺杆菌口服制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，包括以下原料：预处理抗幽门螺杆菌抗体、三氟乙酰胺-苯亚磺酰基咪唑；
2. 根据权利要求1所述的一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，步骤(1)所述幽门螺杆菌平板的制备方法为：将购自中国典型培养物保藏中心，编号cctcc ab 2018334的幽门螺杆菌活化后，采用接种环密集涂布的方式接种于哥伦比亚琼脂培养基上，10% co2、5%o2、85% n2，37℃培养3天。
3. 根据权利要求2所述的一种抗幽门螺杆菌口服制剂，其特征在于，步骤(4)和步骤(5)所述pbs溶液浓度为0.01 mol/l，ph值...
【专利技术属性】
技术研发人员：王晓辉，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第六医学中心，
类型：发明
国别省市：
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