【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及处理高活性nk细胞等用于对人施用的细胞的方法。
技术介绍
1、nk细胞在肿瘤细胞和病毒感染细胞的伤害中是重要的。2017年8月，以幼儿和年轻成人的复发·难治性b细胞急性淋巴细胞白血病(b-all)作为对应症，嵌合抗原受体(car)t细胞疗法在美国得到了认可，但近年来，替代car-t，car-nk的临床应用正在扩大(非专利文献1)。
2、当要对患者施用细胞时，首先考虑使用从患者自身采集的细胞，以防止引起排斥反应。但是，根据患者的状态，有时难以采集治疗所需量的细胞。另外，对于在体外活化、能够增值的程度来说有个人差异，增值活化存在困难的情况。此外，因为对于细胞的活化·增殖来说需要一定的时间，因此存在不能直接开始治疗的问题。在这点上，希望能预先活化细胞并储存以备施用。
3、作为储存细胞的方法，短时间储存时，已知不进行冷冻，以悬浮状态储存的方法(例如，专利文件1)，或长时间储存时，已知进行冷冻的储存方法(例如，专利文件2)。作为得到即使进一步冷冻细胞后解冻，也维持高生存率的细胞，研究了使用含有钠盐、钾盐、糖、冻害保护剂、碳酸氢盐和/或碳酸盐的用于冷冻的溶液(专利文献3)。
4、另外，对于nk细胞这样难以储存的细胞，已知在含有钠盐、钾盐、糖类、以及蛋白质作为活性成分的溶液中储存细胞的储存方法(专利文献4)。进一步，已知冷藏储存用细胞储存液，其含有锂离子和乳酸离子，渗透压为200-350mosm/kg，ph为6.0-8.0(专利文献5)，该储存液中，糖类的含有量为0.5-150mm，钙离子浓度
5、现有技术文献
6、专利文献
7、专利文献1：日本特开2006-230396号公报
8、专利文献2：日本特开2002-233356号公报
9、专利文献3：wo2011/021618
10、专利文献4：wo2013/115322
11、专利文献5：专利4947948号公报
12、专利文献6：wo2002/001952
13、专利文献7：日本特开2013-233102号公报
14、专利文献8：wo2021/177279(pct/jp2021/007863，本申请的优先权日前未公开)
15、非专利文献
16、非专利文献1：liu e,et al.n engl j med.2020；382:545-53
技术实现思路
1、专利技术要解决的课题
2、然而，在以往使用二甲基亚砜这样的保护剂的冷冻方法中，虽可以储存t细胞系和原代nk细胞，但对于细胞毒性高的nk细胞来说是不充足的，经冷冻解冻操作，其活性和生存率都显著降低。这通过程序冷冻仪、细胞密度调整、葡聚糖、白蛋白或羧化聚l-赖氨酸等的添加等是无法解决的。而且，如果以一定量的细胞死亡为前提对施用用细胞进行包装，则解冻后需要进行用于再活化培养的工序，必须对得到的细胞进一步洗净。因此，被冷冻、被贮备的高活性nk细胞存在为处理临床用的细胞需要利用满足一定基准的细胞培养加工设施(cpc)的现状。
3、一方面，本专利技术人等对将高活性nk细胞冷冻、解冻的方法进行了研究(专利文献8)。其中，发现即使在解冻的细胞维持高生存率的情况下，也有不维持高细胞毒性的情况。另外，提示关于解冻的细胞，如果维持高细胞毒性，则生存率也有可能高，可知用指定的方法评价的细胞毒性高是对解冻的细胞有用的评价基准。
4、本专利技术的课题之一在于提供对具有高活性的细胞有效的解冻方法。更具体地，提供以用指定的方法评价的细胞毒性为60％以上、优选80％以上的方式对冷冻的高活性nk细胞进行解冻的方法。
5、用于解决课题的手段
6、本专利技术人等发现在解冻冷冻的细胞时，用于稀释的液体的组成特别重要。另外，发现像这样用于稀释的液体的组成也可以仅设成被[与药品、医疗器械等的品质、有效性及安全性的确保等相关法律(昭和三十五年法律第一百四十五号)]认可的输液等所使用的成分，并完成了本专利技术。
7、本专利技术提供以下内容。
8、[1]一种用于悬浮对人施用的细胞的液体，其满足以下条件：
9、(1)含有钾离子，
10、(2)ph为6.4以上，
11、(3)不含有135meq/l以上的浓度的氯离子，
12、(4)不含有0.423mm以上的浓度的钙离子，
13、(5)渗透压为200-396mosm。
14、[2]根据1所述的液体，其是用于稀释含有对人施用的细胞的冷冻物或其解冻物的液体。
15、[3]根据1或2所述的液体，其中，含有4.00meq/l以上的浓度的钾离子，
16、不含有钙离子，
17、ph为7.0-8.3。
18、[4]一种药物组合物，其含有1-3中任一项所述的液体中悬浮的对人施用的细胞的群体，其中对人施用的细胞为高活性nk细胞。
19、[5]根据4所述的药物组合物，其中，高活性nk细胞的群体为经过冷冻工序的群体。
20、[6]根据5所述的药物组合物，其中，冷冻前的高活性nk细胞的群体为使用含有白蛋白、转铁蛋白、胰岛素和il-2的培养基回收的群体。
21、[7]一种含有对人施用的细胞的输液用药物组合物的提供方法，其包括以下工序：
22、(1)将该细胞利用动物细胞培养用培养基洗净的工序；
23、(2)根据需要，将洗净的该细胞悬浮在冷冻储存液中的工序；
24、(3)将悬浮在冷冻储存液中的该细胞冷冻而储存(储备)的工序；
25、(4)将冷冻储存的该细胞解冻的工序；及
26、(5)将解冻的该细胞悬浮在1-3中任一项所述的液体中，形成输液用药物组合物的工序。
27、另外，本专利技术提供以下内容。
28、[1]一种用于悬浮对人施用的细胞的液体，其满足以下条件：
29、(1)含有钾离子，
30、(2)ph为6.4以上，
31、(3)不含有135meq/l以上的浓度的氯离子，
32、(4)不含有5.55mm以上的浓度的葡萄糖，
33、(5)不含有0.423mm以上的浓度的钙离子，
34、(6)渗透压为200-396mosm。
35、[本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种用于悬浮对人施用的细胞的液体，其满足以下条件：
2.根据权利要求1所述的液体，其是用于稀释含有对人施用的细胞的冷冻物或其解冻物的液体。
3.根据权利要求1所述的液体，其中，
4.一种药物组合物，其含有权利要求1-3中任一项所述的液体中悬浮的对人施用的细胞的群体，其中对人施用的细胞为高活性NK细胞。
5.根据权利要求4所述的药物组合物，其中，高活性NK细胞的群体为经过冷冻工序的群体。
6.根据权利要求5所述的药物组合物，其中，冷冻前的高活性NK细胞的群体为使用含有白蛋白、转铁蛋白、胰岛素和IL-2的培养基回收的群体。
7.一种含有对人施用的细胞的输液用药物组合物的提供方法，其包括以下工序：
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种用于悬浮对人施用的细胞的液体，其满足以下条件：
2.根据权利要求1所述的液体，其是用于稀释含有对人施用的细胞的冷冻物或其解冻物的液体。
3.根据权利要求1所述的液体，其中，
4.一种药物组合物，其含有权利要求1-3中任一项所述的液体中悬浮的对人施用的细胞的群体，其中对人施用的细胞为高活性nk细...
【专利技术属性】
技术研发人员：原田结，米满吉和，
申请(专利权)人：盖亚生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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