【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，特别是涉及一种杂交瘤细胞株，并进一步涉及通过该杂交瘤细胞株制备获得的可特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体及其制备方法和应用。
技术介绍
1、沙门菌（ salmonella）是主要食源性病原菌之一，感染幼龄动物可导致败血症，感染成年动物则可能引起局部炎症、母畜流产等。沙门菌还可通过肉类、蛋类等感染人类，引起伤寒、副伤寒、肠胃炎等疾病，引发严重的公共卫生问题。感染人常见的沙门菌主要有肠炎沙门菌、鼠伤寒沙门菌、德尔卑沙门菌等血清型。还有一些血清型虽不常见，但也有强的致病性，如奥拉宁堡沙门菌、山夫顿堡沙门菌、加利福尼亚沙门菌等亦能引起严重疾病。奥拉宁堡沙门菌可感染宠物，人接触宠物后可能会引发肠胃炎。山夫顿堡沙门菌则是火鸡孵化场内常见的血清型。
2、传统的细菌分离培养实验是检验沙门菌的金标准，但该技术耗时较长，不能满足快速检测需求。基于核酸的分子检测技术耗时较短，灵敏度更高，但容易受到样品种类、模板和引物等多种因素影响，对仪器设备和人员操作要求较高。免疫学检测方法以其可以实现血清检测、特异性强及高通量等优势被广泛研究。但目前的沙门菌免疫学检测方法，多为针对沙门菌属特异性，很少能直接检测特定血清型沙门菌。因此，建立检测特异性识别抗原表位的不同沙门菌血清型的检测方法十分必要。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种特异性识别加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡
2、为实现上述目的及其他相关目的，本专利技术提供一种识别加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的抗体，所述抗体包括重链和轻链，所述轻链包括三个互补决定区，所述轻链的三个互补决定区的氨基酸序列分别如seq idno.1-3所示，所述重链包括三个互补决定区，所述重链的三个互补决定区的氨基酸序列分别如seq id no.4-6所示。
3、进一步地，所述轻链的氨基酸序列如seq id no.7所示；所述重链的氨基酸序列如seq id no.9所示。
4、本专利技术的另一方面提供了一种多核苷酸，所述多核苷酸编码上所述抗体。
5、进一步地，所述多核苷酸中编码所述轻链的核苷酸序列如seq id no.8所示；所述多核苷酸中编码所述重链的核苷酸序列如seq id no.10所示。
6、本专利技术还提供上述加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌检测抗体的制备方法，包括以下步骤：
7、制备含有表达如上述特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体的核苷酸分子的表达载体；
8、将得到的表达载体转染真核宿主细胞并培养；
9、分离纯化，获得特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体。
10、本专利技术的另一方面提供了一种重组表达载体，所述表达载体中含有上述多核苷酸。
11、本专利技术的另一方面提供一种宿主细胞，所述宿主细胞中含有或者整合有上述重组表达载体。
12、本专利技术的另一方面提供了上述抗体、多核苷酸、重组表达载体以及宿主细胞用于检测含鞭毛蛋白h:t抗原表位沙门菌的应用。
13、本专利技术的另一方面提供了一种加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的直接elisa检测组合物，所述组合物包括上所述的抗体。
14、进一步地，所述组合物还包括包被加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的固相载体、含加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的沙门菌、不含上述抗原表位的沙门菌、非沙门菌、包被液、封闭液。
15、进一步地，所述组合中还含有稀释液、洗涤液、tmb显色液、反应终止液等本领域人员采用直接elisa检测的一般实验材料。
16、进一步地，所述抗体为酶标抗体，所述酶标抗体为hrp标记的针对加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的igg抗体。
17、进一步的，所述包被液可以为ph 9.6的碳酸盐缓冲液；所述洗涤液为ph 7.2的pbst溶液；所述的封闭液为含1% bsa的pbs溶液；所述稀释液为含有1% bsa的pbs溶液；所述的反应终止液为0.5 mol/l的h2so4溶液。
18、本专利技术的另外一个方面提供了一种加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌直接elisa检测方法，所述方法包括采用包括上述抗体检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌。
19、进一步地，所述抗体为酶标抗体，所述酶标抗体为hrp标记的针对加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的igg抗体。
20、进一步地，所述方法具体包括以下步骤：
21、（1）将菌液用包被液稀释包板，用洗涤液洗涤，封闭，洗涤；
22、（2）加入用稀释液稀释的hrp标记的抗体，孵育，洗涤；
23、（3）加入显色液，显色后加入终止液，检测od450值，分析结果。
24、进一步地，所述方法具体可以检测特定血清型沙门菌（加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌）：采用全菌检测法，对菌液进行全菌包板，用5%戊二醛溶液处理酶标板，将沙门菌菌液包被在处理好的酶标板中，包被后用洗涤液洗涤；每孔再加入封闭液，封闭后用洗涤液洗涤；用封闭液稀释后的hrp标记的单抗，加入封闭好的酶标板中，孵育后用洗涤液洗涤；最后加入tmb显色液，避光显色后，向每孔加入反应终止液，用酶标仪读取od450 nm处的吸光度值；样品孔od450 nm≥1.8135判定为阳性。
25、进一步的，所述包被液为ph 9.6的碳酸盐缓冲液（cbs）；所述洗涤液为ph 7.2的pbst溶液；所述稀释液为含有1%牛血清白蛋白（bsa）的pbs溶液；所述的反应终止液为0.5mol/l的h2so4溶液。
26、进一步的，所述5%戊二醛溶液由5 ml戊二醛和95 ml 0.1m nahco3配制而成。
27、进一步的，菌液包被条件为4℃、24 h，无水甲醇室温作用15 min；所述封闭液为含有1%牛血清白蛋白（bsa）的pbs溶液，封闭时间为2 h。
28、进一步的，标记hrp的单克隆抗体稀释度为1：1000，标记hrp的单克隆抗体和菌株共孵育时间为2 h。
29、进一步的，将用稀释液稀释后的hrp标记的针对沙门菌鞭毛蛋白h:t抗原表位的抗体加入封闭本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体，其特征在于，所述抗体包括重链和轻链，所述轻链包括三个互补决定区，所述轻链的三个互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1-3所示，所述重链包括三个互补决定区，所述重链的三个互补决定区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.4-6所示。
2.根据权利要求1所述的特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体，其特征在于，所述轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，所述重链的氨基酸序列如SEQ ID NO.9所示。
3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1或2所述的特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体。
4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸中编码轻链的核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示，所述多核苷酸中编码重链的核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示。
5.权利要求1或2所述的特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体的制备方法，其特征在于，包
6.权利要求1或2所述抗体、权利要求3或4所述多核苷酸、权利要求5所述重组表达载体、或权利要求6所述宿主细胞在检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌或奥拉宁堡沙门菌中的应用。
7.一种用于加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌直接ELISA检测组合物，其特征在于，所述组合物中含有权利要求1或2所述特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体。
8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括包被加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的固相载体、含加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的沙门菌、不含加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的沙门菌、非沙门菌、包被液、封闭液、稀释液、PBST、TMB显色液、或反应终止液中的任一种或几种；所述抗体为酶标抗体，所述酶标抗体为HRP标记的针对加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌鞭毛蛋白共同抗原表位的IgG抗体。
9.根据权利要求8所述的组合物，其特征在于，所述包被液为pH 9.6的碳酸盐缓冲液；所述洗涤液为pH 7.2的PBST溶液；所述封闭液为含1％BSA的PBS溶液；所述稀释液为含有1％BSA的PBS溶液；所述反应终止液为0.5mol/L的H2SO4溶液。
10.一种加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌抗体的直接ELISA检测方法，其特征在于，所述方法包括采用权利要求1或2所述抗体检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌。
...【技术特征摘要】
1.一种特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体，其特征在于，所述抗体包括重链和轻链，所述轻链包括三个互补决定区，所述轻链的三个互补决定区的氨基酸序列分别如seq id no.1-3所示，所述重链包括三个互补决定区，所述重链的三个互补决定区的氨基酸序列分别如seq id no.4-6所示。
2.根据权利要求1所述的特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体，其特征在于，所述轻链的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述重链的氨基酸序列如seq id no.9所示。
3.一种多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸编码权利要求1或2所述的特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体。
4.根据权利要求3所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸中编码轻链的核苷酸序列如seq id no.8所示，所述多核苷酸中编码重链的核苷酸序列如seq id no.10所示。
5.权利要求1或2所述的特异性检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌、奥拉宁堡沙门菌的抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
6.权利要求1或2所述抗体、权利要求3或4所述多核苷酸、权利要求5所述重组表达载体、或权利要求6所述宿主细胞在检测加利福尼亚沙门菌、山夫顿堡沙门菌或奥拉宁堡沙门菌中的应用。
【专利技术属性】
技术研发人员：焦新安，潘志明，孟闯，尚月月，曹李妍，丁睿清，康喜龙，熊丹，宋丽，顾丹，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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