【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测领域，具体地，涉及hiv耐药基因检测，更具体地，涉及基于ngs的hiv耐药性基因检测。
技术介绍
1、获得性免疫缺陷综合症是由两种逆转录病毒hiv-1或hiv-2感染引起。hiv-1在全球造成了大规模感染，而hiv-2的侵染则局限在西非地区，全球其他区域有零星分布。hiv病毒是一种传染性逆转录病毒，可感染人体免疫细胞，导致免疫下降。它主要攻击免疫系统中最重要的cd4+t淋巴细胞，使人体易于感染多种疾病，并可引发恶性肿瘤，病死率较高。艾滋病临床表现没有特异性，感染初期，很多患者无明显症状，感染2～4周，有些患者会出现发烧、皮疹、咽喉痛、淋巴结肿大、疲倦及各种更少见的症状。hiv通过与含有病毒的体液(如血液、精液或阴道液)或被病毒感染的细胞密切接触传播。
2、在全球范围内普遍流行的hiv-1型可分为m(main)、n(non-m-non-o)、o(outlier)和p 4个组，其中最主要的m组可以分为a、b、c、d、f、g、h、j和k亚型，n、o和p组毒株主要局限在中非，且流行率较低。该分类系统并不是静态的，近年来还报道了许多广泛流行的重组亚型(crfs)。hiv-2主要局限于非洲地区，至少有a-g 7种亚型。
3、《中国遏制与防治艾滋病行动计划》要求我国艾滋病防治要实现“三个90％”的防治目标；国家十部委联合下发的《遏制艾滋病传播实施方案(2019—2022年)》也将三个90％作为艾滋病防治的具体指标，在艾滋病治疗过程中的耐药性检测精确性对治疗有着重要的指示作用。中国的人口基数大，患者
4、现在主流的是rt-pcr结合sanger测序法，但少量样本进行sanger测序的结果无法反映其临床表现，主要是其测序的次数少，劣势毒株无法测得，在临床上对疑似耐药的患者情况无法预知。因此，目前，开发出了rt-pcr结合ngs测序法，例如，中国专利技术专利cn111500782b和cn111560474b，分别检测了hiv-1的逆转录酶和蛋白酶的耐药性，但是，其检测耐药的广谱性仍然存在缺陷。
5、因此，本领域需求一种hiv耐药性检测产品，其能够广谱的检测多种类型的耐药，例如，蛋白酶、逆转录酶、整合酶等靶点的耐药性。
技术实现思路
1、有鉴于此，第一方面，本专利技术提供一种结合ngs检测hiv耐药性的组合物，包括第一检测组合物和第二检测组合物，其中，
2、第一检测组合物：
3、如seq id no.1～2所示的扩增pro区的引物组；
4、如seq id no.3～4所示的扩增rt区的引物组；和
5、如seq id no.5～6所示的扩增int区的引物组；
6、第二检测组合物：
7、如seq id no.7～8所示的扩增pro区的引物组；
8、如seq id no.9～10所示的扩增rt区的引物组；和
9、如seq id no.11～12所示的扩增int区的引物组。
10、使用本专利技术的检测组合物，能够同时检测出hiv的蛋白酶抑制剂、逆转录酶抑制剂、整合酶抑制剂三类药物的耐药性，操作更为简便，成本更低。
11、进一步地，本专利技术所述组合物先使用第一检测组合物进行第一轮pcr扩增，再使用第二检测组合物进行第二轮pcr的扩增。
12、第二方面，本专利技术提供一种上述组合物用于制备检测hiv耐药的试剂盒中的用途。
13、进一步地，制备用于检测针对hiv的劣势耐药毒株的试剂盒。
14、进一步地，制备用于检测hiv耐药基因变异的试剂盒。
15、第三方面，本专利技术提供一种结合ngs检测hiv耐药性的试剂盒，包括上述组合物。
16、进一步地，所述试剂盒还包括如下中至少一种：逆转录酶、dna聚合酶、dntp、缓冲液，和mg2+。
17、更进一步地，所述引物组：逆转录酶：dna聚合酶的比例为10:3:20。
18、进一步地，所述试剂盒还包括如下中至少一种：dna片段化试剂、末端修复试剂、连接酶、磁珠混液。
19、第四方面，本专利技术提供一种以非诊断目的结合ngs检测hiv耐药性的方法，包括：
20、1)提取或释放待测样本的核酸；
21、2)使用如上所述的第一检测组合物进行第一轮扩增，获得第一轮扩增产物；
22、3)处理所述第一轮扩增产物，使用如上所述的第二检测组合物对第一轮扩增产物进行第二轮扩增，获得第二轮扩增产物；
23、4)处理所述第二轮扩增产物并建库；以及
24、5)测序并分析结果。
25、进一步地，所述核酸为rna。
26、进一步地，所述第一轮扩增的条件为：
27、逆转录，温度为50℃～60℃，时间为3～30分钟，1次循环；cdna预变性，温度为95℃，时间为5～60秒，1次循环；变性，温度为94℃，时间为5～40秒，退火，温度为55～60℃，时间为10～60秒，延伸，温度为72℃，时间为30～60秒，30～40次循环。
28、进一步地，所述第二轮扩增的条件为：
29、逆转录，温度为50℃～60℃，时间为3～10分钟，1次循环；cdna预变性，温度为95℃，时间为5～60秒，1次循环；变性，温度为94℃，时间为5～40秒，退火，温度为55～60℃，时间为10～60秒，延伸，温度为72℃，时间为30～60秒，30～40次循环。
30、进一步地，处理所述第二轮扩增产物并建库包括打断和文库扩增。打断即为dna片段化。
31、在本文中，术语“以非诊断目的”指并非旨在获得个体是否感染上述病原体并具备耐药性等的信息。例如，该方法可以检测培养物(例如细胞)中的hiv是否具有耐药性。
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1.一种结合NGS检测HIV耐药性的组合物，包括第一检测组合物和第二检测组合物，其中，
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，先使用所述第一检测组合物进行第一轮PCR扩增，再使用所述第二检测组合物进行第二轮PCR的扩增。
3.如权利要求1或2所述的组合物用于制备检测HIV耐药的试剂盒中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂盒是用于检测针对HIV的劣势耐药毒株或者HIV耐药基因变异的试剂盒。
5.一种结合NGS检测HIV耐药性的试剂盒，包括如权利要求1或2所述的组合物。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括如下中至少一种：逆转录酶、DNA聚合酶、dNTP、缓冲液，和Mg2+。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述引物组：逆转录酶：DNA聚合酶的比例为10:3:20。
8.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括如下中至少一种：DNA片段化试剂、末端修复试剂、连接酶、磁珠混液。
9.一种以非诊断目的结合NGS检
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述步骤4)包括打断和文库扩增。
...【技术特征摘要】
1.一种结合ngs检测hiv耐药性的组合物，包括第一检测组合物和第二检测组合物，其中，
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，先使用所述第一检测组合物进行第一轮pcr扩增，再使用所述第二检测组合物进行第二轮pcr的扩增。
3.如权利要求1或2所述的组合物用于制备检测hiv耐药的试剂盒中的用途。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于，所述试剂盒是用于检测针对hiv的劣势耐药毒株或者hiv耐药基因变异的试剂盒。
5.一种结合ngs检测hiv耐药性的试剂盒，包括如权利要求1或2所述的组合物。
...【专利技术属性】
技术研发人员：丁峰，刘让蛟，陆馨岚，许汶，邓小龙，周海灯，李赛，欧阳凯，戴立忠，
申请(专利权)人：圣湘生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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