【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物检测，尤其是检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法。
技术介绍
1、苯磺酸氨氯地平片是一种适用于高血压和冠心病的药物，在生产过程中可能会产生一些基因毒性杂质，虽然在正常剂量下不会对人体造成伤害，但是长期摄入可能会增加致癌风险，因此，对这些基因毒性杂质的检测非常重要。
2、常用的苯磺酸酯类基因毒性杂质的检测方法有高效液相色谱法、高效液相色谱-质谱联用法，其中高效液相色谱-质谱联用法灵敏度高，能够满足痕量检测要求，在检测苯磺酸氨氯地平片中的苯磺酸酯类基因毒性杂质时，定量限可达到0.4μg/g，但仪器昂贵，不利于推广使用；而高效液相色谱法灵敏度较低，其定量限仅为70μg/g，虽可用于苯磺酸氨氯地平原料药中苯磺酸类基因毒性杂质检测，但不能满足片剂的检测要求。
3、目前苯磺酸酯类杂质研究主要集中于苯磺酸氨氯地平原料药，鲜有关于苯磺酸氨氯地平片剂中苯磺酸酯类杂质的检测方法，片剂在生产过程中添加了大量辅料，一方面干扰了杂质检测，另一方面使其含量降低，对检测灵敏度提出更高的要求。
4、现有的液相色谱检测方法不能良好适配真空干燥技术，在标准大气压下，苯磺酸氨氯地平样品溶液在较高温度下蒸发，增加了苯磺酸酯类热敏性物质的挥发和损失，整体灵敏度一般，同时存在接触空气而污染和氧化变质的隐患，存在一定的限制性，为了解决以上的技术问题，为此我们设计出检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，包括以下步骤：
3、a：对照品溶液的制备，包括以下溶液制备：
4、苯磺酸氨氯地平定位溶液的制备：取苯磺酸氨氯地平对照品约1mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
5、杂质对照品储备液的制备：取苯磺酸甲酯、苯磺酸乙酯、苯磺酸丙酯、苯磺酸异丙酯对照品各约15mg，精密称定，分别置10ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得；
6、混合杂质对照品溶液的制备：取上述对照品储备液各1ml，置25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得，配制成浓度为0.06mg/ml的混合杂质对照品溶液；
7、b：供试品溶液的制备：称取2.000g片粉，精密称定，置5ml离心管中，加入2ml甲醇，涡旋1min，13000r/min离心10min，取上清液分别进行氮吹浓缩、固相萃取浓缩、真空干燥浓缩3种干燥浓缩方式；
8、c：检测测量方法：采用高效液相色谱仪进行测定；色谱条件：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈为流动相a，以0％～1％三乙胺缓冲溶液为流动相b，进行梯度洗脱，检测波长220nm，柱温为25℃～40℃，流速为1.0ml/min，进样量为20μl；采集色谱图以峰面积外标法计算结果；计算公式：ci＝cs*ai/as；式中ai为供试品溶液中各苯磺酸酯类基因毒性杂质的峰面积；as为各苯磺酸酯类基因毒性杂质对照品的峰面积；cs为各苯磺酸酯类基因毒性杂质对照品的浓度；ci为供试品溶液中各苯磺酸酯类基因毒性杂质的浓度。
9、优选的，所述步骤b中氮吹浓缩的操作为收集上清液，在30℃条件下氮吹至干燥，用200μl甲醇复溶，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
10、优选的，所述步骤b中固相萃取浓缩的操作为配制3份供试品溶液，收集上清液，分别用水稀释5倍、10倍、15倍后，经cleanert silica spe(3ml，200mg)固相萃取，再用200μl甲醇洗脱，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
11、优选的，所述步骤b中真空干燥浓缩的操作为收集上清液，在30℃条件下真空干燥4h后，用200μl甲醇复溶，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
12、优选的，所述步骤c中色谱柱为ods2(4.0mm×250mm，5μm)。
13、优选的，所述步骤c中流动相b用磷酸调节ph值至3.0±0.1。
14、优选的，所述步骤c中梯度洗脱的操作为以乙腈为流动相a，以0％-1％三乙胺缓冲溶液为流动相b，进行梯度洗脱(0→5min，40％a；5→20min，40％a→45％a；20→21min，45％a→40％a；21→31min，40％a)。
15、优选的，柱温25～40℃，优选35℃。
16、与现有技术相比，本专利技术的有益效果如下：
17、本专利技术可以在一个色谱条件下同时测定苯磺酸氨氯地平片中4种苯磺酸酯类基因毒性杂质，各色谱峰与主峰或其他杂质峰的分离度均较好，该方法能够有效富集片剂中的苯磺酸酯类基因毒性杂质，使其定量限符合药物的定量分析要求，从而在使用高效液相色谱法对片剂中基因杂质进行分析时也能到达检测要求，且具有较高的精密度和灵敏度，专属性强、重现性好、准确度高，为生产企业和检测机构对苯磺酸氨氯地平片中苯磺酸酯类基因毒性杂质的质量控制提供技术支持。
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1.检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤B中氮吹浓缩的操作为收集上清液，在30℃条件下氮吹至干燥，用200μL甲醇复溶，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
3.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤B中固相萃取浓缩的操作为配制3份供试品溶液，收集上清液，分别用水稀释5倍、10倍、15倍后，经Cleanert Silica SPE(3mL，200mg)固相萃取，再用200μL甲醇洗脱，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
4.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤B中真空干燥浓缩的操作为收集上清液，在30℃条件下真空干燥4h后，用200μL甲醇复溶，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
5.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯
6.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤C中流动相B用磷酸调节pH值至3.0±0.1。
7.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤C中梯度洗脱的操作为以乙腈为流动相A，以三乙胺缓冲溶液为流动相B，进行梯度洗脱(0→5min，40％A；5→20min，40％A→45％A；20→21min，45％A→40％A；21→31min，40％A)。
8.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：柱温25～40℃，优选35℃。
...【技术特征摘要】
1.检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤b中氮吹浓缩的操作为收集上清液，在30℃条件下氮吹至干燥，用200μl甲醇复溶，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
3.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤b中固相萃取浓缩的操作为配制3份供试品溶液，收集上清液，分别用水稀释5倍、10倍、15倍后，经cleanert silica spe(3ml，200mg)固相萃取，再用200μl甲醇洗脱，过0.45μm有机微孔滤膜，待高效液相色谱仪分析。
4.根据权利要求1所述的检测苯磺酸氨氯地平片中基因毒性杂质的高灵敏度液相色谱方法，其特征在于：所述步骤b中真空干燥浓缩的操作为收集上清液，在30℃条件下真空干燥4h后，...
【专利技术属性】
技术研发人员：张雨萌，赵春杰，姜文倩，刘婷婷，王英洁，
申请(专利权)人：辽宁康博士制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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