【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药制剂的化学组成研究，涉及一种鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，具体涉及一种基于uplc-q-tof-ms/ms法测定鹿芪益肾颗粒中142种成分的方法。
技术介绍
1、肾风，是感受风邪而见全身浮肿的病证，其病因是“肾汗出逢于风”；西医将肾风定义为慢性肾小球肾炎，肾病综合症等。它起病隐匿、发病率高、危害性大，很难治愈,末期多发展为慢性肾衰竭。西医多以缓解肾风引起的不适症状为主，但整体疗效未达到临床预期，且具有一定的副作用及局限性；而传统中医药疗从整体调节出发，利用中药多途径、多层次和多靶点的作用特点，在控制肾脏的免疫炎症反应、减少肾脏损害等方面都具有其特定优势，不仅疗效好，且无严重毒副作用。早在1995年，我院上海市名老中医叶景华在临床采用鹿芪益肾(原名肾二合剂)治疗慢性肾炎，肾病综合征具有显著临床疗效。但原先合剂存在保质期时间短、口感差、不便携带、服用不方便等缺陷，同时也缺乏向中成药转化的研究数据，因此，2021年对该合剂进行剂型改造，研发成鹿芪益肾颗粒，并取得备案号。
2、鹿芪益肾颗粒由鹿衔草、黄芪、金雀根、徐长卿、楮实子、槲寄生、黄柏、陈皮等药味组成，其物质种类繁多，结构复杂。目前尚未有对鹿芪益肾颗粒中成分进行比较全面的定性定量的检测方法。
技术实现思路
1、鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，用于解决现有技术中缺乏全面地定性检测鹿芪益肾颗粒中147种化学成分的方法的问题。
2、为实现
3、1)将鹿芪益肾颗粒样品加入溶剂溶解，超声提取后离心、过滤，取续滤液，获得供试品溶液；
4、2)将供试品溶液采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法(uplc-q-tof-ms/ms)进行测定，确定供试品溶液中142种成分。
5、优选地，步骤1)中，所述鹿芪益肾颗粒样品要研磨成粉末状。
6、优选地，步骤1)中，所述溶剂为40-60(v/v)％甲醇溶液，甲醇溶液的具体浓度如40-50(v/v)％、50-60(v/v)％、45-55(v/v)％，优选为50(v/v)％甲醇溶液。所述40-60(v/v)％甲醇溶液为体积百分比为40-60％的甲醇水溶液，所述50(v/v)％甲醇溶液为体积百分比为50％的甲醇水溶液。
7、优选地，步骤1)中，所述鹿芪益肾颗粒样品加入的质量g与溶剂加入体积ml之比为0.5:4-6，具体如0.5:4-5、0.5:5-6、0.5:4.5-5.5，优选为0.5:5。
8、优选地，步骤1)中，所述超声提取的时间为20-40min，具体如20-30min、30-40min、25-35min，优选为30min。
9、优选地，步骤1)中，所述离心的转速为10000-15000r·min-1，具体如10000-12000r·min-1、12000-15000r·min-1、11000-13000r·min-1，优选为12000r·min-1。
10、优选地，步骤1)中，所述离心的时间为1-10min，具体如1-5min、5-10min、4-6min，优选为5min。
11、优选地，步骤1)中，所述过滤为取上清液过滤膜，放弃初滤液后，取续滤液。
12、更优选地，所述滤膜为0.22μm微孔滤膜。
13、优选地，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述超高效液相色谱测定条件为：色谱柱为c18色谱柱，优选为agilent eclipse plus c18 uplc色谱柱(2.1×150mm，1.8μm)；柱温：30-40℃，优选为35℃；流速：0.1-0.3ml/min，优选为0.2ml/min；进样量：1-3μl，优选为2μl；流动相a相为0.05-0.15％甲酸水溶液，优选为0.1％甲酸水溶液；流动相b相为乙腈；分析时间：40min；梯度洗脱。
14、上述流动相a相中，0.05-0.15％甲酸水溶液为体积百分比为0.05-0.15％的甲酸水溶液，0.1％甲酸水溶液为体积百分比为0.1％的甲酸水溶液。
15、更优选地，所述梯度洗脱程序的具体为：0-7min，a相:b相体积比为95:5-80:20；7-15min，a相:b相体积比为80:20-75:25；15-20min，a相:b相体积比为75:25-75:25；20-40min，a相:b相体积比为75:25-0:100。
16、优选地，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述质谱测定条件为：离子源为电喷雾离子源(esi)；检测模式为正离子电喷雾电离模式(esi+)和负离子电喷雾电离模式(esi-)；干燥气为氮气n2；干燥气的温度为340-360℃，优选为350℃；干燥气的流速为9-11l/min，优选为10l/min；雾化气压力为25-35psi，优选为30psi；毛细管电压在正模式下为3400-3600v，优选为3500v；毛细管电压在负模式下为2900-3100v，优选为3000v；毛细管出口电压为140-160v，优选为150v；一级质谱选用ms1模式，质量扫描范围为100-1500m/z；二级质谱选用target-ms/ms模式，碰撞电压为25-35ev，优选为30ev。
17、上述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中数据采用agilentmasshunter软件采集。所述agilent masshunter软件为agilent masshunter qualitativeanalysis b.06.00软件。
18、优选地，步骤2)中，所述供试品溶液中147种成分的成分信息如相对保留时间tr、m/z、电离模式、ms2等见如下表1、2。
19、上述成分信息是通过查阅中国知网、pubmed、scifinder、tcmsp(traditionalchinese medicine system pharmacology database)、tcmid(traditional chinesemedicine integrated database)等数据库以及相关文献，建立鹿芪益肾颗粒相关化学成分数据表，包含化合物名称、化学式、离子模式、结构式等信息。并将采集得到的一级质谱原始数据导入agilent masshunter qualitative analysis b.06.00软件，根据其相对保留时间(tr)、准分子离子峰、二级碎片等信息，结合pubchem、chemicalbook、chemspider和化源网等数据库鉴定相关化学成分，部分化合物通过对照品比对得到确认。
20、表1鹿芪益肾颗粒中化学成分的信息表
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【技术保护点】
1.一种鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述溶剂为40-60％甲醇溶液；和/或，所述鹿芪益肾颗粒样品加入的质量与溶剂加入体积之比为0.5:4-6，g/mL。
3.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述超声提取的时间为20-40min。
4.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述离心的转速为10000-15000r·min-1；和/或，所述离心的时间为1-10min。
5.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述超高效液相色谱测定条件包括以下任一项或多项：
6.根据权利要求5所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，A2)中，所述梯度洗脱程序的具体为：0-7min，A相:B相体积比为95:5-80:20；7-15min，A相:B相体积比为8
7.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述超高效液相色谱测定条件还包括以下任一项或多项：
8.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述质谱测定条件包括以下任一项或多项：
9.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述供试品溶液中成分选自组氨酸、组氨酸、丝氨酸、脯氨酸、谷氨酸、胡芦巴碱、六氢吡啶羧酸、奎宁酸、缬氨酸、腺嘌呤、异柠檬酸、苹果酸、甜菜碱、烟酸、对二氨基苯甲醛、柠檬酸、辛弗林、酪氨酸、水晶兰苷、尿苷、腺苷、亮氨酸、富马酸、丁二酸、异亮氨酸、N-甲基大麦芽碱、没食子酸、苯丙氨酸、香草酸、原儿茶酸、新绿原酸、色氨酸、莲心季铵碱、3-对香豆酰奎宁酸、丁香素、紫丁香苷、原儿茶醛、Polygalatenoside E、aporphinealkaloid、绿原酸、木兰箭毒碱、去甲荷叶碱、隐绿原酸、水杨酸、3-O-阿魏酰奎宁酸、2,3,4,9-四氢-1H-吡啶并[3,4-b]吲哚-3-羧酸、黄柏碱、Polygalatenoside C、维采宁-2、藤泊它碱、木兰花碱、柚皮苷4’-葡萄糖苷、Stellarin-2、5-对香豆酰奎宁酸、5-O-阿魏酰奎宁酸、Eleutheroside E、oblongine、N-甲基四氢非洲防己碱、圣草次苷、对香豆酸、(+)N-methylcorydine、毛蕊异黄酮-7-O-葡萄糖苷、芦丁、槲皮素-7-O-β-D葡萄糖苷、槲皮素-3-O-葡萄糖苷、2”-O-没食子酰基金丝桃苷、阿魏酸、去亚甲基小檗碱、槲皮苷、木犀草苷、柚皮苷、Naringenin-5-O-beta-Dglucoside、芸香柚皮苷、Isoplatydesmine、柠檬黄素-3-O-(5-α-glucosyl-HMG)-β-葡萄糖苷、N-甲基四氢小蘖碱、地奥司明、Viscumneoside I、橙皮苷、柚皮素-7-O葡萄糖苷、橙皮素-7-O-葡萄糖苷、橙皮素、壬二酸、Homoeriodictyol7-O-glycoside、非洲防己碱、唐松草分定、药根碱、诺米林葡萄糖苷、诺米林酸葡萄糖苷、刻叶紫堇胺、芒柄花苷、紫藤苷、巴马汀、小檗碱、徐长卿苷G、9；10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷、黄芪紫檀烷苷、枸橘苷、槲皮素、甲基小檗碱、香蜂草苷、毛蕊异黄酮、熊竹素、蒿草酚A、CitrusinⅠ、Natsudaidain-3-O-(3-hydroxy-3-methyl-glutarate)-glucoside、高圣草素、茵芋碱、γ-崖椒碱、α-Viniferin、Sanleng acid、丹皮酚、黄芪甲苷、黄芪皂苷III、异橙黄酮、芒柄花素、黄芪皂苷II、膜荚黄芪苷、橙黄酮、7；2'-二羟基-3'；4'-二甲氧基异黄烷、异黄芪皂苷II、5-O-Methyembelin、柠檬苦素、环黄芪苷II、5；6；7；3′；4′；5′-六甲氧基黄酮、Pentamethoxyflavone、汉黄芩素、川陈皮素、8-氧化小檗碱、黄芪皂苷I、积雪草酸、梅笠草素、橘皮素、柚皮黄素、黄柏酮、5,7-二羟基-3',4',5'-三甲氧基黄酮、Hexamethoxyflavone、黄芩素、5...
【技术特征摘要】
1.一种鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述溶剂为40-60％甲醇溶液；和/或，所述鹿芪益肾颗粒样品加入的质量与溶剂加入体积之比为0.5:4-6，g/ml。
3.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述超声提取的时间为20-40min。
4.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤1)中，所述离心的转速为10000-15000r·min-1；和/或，所述离心的时间为1-10min。
5.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述超高效液相色谱测定条件包括以下任一项或多项：
6.根据权利要求5所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，a2)中，所述梯度洗脱程序的具体为：0-7min，a相:b相体积比为95:5-80:20；7-15min，a相:b相体积比为80:20-75:25；15-20min，a相:b相体积比为75:25-75:25；20-40min，a相:b相体积比为75:25-0:100。
7.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述超高效液相色谱测定条件还包括以下任一项或多项：
8.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用法中，所述质谱测定条件包括以下任一项或多项：
9.根据权利要求1所述的鹿芪益肾颗粒中多种成分的检测方法，其特征在于，步骤2)中，所述供试品溶液中成分选自组氨酸、组氨酸、丝氨酸、脯氨酸、谷氨酸、胡芦巴碱、六氢吡啶羧酸、奎宁酸、缬氨酸、腺嘌呤、异柠檬酸、苹果酸、甜菜碱、烟酸、对二氨基苯甲醛、柠檬酸、辛弗林、酪氨酸、水晶兰苷、尿苷、腺苷、亮氨酸、富马酸、丁二酸、异亮氨酸、n-甲基大麦芽碱、没食子酸、苯丙氨酸、香草酸、原儿茶酸、新绿原酸、色氨酸、莲心季铵碱、3-对香豆酰奎宁酸、丁香素、紫丁香苷、原儿茶醛、polygalatenoside e、aporphinealkaloid、绿原酸、木兰箭毒碱、去甲荷叶碱、...
【专利技术属性】
技术研发人员：时扣荣，范伟，刘娟，李婷，徐婕，辛蓓玮，翟巧利，侯晓丽，朱秋珍，李媛，
申请(专利权)人：上海市第七人民医院上海中医药大学附属第七人民医院，
类型：发明
国别省市：
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