【技术实现步骤摘要】
本申请涉及属于物种鉴定和生物检测领域，具体涉及鉴定爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana的dna条形码及方法。
技术介绍
1、爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana（缩写l. javana）是一种单寄生的内寄生蜂，隶属于膜翅目hymenoptera细腰亚目apocrita茧蜂科braconidae窄径茧蜂亚科agathidinae nees，脊窄径茧蜂属liragathis。该属昆虫目前全世界共记录4种，我国仅在台湾地区记录有1种。该蜂是我国重要的昆虫天敌资源，在农业害虫生物防治中发挥重要的作用。因此，对该蜂设计一套高效、准确的鉴定方法尤为重要。但是，自然界中昆虫的数量庞大，仅膜翅目昆虫在全世界已描述约15万个物种，实际物种数量估计可能超过100万种。且不同昆虫的体积差异巨大，以典型的寄生蜂——赤眼蜂为例，该科寄生蜂体长一般在0.5～1.0毫米之间，最小的仅有0.17毫米。寄生蜂不仅种类繁多，普遍个体较小，并且同科的物种幼虫期外形相似性高，自然界中仍存在许多未知物种或同一物种异名的情况。因此，在缺少专业仪器和技术人员的情况下，很难依靠形态学特征对寄生蜂物种进行准确鉴定。
技术实现思路
1、基于此，本申请一实施例提供了爪哇脊窄径茧蜂l. javana coⅰ基因序列，并且基于该序列提供了用于鉴定该蜂的dna条形码、特异性扩增引物，并提供一种快速、准确、稳定的分子生物学鉴定方法，可以对该蜂及近缘种、该蜂的不同残体或是否在寄主体内成功寄生进行分子鉴定。
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3、本申请第一方面提供了一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂l. javana的dna条形码，所述dna条形码包括seq id no.3所示的爪哇脊窄径茧蜂l. javana coi基因片段。
4、在其中一个实施例中，所述dna条形码的序列如seq id no.4所示。
5、本申请第二方面提供了一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂l. javana的引物对，所述引物对包括用于检测seq id no.3所示的爪哇脊窄径茧蜂l. javana coi基因片段的引物对。
6、在其中一个实施例中，所述引物对包括用于检测seq id no.4的引物对，所述引物对包括seq id no.6及seq id no.11所示的引物对。
7、本申请第三方面提供了一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂l. javana的试剂盒，所述试剂盒包括所述的引物对。
8、在其中一个实施例中，所述试剂盒还包括提取基因组dna试剂和pcr扩增所用的其他试剂中的至少一种。
9、本申请第四方面提供了一种鉴定爪哇脊窄径茧蜂l. javana的方法，所述方法包括利用所述的引物对或所述的试剂盒对待测样本进行pcr扩增的步骤。
10、在其中一个实施例中，所述方法包括如下步骤：
11、提取待测样本的基因组dna；
12、以所述基因组dna为模板，利用所述的引物对或所述试剂盒进行pcr扩增；以及
13、电泳检测所得pcr扩增产物，当电泳图中存在318 bp高亮条带时，判断所述待测样本为爪哇脊窄径茧蜂l. javana或判断待测样本是否被该蜂成功寄生。
14、在其中一个实施例中，pcr扩增的反应条件包括98℃预变性2-3min；98℃变性10-12s，56-60℃退火20-30s，68-72℃延伸25-30s，35个循环；68-72℃延伸2-3 min。
15、本申请第五方面提供了所述的dna条形码、所述的引物对、所述的试剂盒在制备鉴定爪哇脊窄径茧蜂l. javana或判断寄主是否被爪哇脊窄径茧蜂l. javana成功寄生的产品中的应用。
16、相对于传统技术，本申请具备如下有益效果：
17、本申请的鉴定对象爪哇脊窄径茧蜂l. javana为国内首次鉴定发现，并公开我国地理种群爪哇脊窄径茧蜂coⅰ基因序列，基于该序列设计特异性引物，可以用于爪哇脊窄径茧蜂的快速准确鉴定，比形态鉴定更准确、更灵敏、更方便；还可以对该蜂是否成功寄生进行检测，结果精确，并为农业害虫生物防控提供辅助手段，为开展后续的生物学实验和分子生物学实验提供依据，节约时间和成本。
18、利用本申请提供的分子鉴定方法，能够免除同行在识别该物种时因缺乏正模标本为参照，造成鉴定结果不准确的情况。
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1.一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana的DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码包括SEQ ID NO.3所示的爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana COI基因片段。
2.根据权利要求1所述的DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码的序列如SEQ IDNO.4所示。
3.一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana的引物对，其特征在于，所述引物对包括用于检测SEQ ID NO.3所示的爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana COI基因片段的引物对。
4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述引物对包括用于检测SEQ ID NO.4的引物对，所述引物对包括SEQ ID NO.6及SEQ ID NO.11所示的引物对。
5.一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3或4所述的引物对。
6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括提取基因组DNA试剂和PCR扩增所用的其他试剂
7.一种鉴定爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana的方法，其特征在于，所述方法包括利用权利要求3-4任一项所述的引物对或权利要求5-6任一项所述的试剂盒对待测样本进行PCR扩增的步骤。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，PCR扩增的反应条件包括98℃预变性2-3min；98℃变性10-12s，56-60℃退火20-30s，68-72℃延伸25-30s，35个循环；68-72℃延伸2-3 min。
10.权利要求1-2任一项所述的DNA条形码、权利要求3-4任一项所述的引物对、权利要求5-6任一项所述的试剂盒在制备鉴定爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana或判断寄主是否被爪哇脊窄径茧蜂Liragathis javana成功寄生的产品中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana的dna条形码，其特征在于，所述dna条形码包括seq id no.3所示的爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana coi基因片段。
2.根据权利要求1所述的dna条形码，其特征在于，所述dna条形码的序列如seq idno.4所示。
3.一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana的引物对，其特征在于，所述引物对包括用于检测seq id no.3所示的爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana coi基因片段的引物对。
4.根据权利要求3所述的引物对，其特征在于，所述引物对包括用于检测seq id no.4的引物对，所述引物对包括seq id no.6及seq id no.11所示的引物对。
5.一种用于鉴定爪哇脊窄径茧蜂liragathis javana的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求3或4所述的引物对。
6.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：王嘉乐，万凯，王威利，陈炎，黄健祥，黄聪灵，唐雪妹，
申请(专利权)人：广东省农业科学院农业质量标准与监测技术研究所，
类型：发明
国别省市：
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