【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于多肽，具体涉及一种来源于核桃粕的可抑制乙酰胆碱酶的多肽。背景领域记忆退化和缺陷常见于与年龄相关的阿尔茨海默病(ad)、帕金森病和其他神经退行性疾病。ad是一种常见于老年人的神经退行性疾病，其特征是行为衰退和认知能力丧失，例如记忆和语言困难、行为紊乱和情绪障碍等。ad被认为是老年痴呆症的最常见原因，约占痴呆症病例的70％。世界卫生组织报告称，每年约有990万新痴呆症患者被诊断出来。据预测，到2030年，痴呆症患者总数将接近7500万，到2050年甚至可能翻一番，达到1.32亿。因此预防和改善ad成为近年来研究热点。胆碱能系统改变与ad的认知功能损害程度密切相关，改善神经退行性疾病中胆碱能系统功能障碍和氧化应激是改善记忆障碍的主要途径。乙酰胆碱酯酶(ache)是一种丝氨酸水解酶，其生理功能是维持动物体内主要神经递质乙酰胆碱的稳态循环。高ache活性水平可导致过量乙酰胆碱降解，这会破坏常规神经传递并减少向大脑的正常信号传递。乙酰胆碱酯酶抑制剂，即他克林、多奈哌齐、卡巴拉汀和加兰他敏，已被批准用于治疗记忆退化，但寻找天然的乙酰胆碱酯酶抑制剂对治疗认知障碍仍有重要意义。核桃(juglans regia l.)又名羌桃，是一种落叶乔木植物，属于胡桃科胡桃属。它与杏仁、榛子和腰果并称为世界四大干果。核桃是我国重要的木本油料树种，其产量和种植面积均居世界第一。核桃是一种药食同源的果品，具有较高的营养价值和保健功能，不仅富含脂肪、蛋白质和碳水化合物，而且还含有多酚、褪黑素和微量元素等。核桃以其高脂质水平(64％～72％)而闻名，其中不饱和脂肪酸占油脂的90
技术介绍
技术实现思路
1、为了解决上述问题，本专利技术以核桃粕为原料，经脱脂后，采用碱提酸沉法提取脱脂核桃粕中的蛋白，再用碱性蛋白酶酶解得到核桃粕酶解产物，使用3kda超滤膜超滤后，使用高效液相色谱-质谱联用技术(hplc-ms/ms)鉴定核桃多肽的序列，并通过多肽组学结合生物信息学、分子对接技术和体外活性实验筛选出具备抑制乙酰胆碱酯酶活性的多肽，通过抑制动力学探究活性肽对ache的抑制类型。
2、本专利技术提供的具有抑制乙酰胆碱酯酶活性的核桃多肽，其自n端到c端的氨基酸序列为：val-gly-ala-pro-phe-asp-gly-ala，以下简称为vgapfdga。
3、本专利技术核桃多肽可用作天然的乙酰胆碱酯酶抑制剂。在使用该核桃多肽时，可通过人工合成或核桃粕酶解后分离纯化获得。
4、本专利技术的核桃多肽还可用于制备预防和/或改善认知障碍的食品、保健品或药品。
5、本专利技术的有益效果如下：
6、本专利技术以核桃粕为原料，采用碱性蛋白酶分别对去除内种皮和未去除内种皮的核桃粕蛋白进行酶解，得到核桃多肽。通过hplc-ms/ms测定其多肽序列，并通过对比多肽组学结合生物信息学、分子对接技术和体外活性实验筛选出具备抑制乙酰胆碱酯酶活性的片段，筛选出1条乙酰胆碱酯酶抑制活性最好的核桃多肽vgapfdga，根据体外活性实验结果(ic50＝0.38±0.01mg/ml)，验证vgapfdga抑制ache活性方面的潜力。进一步通过分子对接技术探讨vgapfdga与ache的相互作用位点及相互作用力，为核桃蛋白的深加工奠定了理论基础。分子对接结果表明，vgapfdga与ache的相互作用主要由氢键和疏水相互作用介导，结合位点主要是外周阴离子tyr121、tyr70和trp279以及催化位点trp84、phe331和gly119，vgapfdga通过与这些氨基酸残基结合从而占据ache的活性中心，阻碍底物进入，从而抑制ache的活性。另外，本专利技术从核桃粕中酶解制备核桃多肽，有效利用了废弃的核桃粕，为蛋白质的高效利用提供了理论基础，对核桃资源可持续发展具有重要意义。
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1.一种来源于核桃粕的具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的核桃多肽，其特征在于：所述核桃多肽自N端到C端的氨基酸序列为Val-Gly-Ala-Pro-Phe-Asp-Gly-Ala，分子量为732.3442Da。
2.权利要求1所述的核桃多肽在制备乙酰胆碱酯酶抑制剂中的应用。
3.权利要求1所述的核桃多肽在制备预防和/或改善认知障碍的食品、保健品或药品中的应用。
【技术特征摘要】
1.一种来源于核桃粕的具有乙酰胆碱酯酶抑制活性的核桃多肽，其特征在于：所述核桃多肽自n端到c端的氨基酸序列为val-gly-ala-pro-phe-asp-gly-ala，分子量为732.3...
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