【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种微生物鉴定方法，特别涉及一种辣白菜中腐败微生物的鉴定方法。
技术介绍
1、辣白菜是一种家家喜爱的下饭小菜，需经过腌渍及发酵等过程制成，但其保质期较短容易腐败变质，因此辣白菜的防腐保鲜是一个需要解决的民生问题。对于解决辣白菜的腐败问题，关键是针对性的抑制其中腐败菌的生长，为了实现靶向抑制，首要任务就是鉴别辣白菜中的腐败微生物种类。目前对于辣白菜中腐败微生物的鉴别主要采用平板划线鉴定法，这种方法是将辣白菜及其汁液拍打混匀后在固体培养基上培养，多次筛选使菌株分离纯化，其弊端是受鉴定培养基种类及一些不易在培养基上生长的微生物(如活的不可培养状态微生物，亚致死微生物)的限制，使鉴定的微生物种类不全，不利于后续防腐保鲜研究；而且目前的培养基鉴定方法往往不对辣白菜进行前期的微生物富集培养，很可能导致一些含量很低的腐败微生物被漏检。因此需要专利技术一种方法来对辣白菜中的腐败微生物进行全面鉴定。
技术实现思路
1、本专利技术为解决上述辣白菜中腐败微生物鉴定不全面的问题，提供了一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法。通过清洗在4℃、28℃以及37℃中富集培养的腐败辣白菜，使腐败微生物收集在水中，通过静置、离心等方式尽可能多的得到含有微生物的澄清液体，弃掉配料、辣白菜等会影响后期16s rdna及18s rdna鉴定的物质，随后使用抽滤装置对清洗液进行过滤，使清洗液中的微生物富集在0.22μm的滤膜上，最后对滤膜上富集的微生物进行16srdna及18s rdna检测，以更全面的鉴定出腐败辣白
2、鉴定方法具体包括以下步骤：
3、(1)将经过富集培养的腐败辣白菜用蒸馏水清洗，使辣白菜中的微生物都溶于水中，弃去辣白菜固体；
4、(2)将清洗辣白菜的水静置，使得到的清洗液中的固体及大颗粒沉降；
5、(3)将静置后的清洗液中的上清液部分取出备用，并取剩下的浑浊部分于25℃、3000g条件下离心10min，同样取上清液部分备用；
6、(4)将步骤(3)中收集的所有上清液合并后通过布氏漏斗抽滤装置进行过滤；
7、(5)对滤膜上富集的微生物进行16s rdna及18s rdna检测。
8、步骤(1)中，经过富集培养的腐败辣白菜是指将腐败辣白菜分为三份，分别放于4℃、28℃及37℃进行2-3天的富集培养，以增加腐败微生物的数量，然后将三份辣白菜合并后进行蒸馏水清洗；清洗辣白菜的蒸馏水要使用0.22μm的滤膜进行过滤除菌；清洗前先将辣白菜包装袋中的汁水全部收集备用，随后分批取出辣白菜固体，每次取的量不要多，以保证辣白菜上的微生物尽量都能被清洗下来，取出的辣白菜固体在清水中清洗三次，将清洗的水收集备用，并将辣白菜固体弃去，每次清洗都需更换清水。
9、步骤(2)中，清洗过辣白菜的水要静置沉降完全，以减少上清液中残存的固体杂质。
10、步骤(3)中，静置后的辣白菜清洗液分为三层：上层澄清液体部分、中层浑浊液体部分以及固体沉淀部分，取上层澄清液体部分时注意不要取到中层浑浊部分，固体沉淀部分需丢弃；在取离心过的浑浊液体部分的上清液时要避免吸入沉淀部分。
11、步骤(4)中，采用0.22μm的滤膜进行抽滤，且在过滤的过程中不更换滤膜，以确保微生物被集中富集；滤膜在使用前要用过滤好的蒸馏水反复冲洗以去除滤膜上可能存在的杂质及微生物。
12、本专利技术的有益效果：
13、本专利技术建立了一种鉴定辣白菜中腐败微生物的有效方法，将腐败辣白菜放于不同培养温度进行腐败微生物的富集培养，然后用无菌水清洗辣白菜，并使用布氏漏斗抽滤装置过滤清洗液，使微生物富集在滤膜上，最后对滤膜上的微生物进行16s rdna及18s rdna鉴定，本专利技术有助于更加全面的鉴定腐败辣白菜中的微生物种类。
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1.一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：对腐败辣白菜中的微生物进行富集，使用滤膜对腐败辣白菜中的微生物进行收集，使用16S rDNA及18S rDNA检测技术对收集的微生物进行种类鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于，包括步骤如下：
3.根据权利要求2所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：步骤(1)中，经过富集培养的腐败辣白菜是指将腐败辣白菜分为三份，分别放于4℃、28℃及37℃进行2-3天的富集培养，以增加腐败微生物的数量，然后将三份辣白菜合并后进行蒸馏水清洗；清洗辣白菜的蒸馏水要使用0.22μm的滤膜进行过滤除菌；清洗前先将辣白菜包装袋中的汁水全部收集备用，随后分批取出辣白菜固体，每次取的量不要多，以保证辣白菜上的微生物尽量都能被清洗下来，取出的辣白菜固体在清水中清洗三次，将清洗的水收集备用，并将辣白菜固体弃去，每次清洗都需更换清水。
4.根据权利要求2所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：步骤(2)中，清洗过辣白菜的水要静置沉降完全，以减少上清液中残存的固体杂质
5.根据权利要求2所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：步骤(3)中，静置后的辣白菜清洗液分为三层：上层澄清液体部分、中层浑浊液体部分以及固体沉淀部分，取上层澄清液体部分时注意不要取到中层浑浊部分，固体沉淀部分需丢弃；在取离心过的浑浊液体部分的上清液时要避免吸入沉淀部分。
6.根据权利要求2所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：步骤(4)中，采用0.22μm的滤膜进行抽滤，且在过滤的过程中不更换滤膜，以确保微生物被集中富集；滤膜在使用前要用过滤好的蒸馏水反复冲洗以去除滤膜上可能存在的杂质及微生物；
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：对腐败辣白菜中的微生物进行富集，使用滤膜对腐败辣白菜中的微生物进行收集，使用16s rdna及18s rdna检测技术对收集的微生物进行种类鉴定。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于，包括步骤如下：
3.根据权利要求2所述的一种鉴定辣白菜中腐败微生物的方法，其特征在于：步骤(1)中，经过富集培养的腐败辣白菜是指将腐败辣白菜分为三份，分别放于4℃、28℃及37℃进行2-3天的富集培养，以增加腐败微生物的数量，然后将三份辣白菜合并后进行蒸馏水清洗；清洗辣白菜的蒸馏水要使用0.22μm的滤膜进行过滤除菌；清洗前先将辣白菜包装袋中的汁水全部收集备用，随后分批取出辣白菜固体，每次取的量不要多，以保证辣白菜上的微生物尽量都能被清洗下来，取出的辣白菜固体在清水中清洗三次，将...
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