【技术实现步骤摘要】
本申请涉及医药领域，具体涉及人乳头瘤病毒的疫苗，尤其涉及九价人乳头瘤病毒的疫苗及其应用。
技术介绍
1、人乳头瘤病毒(human papillomavirus,hpv)，是一种无包膜的小dna病毒，可感染人表皮和粘膜鳞状上皮细胞。于1974年首次提出了hpv感染与宫颈癌的关系，并最终证明hpv感染是引起宫颈癌发生的主要病因。hpv感染是最常见的生殖道病毒感染，人感染hpv不仅有可能导致宫颈癌，还可能引起肛门生殖器癌和生殖器疣，此外，口咽癌和其他头颈部癌、结肠癌、直肠癌的发生也与hpv感染相关。目前已鉴别的hpv型别有二百多种，根据致癌性可分为低危型和高危型，低危型hpv主要包括hpv6/11/30/42/43/44/61型等，其中90％的生殖器疣是由hpv6和11型感染引起的；世界卫生组织(world health organization,who)国际癌症研究署(international agency for research on cancer,iarc)最新定义的高危型hpv包括12种与人类癌症明确相关的型别(hpv16/18/31/33/35/39/45/51/52/56/58/59型)和2种致癌性证据有限的型别(hpv66/68型)，高危型hpv具有致癌性，是几乎所有宫颈癌的病因，此外，还导致88％的肛门癌、78％的阴道癌、15％～48％的外阴癌(与年龄有关)、51％的阴茎癌和13％～60％的口咽癌。
2、接种hpv疫苗是预防hpv持续感染和相关疾病发生的最经济、有效的手段。目前国内外已上市的九价hpv疫
技术实现思路
1、基于现有技术的需求，本专利技术通过深入研究获得涵盖2种与生殖器疣明确相关，7种与宫颈癌明确相关型别(hpv6、11和hpv16、18、31、33、45、52、58型)抗原的预防性九价人乳头瘤病毒疫苗。
2、本专利技术首先提供九价人乳头瘤病毒疫苗，其包括hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58型截短的l1-vlp抗原，及氢氧化铝佐剂；
3、优选地，其hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原用量重量比为(1～3):(1～5):(2～7):(1～5):(0.5～3):(0.5～3):(0.5～3):(0.5～3):(0.5～3)；优选地，其hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原用量重量比为1.5:2:3:2:1:1:1:1:1；
4、更具体地，每0.5ml里每种抗原用量为10～100μg，更优选为hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原分别为30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg；氢氧化铝佐剂的用量为0.5～1.0mg，优选为0.75mg。
5、更具体地，hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原由大肠杆菌系统表达获得。
6、具体实施方式中，各型l1-vlp抗原的粒径为45～80nm,更优选hpv6l1-vlp抗原的粒径为45～60nm，hpv11l1-vlp抗原的粒径为45～60nm，hpv16l1-vlp抗原的粒径为45～60nm，hpv18l1-vlp抗原的粒径为55～75nm，hpv31l1-vlp抗原的粒径为55～75nm，hpv33l1-vlp抗原的粒径为45～60nm，hpv45l1-vlp抗原的粒径为50～65nm，hpv52l1-vlp抗原的粒径为50～65nm，hpv58l1-vlp抗原的粒径为45～60nm；
7、更具体地氢氧化铝佐剂的粒径为3～10μm。
8、优选地，所述各型l1-vlp蛋白抗原由各型l1五聚体蛋白与组装液(ph4.5～5.5，nacl浓度2.0～5.0m)混合后组装而成，l1五聚体蛋白的粒径为10～15nm。
9、在具体的实施方式中，hpv6l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv11l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv16l1五聚体蛋白的粒径为11～14nm，hpv18l1五聚体蛋白的粒径为11～14nm，hpv31l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv33l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv45l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv52l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv58l1五聚体蛋白的粒径为11～14nm。
10、在具体实施方式中，所述氢氧化铝佐剂的制备方法如下：取氯化铝和氢氧化钠，按al3+和oh-按摩尔比1:(2～5)反应，反应体系不添加氯化钠，室温或50～70℃反应后升温至80℃维持ph 6.0～7.0左右处理50～70min，下罐后用氯化钠溶液洗涤(重悬质量比≥6.5:1)4次以上得到氢氧化铝佐剂。
11、进一步地，洗涤后的氢氧化铝佐剂根据投料量用注射水或0.9％氯化钠溶液重悬至铝含量至7mg/ml后分装并高压蒸汽灭菌121℃，20min。
12、在优先实施方式中，所述各型l1-vlp抗原中的l1蛋白在野生型序列的基础有如下截短：野生型hpv6l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv11l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv16l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv18l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv31l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv33l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv45l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv52l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸；野生型hpv58l1的n端截短不多于10个氨基酸，c端截短不多于30个氨基酸。
13、更优选地，所述各型l1蛋白的氨基酸序列分别如seq id no.1、seq id no.3、seqid no.5、seq id no.7、seq id no.9、seq id no.11、seq id no.13、seq id no.15、seq idno.17所示。
14、在另外实施方式中，所述疫苗采用组氨酸-盐酸缓冲体系，并添加渗透压调节剂和表面活性剂，优选地，所述渗透压调节剂选自氯化钠、磷酸钠或硫酸钠的一种或多种，优选为氯化钠；所述表面活性剂为聚山梨酯80。
15、优选地，所述组氨酸-盐酸缓冲体系的ph为5～7，更优选ph为5.5～6.本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.九价人乳头瘤病毒疫苗，其包括HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58 型截短的L1-VLP抗原，及氢氧化铝佐剂；
2.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，其中HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58L1-VLP抗原用量重量比为1.5:2:3:2:1:1:1:1:1；优选地，每0.5ml 里每种抗原用量为10～100μg，更优选为HPV6、11、16、18、31、33、45、52、58L1-VLP抗原分别为30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg；氢氧化铝佐剂的用量为0.5～1.0mg，优选为0.75mg；
3.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，各型L1-VLP抗原的粒径为45～80nm，氢氧化铝佐剂的粒径为3～10μm；
4.如权利要求3所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，各型L1-VLP蛋白抗原由各型L1五聚体蛋白组装而成，L1五聚体蛋白的粒径为10～15nm；更优选HPV6L1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，HPV11
5.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，所述氢氧化铝佐剂的制备方法如下：取氯化铝和氢氧化钠，按Al3+和OH-按摩尔比1:（2～5）反应，反应体系不添加氯化钠，室温或50～70℃反应后升温至80℃维持 pH 6.0～7.0左右处理50～70min，下罐后用氯化钠溶液洗涤（重悬质量比≥6.5:1）4次以上得到氢氧化铝佐剂；
6.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，所述各型L1五聚体蛋白中的L1蛋白在野生型序列的基础有如下截短：野生型HPV6L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV11L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV16L1的N端截短不多于10个氨基酸， C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV18L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV31L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV33L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV45L1的 N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV52L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸；野生型HPV58L1的N端截短不多于10个氨基酸，C端截短不多于30个氨基酸。
7.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，所述各型L1蛋白的氨基酸序列分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ IDNO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17所示。
8.如权利要求1至7任一项所述的九价人乳头瘤病毒疫苗的制备方法，其包括如下步骤：
9.如权利要求8所述的九价人乳头瘤病毒疫苗的制备方法，其特征在于，还包括成品灌装，具体地启动预灌封注射器灌装机进行灌装，优选地，灌装速度为30～40转/min，更优选地以0.55ml/支灌注分装并加胶塞，于2～8℃冷库中保存备用。
10.如权利要求1至7任一项所述的九价人乳头瘤病毒疫苗在制备预防或治疗人乳头瘤病毒所致疾病的药物中的用途。
...【技术特征摘要】
1.九价人乳头瘤病毒疫苗，其包括hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58 型截短的l1-vlp抗原，及氢氧化铝佐剂；
2.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，其中hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原用量重量比为1.5:2:3:2:1:1:1:1:1；优选地，每0.5ml 里每种抗原用量为10～100μg，更优选为hpv6、11、16、18、31、33、45、52、58l1-vlp抗原分别为30μg、40μg、60μg、40μg、20μg、20μg、20μg、20μg、20μg；氢氧化铝佐剂的用量为0.5～1.0mg，优选为0.75mg；
3.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，各型l1-vlp抗原的粒径为45～80nm，氢氧化铝佐剂的粒径为3～10μm；
4.如权利要求3所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，各型l1-vlp蛋白抗原由各型l1五聚体蛋白组装而成，l1五聚体蛋白的粒径为10～15nm；更优选hpv6l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv11l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv16l1五聚体蛋白的粒径为11～14nm，hpv18l1五聚体蛋白的粒径为11～14nm，hpv31l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv33l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv45l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv52l1五聚体蛋白的粒径为12～15nm，hpv58l1五聚体蛋白的粒径为11～14nm。
5.如权利要求1所述的九价人乳头瘤病毒疫苗，其特征在于，所述氢氧化铝佐剂的制备方法如下：取氯化铝和氢氧化钠，按al3+和oh-按摩尔比1:（2～5）反应，反应体系不添加氯化钠，室温或50～70℃反应后升温至80℃维持 ph 6.0～7.0左右处理50～70min，下罐后用氯化钠溶液洗涤（重悬...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘永江，银飞，于泓洋，陈晓，伍树明，张海江，姜绪林，高俊，高文双，刘玉莹，张佳涛，冯慧彬，沈迩萃，李玲，史亚征，薛俊莲，王学红，蒋丽蓉，吕木子，
申请(专利权)人：北京康乐卫士生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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