【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及一种可用于调控巨噬细胞炎症表型的根尖牙乳头干细胞与其凋亡囊泡及制备方法和应用。
技术介绍
1、巨噬细胞极化，即其炎症表型的改变，在多种炎症性疾病的发生发展中起着重要的调控作用。促炎表型巨噬细胞过度聚积加剧局部炎症反应，引发炎症性疾病，如根尖周炎、牙周病、骨关节炎等。因此，调控巨噬细胞表型可用于治疗炎症性疾病。
2、根尖周炎是发生在根尖周组织的炎症性疾病，其导致根尖骨质破坏，最终造成牙齿缺失。据统计，全球由龋病引起的牙髓根尖周病的患者高达20多亿人。目前最有效的治疗根尖周炎的方法是根管治疗术，即在摘除感染坏死的牙髓组织、去除根管内感染物质的基础上，用根管充填材料封闭原来牙髓组织所占据的空间，阻止细菌的侵入，以达到消除炎症的目的。然而，由于根管治疗过程中彻底清除坏死的牙髓组织，将导致牙齿失去牙髓的营养供给后抵抗力降低，生物力学行为也受到影响，容易发生牙折导致牙齿缺失。此外，根管治疗后的牙齿失去再次探知感染的能力，将会引起更大的口腔问题。因此，研发更有效的根尖周炎治疗方法极为重要。由于巨噬细胞极化在根尖周炎、牙周病、骨关节炎等炎症性疾病发生中起重要调控作用，通过调控巨噬细胞表型适用于根尖周炎治疗的方法，也将可能适用于其他炎症性疾病的治疗。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题在于针对上述现有技术的不足，提供一种根尖牙乳头干细胞与其凋亡囊泡及制备方法和应用。该制备方法简单易行，通过使用根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡，能够降低巨噬细胞的促炎
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3、步骤一、体外分离培养根尖牙乳头干细胞；
4、步骤二、采用星形孢菌素诱导步骤一中分离培养的根尖牙乳头干细胞凋亡；
5、步骤三、收集步骤二中的细胞和培养液上清，通过离心法获得凋亡囊泡。
6、上述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤一中所述根尖牙乳头干细胞为人原代根尖牙乳头干细胞。
7、上述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤一中所述体外分离培养的培养基为含有20％胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的α-mem培养基。
8、上述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤二中所述星形孢菌素的添加量为250nm～500nm。
9、上述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤三中所述离心法包括：
10、步骤301、将所述细胞和培养液上清离心后去除细胞沉淀，收集上清；
11、步骤302、将步骤301中收集的上清离心后收集沉淀物，得到粗制凋亡囊泡；
12、步骤303、向步骤302中所述粗制凋亡囊泡中加入无菌pbs进行清洗，离心后收集沉淀，得到凋亡囊泡。
13、上述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤301中所述离心的温度为4℃，离心力为800g，时间为20min；步骤302中所述离心的温度为4℃，离心力为16000g，时间为30min；步骤303中所述离心的温度为4℃，离心力为16000g，时间为30min，离心次数为2次。
14、上述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，所述根尖牙乳头干细胞呈纺锤形；所述凋亡囊泡呈表面皱缩的球状，粒径为300～1000nm。
15、进一步地，本专利技术还提供了根尖牙乳头干细胞和/或凋亡囊泡在制备用于调控巨噬细胞炎症表型和/或治疗炎症疾病的制剂中的应用。
16、上述的应用，其特征在于，包含上述的根尖牙乳头干细胞和/或凋亡囊泡。
17、本专利技术与现有技术相比具有以下优点：
18、本专利技术的根尖牙乳头干细胞与其凋亡囊泡的制备方法简单易行，且成本低、产量高，通过使用根尖牙乳头干细胞和/或其凋亡囊泡，能够降低巨噬细胞的促炎表型，抑制巨噬细胞炎性因子的分泌，进而抑制炎症反应，达到治疗炎症的目的，可以用于根尖周炎等炎症相关疾病的治疗，在治疗根尖周炎等炎症疾病中具有较广阔的开发应用前景。本专利技术提供的根尖牙乳头干细胞和/或其凋亡囊泡还可以促进牙髓损伤的修复，在治疗炎症的同时，促进组织修复，对于根尖周炎等疾病具有更好的治疗效果。
19、下面结合附图和实施例，对本专利技术的技术方案做进一步的详细描述。
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1.一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤一中所述根尖牙乳头干细胞为人原代根尖牙乳头干细胞。
3.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤一中所述体外分离培养的培养基为含有20％胎牛血清、100U/mL青霉素和100μg/mL链霉素的α-MEM培养基。
4.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤二中所述星形孢菌素的添加量为250nM～500nM。
5.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤三中所述离心法包括：
6.根据权利要求5所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤301中所述离心的温度为4℃，离心力为800g，时间为20min；步骤302中所述离心的温度为4℃，离心力为16000g，时间为30min；步骤303中所述离心的温度为4℃，离心力为16000g
7.根据权利要求1或2所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，所述根尖牙乳头干细胞呈纺锤形；所述凋亡囊泡呈表面皱缩的球状，粒径为300～1000nm。
8.根尖牙乳头干细胞和/或凋亡囊泡在制备用于调控巨噬细胞炎症表型和/或治疗炎症疾病的制剂中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，包含如权利要求1所述的根尖牙乳头干细胞和/或凋亡囊泡。
...【技术特征摘要】
1.一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤一中所述根尖牙乳头干细胞为人原代根尖牙乳头干细胞。
3.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤一中所述体外分离培养的培养基为含有20％胎牛血清、100u/ml青霉素和100μg/ml链霉素的α-mem培养基。
4.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤二中所述星形孢菌素的添加量为250nm～500nm。
5.根据权利要求1所述的一种根尖牙乳头干细胞及其凋亡囊泡的制备方法，其特征在于，步骤三中所述离心法包括：
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【专利技术属性】
技术研发人员：胡丽芳，王玮，骞爱荣，曾涵柔，
申请(专利权)人：西北工业大学，
类型：发明
国别省市：
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