【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物组织培养领域，尤其涉及一种矢车菊组织培养方法。
技术介绍
1、矢车菊(centaurea cyanus)作为一种药食同源的花卉，被广泛应用在医药、化妆品、食品领域，其花部提取物含有大量生物活性物质，可以起到抗炎、抗氧化的功能，未来还可以作为食用色素、膳食纤维的来源。花色呈现靓丽的蓝色花，在切花和地被栽培中具有重要的应用价值。在蓝色花研究领域中矢车菊以其独特的呈色物质成为矢车菊素呈现蓝色的代表性物种，具有极为重要的科研价值。国外研究者对矢车菊的再生体系进行了初步的探究，但是该体系并不稳定，重复性较差，阻碍了遗传转化体系的建立。基于转录组分析获得的关键候选基因无法在本源植物中进行功能分析，这大大阻碍了药用食用成分合成和蓝色花形成的分子机制研究。
2、目前最稳定的基因功能验证体系仍然是在本源植物中建立的遗传转化验证。基于农杆菌侵染的组培环境以及转化技术最为常用，而该技术的实现依赖于高效的再生体系。建立高效的矢车菊组培体系能从根本上解决矢车菊再生的问题，为关键基因功能验证打下基础，有利于矢车菊内源生物活性物质体外合成和开发利用，为花色研究等提供生物学技术。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的不足，提供一种矢车菊组培再生的技术方法。
2、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种矢车菊组织培养的方法，包括如下步骤：
3、将矢车菊叶片作为外植体，接种至诱导愈伤组织诱导和不定芽分化培养基上进行诱导培养，先后产生愈伤组织和不定芽
4、上述方法中，所述诱导愈伤组织诱导和不定芽分化培养基为以ms固体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入6-ba、naa和水解酪蛋白，得到的6-ba含量为3mg/l、naa的含量为0.5mg/l、水解酪蛋白含量为100mg/l的固体培养基。
5、上述方法中，所述去玻璃化培养基为ms固体培养基。
6、上述方法中，所述生根培养基为以1/2ms固体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入iba，得到的iba含量为0.8mg/l的固体培养基。
7、上述方法中，所述ms固体培养基为以ms液体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入凝固剂，得到的ph值为5.8-6.0的固体培养基。
8、上述方法中，所述ms液体培养基可为向含有维生素的ms基本培养基盐(murashige&skog basal medium with vitamins(phytotech labs公司产品，产品id：m519))中加入水(溶剂)和蔗糖得到的液体培养基，该ms液体培养基中的含有维生素的ms基本培养基盐的含量为4.43g/l，蔗糖的含量为30g/l。
9、上述方法中，所述1/2ms固体培养基为以1/2ms液体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入凝固剂(凝固剂可选用植物凝胶或琼脂等)，得到的ph值为5.8-6.0的固体培养基。本专利技术实施例中选用琼脂作为凝固剂，所述1/2ms固体培养基中蔗糖的含量为30g/l。
10、上述方法中，所述1/2ms固体培养基以1/2ms液体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入凝固剂，得到的ph值为5.8-6.0的固体培养基。
11、上述方法中，所述1/2ms液体培养基的溶质(除水以外的物质)种类、溶剂(水)和ms液体培养基相同，大量元素的含量为ms培养基中相应溶质含量的一半，其余溶质含量和ms液体培养基相同。
12、上述方法中，所述诱导愈伤组织诱导和不定芽分化培养基、所述去玻璃化培养基和所述生根培养基的ph值均为5.8-6.0。
13、上述方法中，所述的外植体取自为无菌播种并生长至4片真叶时的矢车菊，从子叶起第1-3片的真叶。
14、上述方法中，所述外植体为直径0.5-0.8cm的小圆盘叶片。
15、上述方法中，所述培养在温度为20-22℃，光照强度为2000lx，每天16h光照和8h黑暗的条件下进行。
16、上述方法中，所述诱导培养的时间为40-60d。
17、上述方法中，所述去玻璃化培养的时间为30-40d。
18、上述方法中，所述生根培养的时间为10-15d。
19、上述矢车菊组织培养方法还包括炼苗、移栽和长日照栽培。
20、本专利技术还保护上述矢车菊组织培养方法在矢车菊遗传转化中的应用。
21、本专利技术利用矢车菊叶片作为外植体，经诱导愈伤组织和不定芽分化、去玻璃化培养、生根、炼苗、移栽和长日照栽培后获得再生开花植株，建立了矢车菊再生体系，为进一步建立并利用遗传转化体系解析矢车菊内部生物活性物质和花色分子机制研究等奠定了基础。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种矢车菊组织培养的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导愈伤组织诱导和不定芽分化培养基为以MS固体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入6-BA、NAA和水解酪蛋白，得到的6-BA含量为3mg/L、NAA的含量为0.5mg/L、水解酪蛋白含量为100mg/L的固体培养基。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述去玻璃化培养基为MS固体培养基。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述生根培养基为以1/2MS固体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入IBA，得到的IBA含量为0.8mg/L的固体培养基。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述诱导愈伤组织诱导和不定芽分化培养基、所述去玻璃化培养基和所述生根培养基的pH值均为5.8-6.0。
6.根据权利要求1-5任一所述的方法，其特征在于，所述的外植体取自生长至4片真叶时的矢车菊植株上的第2-3片真叶。
7.根据权利要求1-6任一所述的方法，其特征在于，所述
8.根据权利要求1-7任一所述的方法，其特征在于，所述诱导培养的时间为40-60d；所述去玻璃化培养的时间为30-40d；所述生根培养的时间为10-15d。
9.根据权利要求1-8任一所述的方法，其特征在于，所述方法还包括将所述矢车菊生根苗炼苗后移栽定植。
10.权利要求1-9任一所述的方法在矢车菊遗传转化中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种矢车菊组织培养的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述诱导愈伤组织诱导和不定芽分化培养基为以ms固体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入6-ba、naa和水解酪蛋白，得到的6-ba含量为3mg/l、naa的含量为0.5mg/l、水解酪蛋白含量为100mg/l的固体培养基。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述去玻璃化培养基为ms固体培养基。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，所述生根培养基为以1/2ms固体培养基为基础培养基，向该基础培养基中加入iba，得到的iba含量为0.8mg/l的固体培养基。
5.根据权利要求1-4任一所述的方法，其特征在于，所述诱导愈伤组织诱导和不...
【专利技术属性】
技术研发人员：戴思兰，王佳颖，邓成燕，李艳飞，罗虹，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。