【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于药物评价，尤其涉及一种体外评价植物甾醇对肝脏胆固醇影响的方法。
技术介绍
1、胆固醇是一种脂类物质，它在人体内广泛存在，并且通过肝脏合成和饮食摄入的方式进入体内。高水平的胆固醇对人体健康有害，特别是会增加患心血管疾病的风险。因此，调控肝脏胆固醇代谢，降低胆固醇水平对于预防和治疗心血管疾病非常重要。
2、植物甾醇是一类天然存在于植物中的化合物，其具有结构和功能上类似于胆固醇。在人体内，植物甾醇可以与胆固醇竞争性地吸收和排除，从而减少胆固醇的摄入和吸收。因此，植物甾醇被认为是一种降低胆固醇水平的有效方法。为了评价植物甾醇的降胆固醇效果，需要建立一种可靠的体外评价方法。该方法可以模拟人体内的胆固醇代谢过程，并测量植物甾醇对胆固醇吸收和排除的影响。建立这样一个体外评价方法可以帮助研究人员评估植物甾醇作为降低胆固醇的潜在治疗药物的功效。这种方法可以用于筛选和评估新药物或天然产物，以及优化治疗方案。
技术实现思路
1、本专利技术的目的之一在于提供一种体外评价植物甾醇对肝脏胆固醇影响的方法，所述方法包括以下步骤：分别设肝细胞对照组、高胆固醇模型组、植物甾醇组；对照组中肝细胞采用无血清基础培养基培养；高胆固醇模型组中使用的培养基为在对照组培养基的基础上添加终浓度18-22μg/ml的胆固醇获得的培养基；植物甾醇组中使用的培养基为在高胆固醇模型组培养基的基础上添加终浓度18-22μg/m的植物甾醇获得的培养基，上述三种培养基分别处理肝细胞22-26h后，测定细胞活性、脂质沉
2、优选地，所述高胆固醇模型组中添加的胆固醇终浓度为20μg/ml。
3、更优选地，所述植物甾醇组中添加的植物甾醇的中终浓度为20μg/ml。
4、更优选地，所述植物甾醇为大豆甾醇。
5、更优选地，所述肝细胞为生长80％密度的l02细胞。
6、更优选地，所述细胞活性检测为生长于96孔板内的肝细胞处理结束后，每孔加入10μl cck-8试剂待1h后，利用酶标仪450nm，检测其吸光度。
7、更优选地，所述脂质沉积的测定为处理后的肝细胞，利用油红染色试剂，按照试剂盒方法操作，观察其脂质沉积情况。
8、更优选地，所述胆固醇沉积的测定为处理后的肝细胞，利用邻苯二甲醛-醋酸-浓硫酸染色操作，观察其胆固醇沉积情况。
9、更优选地，所述胆固醇合成关键基因为hmgcr和srebp-2，提取肝细胞rna、反转录，后利用rt-pcr检测基因上述基因表达量。
10、与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：
11、本专利技术利用人的正常肝细胞(l02)为研究对象，构建高胆固醇模型，检测细胞活性、细胞脂质沉积、细胞内tc含量及胆固醇合成代谢的关键靶基因，确定了植物甾醇的降低胆固醇效果。实验对象、模型更贴合人体的生理和代谢，实验数据和结果更具可靠性；体外评价试验干扰因素单一，结果准确、稳定，更利于植物甾醇功能的评定。
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1.一种体外评价植物甾醇对肝脏胆固醇影响的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：分别设肝细胞对照组、高胆固醇模型组、植物甾醇组；对照组中肝细胞采用无血清基础培养基培养；高胆固醇模型组中使用的培养基为在对照组培养基的基础上添加终浓度18-22μg/mL的胆固醇获得的培养基；植物甾醇组中使用的培养基为在高胆固醇模型组培养基的基础上添加终浓度18-22μg/m的植物甾醇获得的培养基，上述三种培养基分别处理肝细胞22-26h后，测定细胞活性、脂质沉积、胆固醇沉积、细胞内TC含量及胆固醇合成关键基因的表达，进而对植物甾醇对肝脏胆固醇的影响进行评价。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高胆固醇模型组中添加的胆固醇终浓度为20μg/mL。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述植物甾醇组中添加的植物甾醇的中终浓度为20μg/mL。
4.根据权利要求3中所述的方法，其特征在于，所述植物甾醇为大豆甾醇。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述肝细胞为生长80％密度的L02细胞。
6.根据权利要求5
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述脂质沉积测定为处理后的肝细胞，利用油红染色试剂，按照试剂盒方法操作，观察其脂质沉积情况；所述胆固醇沉积的测定为处理后的肝细胞，利用邻苯二甲醛-醋酸-浓硫酸染色操作，观察其胆固醇沉积情况。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述胆固醇合成关键基因为HMGCR和SREBP-2，提取肝细胞RNA、反转录，后利用RT-PCR检测基因上述基因表达量。
...【技术特征摘要】
1.一种体外评价植物甾醇对肝脏胆固醇影响的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：分别设肝细胞对照组、高胆固醇模型组、植物甾醇组；对照组中肝细胞采用无血清基础培养基培养；高胆固醇模型组中使用的培养基为在对照组培养基的基础上添加终浓度18-22μg/ml的胆固醇获得的培养基；植物甾醇组中使用的培养基为在高胆固醇模型组培养基的基础上添加终浓度18-22μg/m的植物甾醇获得的培养基，上述三种培养基分别处理肝细胞22-26h后，测定细胞活性、脂质沉积、胆固醇沉积、细胞内tc含量及胆固醇合成关键基因的表达，进而对植物甾醇对肝脏胆固醇的影响进行评价。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述高胆固醇模型组中添加的胆固醇终浓度为20μg/ml。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述植物甾醇组中添加的植物甾醇的中终浓度为20μg/ml。
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【专利技术属性】
技术研发人员：王汝霞，胡林芳，刘会平，刘建平，蔡力创，蒋亮，涂越，彭美珍，郭雄昌，刘文森，曾维荣，
申请(专利权)人：江西省科学院生物资源研究所，
类型：发明
国别省市：
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