【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备，特别涉及一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法。
技术介绍
1、nadp在生物中广泛存在但含量极低。目前，制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nadp)的方法有多种，包括化学合成、生物酶催化及酵母菌发酵提取等。化学合成法由于化工所固有的污染严重，条件苛刻，加之得率不高，合成成本较高。传统的生物法是采用发酵或其它微生物培养技术，并通过对酵母或其它微生物的分离提取得到nadp。该工艺过程虽然已很成熟，但是原料耗费巨大，劳动强度大，能源消耗大，产量有限，生产成本高，产品价格高，因此该方法在工业制备规模上具有很大的局限性。
2、nadp的生物酶催化主要在nad激酶的作用下，利用atp或多聚磷酸(poly(p))衍生物作为磷酸供体，催化nad磷酸化而获得。nad激酶分为两类，一类是以atp作为磷酰基供体的酶催化nad磷酸化的atp-nad激酶，另一类是以ploy(p)和atp作为磷酰基供体的酶催化nad磷酸化的poly(p)/atp-nad激酶。因为生物酶催化其固有的高效率、绿色环保等优点逐渐成为工业制备nadp的主流方法。但现有技术仍具有nadp合成的收率低、生产成本高，以及合成步骤繁琐、生产周期长等问题，且生物酶催化的传统纯化工艺多采用离子交换树脂纯化等手段，由于辅酶ⅱ合成工艺的影响，粗品中一般含有较多的磷酸根，而磷酸根用离子交换纯化的方法不易去除，且在纳滤浓缩过程中也很难去除干净。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种烟酰胺
2、为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：
3、参阅图1，一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，包括如下步骤：
4、步骤1：制备烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸反应液
5、生物酶选自nad激酶，nad激酶的cas号为9032-66-0，nad在nad激酶的作用下，添加氯化镁中和多聚磷酸链上的一些负电荷，减少了酶和核苷酸的多磷酸基团之间的非特异性离子相互作用从而促进磷酸盐的转移，六偏磷酸钠提供磷酸基团最终生成nadp+，破碎酵母细胞，得到nadp反应液；
6、步骤2：分离纯化烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸反应液
7、过膜：将nadp反应液ph值调节至2.5～3.5进行预处理，将经过预处理的辅酶ⅱ溶液用膜浓缩设备进行微滤和纳滤，收集浓缩的粗品溶液；
8、除杂：降温，溶液中加入乙醇至溶液中乙醇的终浓度为20％体积分数，对nadp处理液降温结晶待晶体析出后进行过滤，收集滤液；
9、析晶：将上述收集的滤液升温，搅拌至澄清，加入乙醇至溶液中乙醇的终浓度为50％体积分数混合均匀；加入nadp晶种，降温，待溶液中nadp的结晶率在90％以上时，过滤，收集滤饼，经干燥后即得高纯度烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸。
10、进一步地，破碎酵母细胞的具体步骤为：
11、反应物烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的添加量0.025m，nad激酶的添加量为4％，氯化镁的添加量为0.015m，六偏磷酸钠的添加量为50mg/ml，反应ph为7.0，在35℃条件下反应7h。
12、进一步地，除杂步骤中，降温至6±0.5℃。
13、进一步地，降温后保持ph为2.5～3.5。
14、进一步地，析晶步骤中滤液升温至25～30℃，降温至3±0.5℃。
15、进一步地，析晶步骤中升温后保持ph为2.5～3.5。
16、进一步地，析晶步骤中混合均匀后保持ph为2.5～3.5。
17、与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
18、1、本专利技术采用六偏磷酸盐代替atp作为磷酸基团供体，大大降低原料成本，操作简单，反应彻底，易实现产业化、规模化生产。
19、2、本专利技术提供的nadp的纯化方法具有收率高和纯化产物纯度高的优点。采用该纯化方法可从生物催化法制备nad的粗产物溶液中制备得到纯度在99％以上的nad纯品，且收率在85％左右。该纯化方法操作简单快捷，无需使用大量有毒有害试剂，对环境污染小，且纯化成本低廉，适宜规模化大工业化从生物酶反应液和生物发酵液中分离纯化nadp产品。
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1.一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，破碎酵母细胞的具体步骤为：
3.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，除杂步骤中，降温至6±0.5℃。
4.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，降温后保持pH为2.5～3.5。
5.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，析晶步骤中滤液升温至25～30℃，降温至3±0.5℃。
6.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，析晶步骤中升温后保持pH为2.5～3.5。
7.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，析晶步骤中混合均匀后保持pH为2.5～3.5。
【技术特征摘要】
1.一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，破碎酵母细胞的具体步骤为：
3.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，除杂步骤中，降温至6±0.5℃。
4.如权利要求1所述的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸的制备方法，其特征在于，降温后保持ph为2.5～...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘博超，居虎军，韩道平，杨亚航，胡琛，
申请(专利权)人：江西海文生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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