【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及胰酶制剂制备，具体涉及一种去除病毒制备胰酶的方法。
技术介绍
1、胰酶制剂由在兽医检查后发现适合人类消费的动物的猪胰腺组织生产。胰酶制剂是消化酶的混合物,主要是从猪胰中提取的淀粉酶、蛋白酶和脂肪酶。胰酶制剂由于其重要的治疗特性和高度的安全性,长期以来被用作酶替代疗法的药物制剂。多种胰酶制剂可作为消化酶补充剂商购获得,以帮助消化并增强营养物质的吸收。临床上胰酶替代疗法是治疗胰腺外分泌功能不全的主要手段,所述胰腺外分泌功能不全与囊性纤维化、慢性胰腺炎、胃肠道旁路手术术后(post-gastrointestinal bypass surgery)、胰腺切除术术后等有关。任何动物或人的原材料的所有生物制品的共同特征是病毒污染的风险。生物污染可能来自原料或在生产过程中引入的外来物质。
2、病毒是仅在其他生物体的活细胞内复制的小的传染原。病毒由被蛋白质壳和脂质层(某些情况下)包围的核酸(rna或dna)组成。仅产生蛋白质壳的病毒通常称为无包膜病毒,壳中含有蛋白质和脂质成分的病毒通常称为包膜病毒。它们的尺寸范围从约15nm到约450nm,并且不能用光学显微镜看到。已经通过电子显微镜、nmr波谱和x射线品体学研究了病毒的形状和结构。
3、病毒可感染生命形式的所有类型,从动物和植物到细菌和古细菌。由于病毒不能独立复制,它们依赖于宿主。因此,它们几乎存在于世界上所有的生物体中。已知的病毒很少对人有致病性,因为它们具有很高的宿主特异性。由于大部分可去除或灭活病毒的条件也会导致失活产物(被破坏的酶活性),所以改善的
4、生物制品病毒灭活/去除工艺目前的措施包括灭活技术和去除技术，灭活技术包括干热处理灭活法、巴氏消毒法、有机溶剂/表面活性剂(s/d)法和低ph孵育。其中，干热处理灭活法作为非特异的病毒灭活方法，对于脂包膜和部分非脂包膜病毒均可灭活，处理凝血因子等。巴氏消毒法可有效灭活脂包膜病毒和非包膜病毒处理血液制品比较理想。有机溶剂/表面活性剂(s/d)法能破坏脂包膜，对脂包膜病毒有效，对于非脂包膜病毒无效。低ph孵育对脂包膜病毒有效，对于非脂包膜病毒作用弱。去除技术包括层析(色谱)和亲和层析等膜过滤技术。其中，层析(色谱)包括离子交换层析，疏水层析和反向层析。亲和层析等膜过滤技术为通过纳米膜物理过滤去除病毒。
5、但是，迄今为止，还没有研发出可靠的方法去除或灭活胰酶样品中的所有病毒污染物。这是由于胰酶制剂中的活性酶与许多已知的失活条件(包括加热、低ph、氧化和电离辐射)不相容。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种去除病毒制备胰酶的方法，能在生产胰酶的过程中减少或灭活病毒和微生物，而不损害通过酶活性或酶活性比例测量的纯度、组成或效价。
2、本专利技术通过下述技术方案实现：
3、一种去除病毒制备胰酶的方法，包括以下步骤：
4、步骤一：将猪胰腺采用过氧乙酸溶液浸泡后再进行洗涤；
5、步骤二：将洗涤后的猪胰腺绞碎磨浆，加入氯化钙溶液自溶，获得浆液；
6、步骤三：将步骤二获得的浆液依次进行活化、猝灭；
7、步骤四：将淬灭后的浆液进行固液分离获得滤液；
8、步骤五：向步骤四获得的滤液中加入对脂类病毒有效的有机溶剂，使胰酶沉淀；
9、步骤六：洗涤、分离步骤五获得的湿沉淀；
10、步骤七：脱水获得沉淀并高温干燥沉淀。
11、其中，过氧乙酸是乙酸的过氧化物，是一种比过氧化氢更强的消毒，对分枝杆菌、真菌、病毒和细菌芽孢等具有良好的快速杀菌活性。
12、其中，对脂类病毒有效的有机溶剂可以是异丙醇，异丙醇对非脂类肠道病毒没有活性，但对脂类病毒有效。
13、其中，高温干燥的目的是高温消毒，其原理是长时间高温使病毒蛋白变性从而抑制病毒遗传物质的复制，最终使病毒失去传染性。
14、本专利技术先通过氧乙酸溶液浸泡猪胰腺，能够实现对猪胰腺的快速杀菌消毒，以减少病毒和微生物，然后在浆液中加入对脂类病毒有效的有机溶剂，对脂类病毒进行灭活处理，且对非脂类肠道病毒没有活性，最后再通过高温消毒胰酶沉淀使病毒失去传染性，即本专利技术过氧乙酸+对脂类病毒有效的有机溶剂+高温消毒的组合制备胰酶，不仅能在生产胰酶的过程中减少或灭活病毒和微生物，而不损害通过酶活性或酶活性比例测量的纯度、组成或效价，即不影响生物提取物中所含酶的活性并且不改变生物提取物中所含酶的组成。
15、进一步地，步骤一中，过氧乙酸溶液的浓度为10000-40000ppm。
16、进一步地，步骤一中，浸泡时间大于等于30min。
17、进一步地，步骤二中，氯化钙溶液中氯化钙的质量分数为1-2％。
18、进一步地，步骤二中，自溶之间大于等于10小时。
19、进一步地，步骤三中，活化的具体过程为：
20、在20-25℃水浴中活化2-3小时。
21、进一步地，步骤三中，猝灭为向活化后的磨浆中加入有机溶剂活化淬灭。
22、进一步地，步骤五中，有机溶剂为异丙醇。
23、进一步地，步骤五中高温干燥的温度为80-100℃。
24、进一步地，还包括：
25、步骤八：将步骤七获得的沉淀进行粉碎，获得病毒去除后的胰酶。
26、本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：
27、本专利技术提供了减少或灭活生物提取物的微生物和病毒污染的方法(过氧乙酸+异丙醇+高温消毒)，而不影响生物提取物中所含酶的活性并且不改变生物提取物中所含酶的组成。此外，该方法在最终产品中不产生任何有毒化合物或残留物。
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1.一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤一中，过氧乙酸溶液的浓度为10000-40000ppm。
3.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤一中，浸泡时间大于等于30min。
4.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤二中，氯化钙溶液中氯化钙的质量分数为1-2％。
5.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤二中，自溶之间大于等于10小时。
6.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤三中，活化的具体过程为：
7.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤三中，猝灭为向活化后的磨浆中加入有机溶剂活化淬灭。
8.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤五中，有机溶剂为异丙醇。
9.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤五中高温干燥的
10.根据权利要求1-9任一项所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，还包括：
...【技术特征摘要】
1.一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤一中，过氧乙酸溶液的浓度为10000-40000ppm。
3.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤一中，浸泡时间大于等于30min。
4.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤二中，氯化钙溶液中氯化钙的质量分数为1-2％。
5.根据权利要求1所述的一种去除病毒制备胰酶的方法，其特征在于，步骤二中，自溶之间大于等于10小时。
【专利技术属性】
技术研发人员：张革，肖勇，唐章勇，周后杰，李琛，张忠元，蒋维涛，罗瀚，郭婷，姚晶婷，余露，邓沁，
申请(专利权)人：四川德博尔制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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