本发明专利技术公开了一种从茯苓属植物中提取的用于治疗肿瘤和防治肿瘤转移及术后复发的茯苓多糖组合物。它含有茯苓属植物中通过分级醇沉方法得到的不同分子量的多糖，总醇沉物多糖含量大于５０－８０％，重均分子量道尔顿范围为０．２－３万。其中醇沉物３（６０％醇沉茯苓多糖）和醇沉物４（８０％醇沉茯苓多糖）具有明显的激活多形核白细胞，提高其杀伤肿瘤细胞的能力，从而发挥治疗肺癌、肝癌和结肠癌等肿瘤和防治其转移及术后复发的作用。药理实验证实：本发明专利技术的组合物疗效显著，安全有效且未出现任何毒副反应。本发明专利技术的中药组合物可以被制备成任何一种治疗肿瘤和抑制肿瘤转移及术后复发的制剂。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药制药
，涉及具有治疗肿瘤和抑制肿瘤转移及术后复发活性的茯苓多糖组合物及其制备方法以及在制备药物中应用。更具体的说是通过分级醇沉将 不同分子量的茯苓多糖分开，制备具有激活多形核白细胞，提高其杀伤肿瘤细胞能力而发 挥治疗肿瘤和防治肿瘤转移及术后复发作用的药物。
技术介绍
茯苓多糖(Pachymaran)来源于多孔菌科真菌茯苓(Poriacocos Wolf)。茯苓是我 国传统的中药材，被视为中药八珍之一，味甘、平，入心脾、胃、肾经，有健脾健肾、宁心安 神等功效。现代药理学作用表明，茯苓多糖能增强人体免疫功能，提高人体抗病能力，起到 防病、延缓衰老的作用。 以往研究表明，茯苓核中抗肿瘤作用的有效成分为e-茯苓聚糖(e-Pachyman)， 约占茯苓核干重的93%， e-茯苓聚糖转化成为e-茯苓多糖(13-Pachymaran)才具有活 性。茯苓聚糖(pachyman)是含有少量P -(l — 6)葡聚糖支链的P -(l — 3)_D_葡聚糖， 无抗肿瘤活性。经化学修饰切去茯苓聚糖分子主链上的—6)葡聚糖支链后，得到 13 -(l — 3)_D-葡聚糖称为茯苓多糖(pachymaran)，茯苓多糖经羧甲基化得到溶于水的羧 甲基茯苓多糖，具有较强的抗肿瘤活性，能减轻癌症患者放、化疗的毒副反应，并使患者的 免疫功能得到改善。 选择适合茯苓的提取方法，最大限度的提取茯苓的有效成分是研究茯苓药理作用 的基础。现有两种最新的提取方法，能使水溶性多糖的提取率得到明显的提高，即采用微波 技术提取法和复合酶热水浸提法提取法。前者与传统的萃取方法相比，具有选择性高、操作 时间短、溶剂消耗量少、有效成分得率高、适合于热不稳定成分等优点，而且作为吸收微波 最好介质的水也是中药提取的主要提取剂。后者由于酶的作用具有专一性，不会破坏茯苓 多糖的结构，且蛋白酶可降解获荃中所含蛋白质，从而使杂质含量低，可以在较低的温度下 提高多糖的提取率。 茯苓多糖抗肿瘤的作用是通过以下方式来体现的 1.茯苓多糖对细胞膜磷脂酰肌醇(PI)转换具有明显抑制作用。近年来发现，某些 肿瘤细胞的PI转换增强，癌基因编码产物如EGF、 PDGF、 TGF等能促进细胞的PI转换，许多 癌基因在肿瘤形成早期，PI激酶活性也增加，抑制和干扰PI转换，则可影响肿瘤生长发育。 因此，茯苓多糖通过对PI转换的影响可产生抑制肿瘤细胞的作用。 2.肿瘤细胞膜磷脂的脂肪酸组成明显改变，主要是花生四烯酸比例升高，花生四 烯酸在自由基攻击下发生过氧化发应的产物具有促进肿瘤发生和生长的作用。茯苓多糖可 以改变其磷脂的脂肪组成，降低花生四烯酸和豆蔻酸的含量，从而发挥抗肿瘤作用。茯苓多 糖还可通过升高肿瘤细胞膜上的唾液酸量，影响细胞表面电荷特性，细胞膜的物质转运，抗 原决定簇的暴露以及改变免疫细胞的活化膜表面受体的功能，从而发挥抑制肿瘤细胞增殖 的作用。3 3.茯苓多糖可通过抑制肿瘤细胞DNA、 RNA的合成发挥直接杀伤肿瘤细胞的作用 4.激活机体的免疫监视系统也是茯苓多糖发挥抗肿瘤作用的主要机制已有实 验表明证明茯苓多糖可在体内外促进细胞因子的释放，对抗化疗药物对细胞因子的抑制作 用。可诱导T淋巴细胞产生IL-2、IL-6、IFN-a、IFN-g、TNF、LT、LR等，并能提高某些因子的 活性。IL-2能诱导TH细胞和TC细胞增殖，增强NK细胞及淋巴因子活化的杀伤细胞(LAK) 的活性，茯苓多糖还能增强巨噬细胞识别功能，提高巨噬细胞的吞噬指数，并能通过增强 TNF基因的转录而增强巨噬细胞释放TNF，并增强其活性。TNF不仅直接参与单核细胞对肿 瘤细胞的杀伤，而且能通过抑制基因转录活性，特异地降低myc基因mRNA的表达水平，使人 白细胞抗原(HLA)的mRNA表达水平升高，增强细胞免疫尤其是细胞毒性T淋巴细胞(CTL) 活性，间接发挥杀伤肿瘤细胞的作用。 5.增强脾、胸腺功能，对抗肿瘤及化疗药物对胸腺、脾脏的抑制脾、胸腺乃至骨 髓都是人体重要的免疫器官，在肿瘤患者中多会出现脾及胸腺的功能低下，而放疗、化疗又 对脾、胸腺及骨髓功能有不同程度的抑制。茯苓多糖在保护与提高脾、胸腺功能，增加脾、胸 腺指数方面的作用已为多数体内外实验证实。 6.对体液免疫的作用机体的免疫应答有赖于体液免疫与细胞免疫的综合作用， 巨噬细胞，NK细胞发挥抗肿瘤作用的重要机制之一便是介导体液免疫的B细胞所参与的抗 体依赖性细胞介导的细胞毒作用(ADCC)，因此对B细胞及体液免疫的增强在抗肿瘤治疗中 有积极意义。实验证明茯苓多糖可使血清免疫球蛋白的IgG和IgM水平提高，从而促进体 液免疫。 在安全性方面，羧甲基茯苓多糖(CMP)无论是口服，还是腹腔注射或静脉注射，安 全剂量都较大。小鼠静脉注射给药，LD50为3. 13/kg。犬长期毒性实验的高剂量组为LD50 为10/kg，低剂量组为20/kg，连续3个月，未出现毒性反应。CMP的人拟临床给药途径是静 脉注射，最大剂量拟定为2mg/kg d，可以推算人拟最大剂量的78 156倍是安全的。以 细菌为指示生物的鼠伤寒沙门氏菌致突变实验的体外实验中，遗传学终点为基因突变。在 每皿中加入CMP的剂量在0. 5 ii g 5. Omg范围内，均能证明CMP为非致突变物。小鼠骨髓 多染红细胞微核实验的结果表明，相当于人拟临床最大剂量的125倍(250mg/kg)无致突变 的结果，提示CMP为非致突变物。大鼠致畸胎实验的结果表明，相当于人拟临床最大剂量的 125倍(250mg/kg d)，对妊娠大鼠无致畸胎的结果。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，是提供一种分级醇沉得到的茯苓多糖组合物(也可称 为有效部位)，其可与常规的药用载体混合，制备具有治疗肿瘤和抑制肿瘤转移及术后复发 活性的茯苓多糖药物组合物。为达到上述目的本专利技术提供了如下的技术方案 —种用于抑制肿瘤生长和防治其转移及复发的茯苓多糖组合物，其特征在于含有 茯苓属植物中通过分级醇沉方法得到的不同分子量的多糖，总醇沉多糖含量为50-80% ;其 重均分子量道尔顿范围为0. 2-3万。 本专利技术优选的茯苓多糖组合物。它是通过分级醇沉将不同分子量分布的醇沉物1、 醇沉物2、醇沉物3和醇沉物4茯苓多糖分开，得到不同分子量的多糖，也可以将醇沉物3与 醇沉物4混合，得到醇 物3与醇沉物4的组合物。其中总醇沉多糖含量为60-70% ;其重均分子量道尔顿范围为0. 2-2万。 本专利技术所述的茯苓多糖组合物，其中的茯苓多糖为含量大于60%的3、4醇沉物； 其分子量范围为0. 2-1. 5万。它是通过分级醇沉，将醇沉物3(60%醇沉茯苓多糖)和醇沉 物4(80%醇沉茯苳多糖)混合，其中醇沉物3、醇沉物4含量均大于60% ;形成具有明显激 活多形核白细胞，提高其杀伤肿瘤细胞能力的组合物，从而发挥防治肿瘤转移及术后复发 的作用。 本专利技术所述茯苓多糖组合物可以按如下的方法制备 (1)称取茯苓切片后粉碎，加入3-12倍重量份数的水，回流提取2-3次，合并提取 液滤过，除去不溶性杂质； (2)取提取液减压蒸馏浓縮，浓縮液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80%，静 置，过滤，收集沉淀； (3)加水溶解沉淀并煮沸，趁本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于抑制肿瘤生长和防治其转移及复发的茯苓多糖组合物，其特征在于含有茯苓属植物中通过分级醇沉方法得到的不同分子量的多糖，总醇沉多糖含量为５０－８０％；其重均分子量道尔顿范围为０．２－３万。
【技术特征摘要】
一种用于抑制肿瘤生长和防治其转移及复发的茯苓多糖组合物，其特征在于含有茯苓属植物中通过分级醇沉方法得到的不同分子量的多糖，总醇沉多糖含量为50-80％；其重均分子量道尔顿范围为0.2-3万。2. 如权利要求1所述的茯苓多糖组合物，其特征在于所述的总醇沉多糖包括醇沉物 1、醇沉物2、醇沉物3和醇沉物4或醇沉物3与醇沉物4的组合。3. 如权利要求1或2所述的茯苓多糖组合物，其中总醇沉多糖含量为60-70%;其分子 量范围为O. 2-2万。4. 如权利要求2所述的组合物，其中的总醇沉多糖为含量大于60%的3、4醇沉物；其 分子量范围为O. 2-1. 5万。5. —种制备权利要求l-4任一项所述茯苓多糖组合物的方法，其特征在于，总醇沉多 糖以如下的方法制备(1) 称取茯苓切片后粉碎，加入3-12倍重量份数的水，回流提取2-3次，合并提取液滤 过，除去不溶性杂质；(2) 取提取液减压蒸馏浓縮，浓縮液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达到80 % ，静置，过 滤，收集沉淀；(3) 加水溶解沉淀并煮沸，趁热过滤除去不溶物，滤液边搅拌边加入乙醇，使含醇量达 到80% ，放置，析出沉淀后过滤，使沉淀物在40-7(TC干燥，得茯苓总多糖粗品；(4) 将茯苓总多糖...
【专利技术属性】
技术研发人员：张艳军，陈波，赵骏，张密霞，庄朋伟，李怡文，
申请(专利权)人：天津中医药大学，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]
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