【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体是一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillus plantarum jwn02及其应用。
技术介绍
1、植物乳杆菌(plantarum lactobacillus)是一种常见的乳酸菌，广泛存在于植物、土壤和发酵食品中。作为一种有益菌，植物乳杆菌具有多种功能和应用价值。
2、首先，植物乳杆菌在植物体内具有显著的益生作用。它可以利用植物体提供的营养物质进行繁殖，产生乳酸等有益代谢产物，调节植物体内的微生物群落结构，增强植物免疫力并抑制有害微生物的生长。这些功能使得植物乳杆菌在农业生产中被广泛应用，例如作为一种生物肥料或生物农药，可以促进植物生长、提高产量和质量。
3、其次，植物乳杆菌还具有在食品发酵中的重要作用。它能够发酵果蔬、酸奶、面包等食品原料，产生有益的有机酸、芳香物质和保健活性成分。这些产物不仅赋予了食品特殊的风味和口感，还具有抗氧化、抗菌、促进消化等保健功能。因此，植物乳杆菌在食品工业中得到了广泛应用，并被认为是一种安全、有效的食品添加剂。
4、此外，植物乳杆菌的基因组研究也引起了科学家们的关注。通过深入研究其基因组结构和功能基因，人们可以更好地理解植物乳杆菌的遗传特征和代谢机制，为其进一步的功能开发和利用提供理论依据。
技术实现思路
1、针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供了一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillus plantarum jwn02及其应用，以至少部分解决
2、本专利技术采取的技术方案如下：
3、本专利技术提出了一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillus plantarumjwn02及其应用，包括以下步骤：
4、步骤一、菌株分离和培养条件；
5、步骤二、评估菌株生长情况；
6、步骤三、溶血实验；
7、步骤四、抗生素敏感实验，采用纸片扩散法对所选菌株进行药敏试验；
8、步骤五、抗病原菌实验；
9、步骤六、耐酸耐胆盐实验；
10、步骤七、耐人工胃肠液实验；
11、步骤八、dpph自由基清除活性检测；
12、步骤九、评估乳酸菌体外降解嘌呤核苷能力。
13、作为本专利技术进一步的方案：所述步骤一中将擦拭新生儿皮肤的纱布块分别用生理盐水浸泡并摇匀，将稀释后的液体接种于mrs平板，放置于37℃厌氧培养箱中培养36～48h，选取平板内产生清晰的单个菌落，重复接种于mrs平板进行纯化单菌落。
14、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤二中将活化后的jwn02菌株接种于mrs肉汤中，37℃厌氧孵育24h，采用全自动生长曲线测定仪rts-1评估菌株的生长情况。
15、作为本专利技术再进一步的方案：所述全自动生长曲线测定仪rts-1仪器在45rpm/min转速下，每隔1h测定od值850nm；
16、分别以时间为横坐标，od值850nm和生长速率(h-1)为纵坐标，绘制各菌株的生长曲线和生长速率曲线。
17、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤三中将活化后的菌株在哥伦比亚血平板上划线，在37℃厌氧孵育48小时后观察平板有无α溶血、β溶血和γ溶血。
18、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤四中抗生素药敏纸片包括林可霉素2μg；青霉素、庆大霉素、链霉素、氨苄西林10μg；红霉素15μg；头孢哌酮类抗生素10μg；头孢哌酮类抗生素10μg；头孢氨苄、头孢呋辛、头孢他啶、阿米卡星、四环素、卡那霉素、米诺环素、万古霉素30μg；哌拉西林100μg；多西环素110μg和多黏菌素b300μg；
19、将15ml左右混有待测菌株(106cfu/ml)的温热(45℃)mrs琼脂培养基倒入平板中，待培养基凝固后，将纸片置于培养板上，37℃厌氧培养24h，孵育结束后，用游标卡尺测量并记录抑菌圈直径(mm)；
20、标准描述如下：s：敏感(区域直径≥17mm)；i：中介(区域直径12～17mm)；r：耐药(区直径≤12mm)。
21、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤五中检测抗菌活性的指示菌株，金黄色葡萄球菌atcc6538、鼠伤寒沙门菌sm022和大肠埃希菌atcc2592；
22、待测菌株在37℃的mrs肉汤中厌氧孵育24h，将菌液离心(12000rpm,10min)，制备无细胞培养上清液(cfs)；
23、三株病原菌分别接种在lb肉汤中，37℃摇床培养24h，将无菌牛津杯(直径8mm)放置在平板上，并向平板中倒入15ml与每种病原体(106cfu/ml)混匀的温热(45℃)lb琼脂培养基；
24、待培养基凝固后，取出牛津杯，将100μl过夜培养的待测乳杆菌菌悬液或cfs加入孔中，37℃培养24h，并加入100μl无菌mrs肉汤作为阴性对照；
25、然后用游标卡尺测量抑菌圈直径。
26、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤六中使用1m盐酸将mrs肉汤调整到不同的ph值(ph2.0和3.0)；在耐胆盐试验中，在mrs肉汤培养基中添加不同浓度(0.1％和0.3％(w/v))的胆盐；
27、随后按5％(v/v)接种量将活化后待测菌株加入不同ph和胆盐浓度mrs肉汤中，37℃孵育0和3h；
28、分别将100μl菌悬液连续稀释后分别均匀涂布在mrs平板上，37℃倒置孵育24h，计算活菌数；
29、存活率(％)＝lgcfu(n1)/lgcfu(n0)×100,cfu为菌落形成单位，实验重复三次；
30、其中n0为所选菌株0h时的活菌数，n1为在不同ph和胆盐浓度中处理3h后的活菌数。
31、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤七中待测菌株在mrs肉汤活化备用，将细菌悬浮液以12,000rpm离心10分钟，获得菌体沉淀，用无菌0.9％nacl洗涤两次，并重新悬浮于无菌0.9％nacl中以制备细菌悬浮液；
32、将200μl细菌悬浮液接种于1.8mlph为3.0的人工胃液中，在37℃下孵育0和3h，将200μl细菌悬浮液接种于1.8mlph为6.8的人工肠液中，在37℃下孵育0和3小时，然后分别将100μl菌悬液连续稀释后分别均匀涂布在mrs平板上，37℃倒置孵育24h，计算活菌数；
33、存活率(％)＝lgcfu(n1)/lgcfu(n0)×100，cfu为菌落形成单位，实验重复三次，其中，n0为0小时时选定菌株的活菌数，n1表示模拟胃肠液处理3小时后的活菌数。
34、作为本专利技术再进一步的方案：所述步骤八中待测菌株活化备用，并通过离心(12,000rpm，10分钟)在4℃下收集cfs；
35、通过用无菌0.9％nacl洗涤两次获得完整细胞(ic)，然后重新悬浮在1.0×109cfu/ml的浓度中；
36、将无细胞提取物在冰浴中本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillus plantarum JWN02及其应用，其特征在于，包括以下培养步骤：
2.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述全自动生长曲线测定仪RTS-1仪器在45rpm/min转速下，每隔1h测定OD值850nm；
3.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述步骤四中抗生素药敏纸片包括林可霉素2μg；青霉素、庆大霉素、链霉素、氨苄西林10μg；红霉素15μg；头孢哌酮类抗生素10μg；头孢哌酮类抗生素10μg；头孢氨苄、头孢呋辛、头孢他啶、阿米卡星、四环素、卡那霉素、米诺环素、万古霉素30μg；哌拉西林100μg；多西环素110μg和多黏菌素B300μg；
4.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述步骤五中检
5.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述步骤六中使用1M盐酸将MRS肉汤调整到不同的pH值(pH2.0和3.0)；在耐胆盐试验中，在MRS肉汤培养基中添加不同浓度(0.1％和0.3％(w/v))的胆盐；
6.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述步骤七中待测菌株在MRS肉汤活化备用，将细菌悬浮液以12,000rpm离心10分钟，获得菌体沉淀，用无菌0.9％NaCl洗涤两次，并重新悬浮于无菌0.9％NaCl中以制备细菌悬浮液；
7.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述步骤八中待测菌株活化备用，并通过离心(12,000rpm，10分钟)在4℃下收集CFS；
8.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌Lactobacillusplantarum JWN02及其应用，其特征在于：所述步骤九中将待测菌株接种到MRS肉汤中，并在厌氧条件下于37℃下培养24小时；
...【技术特征摘要】
1.一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillus plantarum jwn02及其应用，其特征在于，包括以下培养步骤：
2.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillusplantarum jwn02及其应用，其特征在于：所述全自动生长曲线测定仪rts-1仪器在45rpm/min转速下，每隔1h测定od值850nm；
3.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillusplantarum jwn02及其应用，其特征在于：所述步骤四中抗生素药敏纸片包括林可霉素2μg；青霉素、庆大霉素、链霉素、氨苄西林10μg；红霉素15μg；头孢哌酮类抗生素10μg；头孢哌酮类抗生素10μg；头孢氨苄、头孢呋辛、头孢他啶、阿米卡星、四环素、卡那霉素、米诺环素、万古霉素30μg；哌拉西林100μg；多西环素110μg和多黏菌素b300μg；
4.根据权利要求1所述的一株具有降尿酸作用的植物乳植杆菌lactobacillusplantarum jwn02及其应用，其特征在于：所述步骤五中检测抗菌活性的指示菌株，金黄色葡萄球菌atcc6538、鼠伤寒沙门菌sm022和大肠埃希菌atcc2592；
...【专利技术属性】
技术研发人员：程继文，韦宇拓，廖思明，卢波，
申请(专利权)人：广西医科大学第一附属医院，
类型：发明
国别省市：
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