【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本公开总体上涉及对sirpα和肿瘤相关抗原具有特异性的新型多特异性分子。
技术介绍
1、信号调节蛋白α(sirpα)是主要在髓样细胞和树突状细胞上表达的抑制性受体。sirpα包括基于免疫受体酪氨酸的抑制基序(itim)胞质结构域。sirpα在髓样细胞上的免疫调节活性通过与其配体cd47结合而被激活，所述配体诱导sirpα的itim胞质结构域的酪氨酸磷酸化，随后募集含有sh2的酪氨酸磷酸酶(shp-1/2)。shp-1/2然后通过蛋白质脱磷酸化来介导抑制信号传导事件，从而最终引起对巨噬细胞中的吞噬作用的抑制(barclay an,van den berg tk.信号调节蛋白α(sirpα)与cd47之间的相互作用：结构、功能和治疗靶标(the interaction between signal regulatory protein alpha(sirpα)and cd47:structure,function,and therapeutic target.)《免疫学年度综述(annu revimmunol.)》2014；32:25–50；oldenborg pa等人,cd47作为自身在红细胞上的标志物的作用(role of cd47 as a marker of self on red blood cells.)《科学(science.)》2000；288(5473):2051–2054.)。如此，cd47与sirpα的结合递送“别吃我(don’t eat me)”信号以抑制吞噬作用。
2、cd47在正常细胞上普遍表
3、因此，需要开发具有降低的副作用和高安全性的对sirpα具有特异性的改善的bime抗体或多特异性分子。
技术实现思路
1、贯穿本公开，如本文所使用的，冠词“一个(种)(a/an)”和“所述(the)”是指冠词的语法宾语中的一个(种)或多于一个(种)(即，至少一个(种))。举例来说，“一种抗体”意指一种抗体或多于一种抗体。
2、本公开提供了对sirpα和肿瘤相关抗原具有特异性的新型多特异性分子、其氨基酸序列和核苷酸序列及其用途。
3、一方面，本公开提供了一种多特异性分子，所述多特异性分子包括：
4、(a)sirpα结合结构域；
5、(b)激活受体结合结构域；以及
6、(c)靶抗原结合结构域，所述靶抗原结合结构域与在共表达靶抗原和cd47的靶细胞上表达的所述靶抗原结合，
7、其中在存在所述靶抗原的情况下，所述多特异性分子选择性地诱导免疫效应子细胞的效应子功能，并且其中所述免疫效应子细胞共表达sirpα和所述激活受体。
8、在某些实施方式中，本文所提供的多特异性分子包括本文所提供的sirpα结合结构域、包括fc结构域的本文所提供的激活受体结合结构域和本文所提供的靶抗原结合结构域。
9、在这些实施方式中的某些实施方式中，所述靶结合结构域是密封蛋白18.2结合结构域或pd-l1结合结构域。
10、在某些实施方式中，所述共表达所述靶抗原和所述cd47的靶细胞是通过所述免疫效应子细胞的所述效应子功能被消除的癌细胞、受感染细胞或所关注疾病细胞。
11、在某些实施方式中，在不存在所述靶抗原的情况下，所述多特异性分子诱导所述免疫效应子细胞的最小效应子功能。
12、在某些实施方式中，在不存在所述靶抗原的情况下由所述多特异性分子诱导的所述效应子功能不超过在存在所述靶抗原的情况下由所述多特异性分子诱导的所述效应子功能的10％。
13、在某些实施方式中，所述免疫效应子细胞是髓样细胞，任选地所述免疫效应子细胞是巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、吞噬细胞或嗜碱性粒细胞，任选地所述免疫效应子细胞是巨噬细胞。
14、在某些实施方式中，所述效应子功能包括由所述免疫效应子细胞对共表达所述抗原和所述cd47的所述细胞的吞噬作用。
15、在某些实施方式中，所述激活受体是可片段结晶的γ受体(fcγr)、trem2、凝集素、清道夫受体a1(sra1)、marco、cd36、cd163、cd68、cd205、cd206、fcdr1、cd207、cd209、rage、cd14、cd64、f4/80、cd64、cd32a、cd16a、cd89、cd19、cd28、csfr、pdgfr、msr1、scara3、colec12、scara5、scarb1、scarb2、dectin 1、rage(sr-e1)、lrpl、lrp2、asgp、sr-psox、cxcl16、olr1、scarf1、scarf2、cxcl16、stab1、stab2、srcrb4d、ssc5d、ccr2、cx3cr1、csf1r、tie2、hucrig(l)和cd169受体或补体受体(如cr1和cr3)、pi3k、fcγr1、fcγr2a、fcγr2b2、fcγr2c、fcγr3a、bah、tyro3、axl、traf6、syk、myd88、zap70、fcεr1、fcαr1、baff-r、dap12、nfam1、m本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种多特异性分子，其包括：
2.根据权利要求1所述的多特异性分子，其中所述共表达所述靶抗原和所述CD47的靶细胞是通过所述免疫效应子细胞的所述效应子功能被消除的癌细胞、受感染细胞或所关注疾病细胞。
3.根据权利要求1所述的多特异性分子，其中在不存在所述靶抗原的情况下，所述多特异性分子诱导所述免疫效应子细胞的最小效应子功能。
4.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中在不存在所述靶抗原的情况下由所述多特异性分子诱导的所述效应子功能不超过在存在所述靶抗原的情况下由所述多特异性分子诱导的所述效应子功能的10％。
5.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述免疫效应子细胞是髓样细胞，任选地所述免疫效应子细胞是巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、吞噬细胞或嗜碱性粒细胞，任选地所述免疫效应子细胞是巨噬细胞。
6.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述效应子功能包括由所述免疫效应子细胞对共表达所述抗原和所述CD47的所述细胞的吞噬作用。
7.根据前述权利要求中任一项所述的
8.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述激活受体结合结构域包括Fc结构域，任选地所述Fc结构域源自IgG1或IgG4。
9.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域能够基本上阻断SIRPα与CD47之间的相互作用。
10.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域能够完全阻断SIRPα与CD47之间的相互作用。
11.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域能够基本上阻断由SIRPα与CD47之间的相互作用介导的SHP-1募集。
12.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域能够完全阻断由SIRPα与CD47之间的相互作用介导的SHP-1募集。
13.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域具有最小的诱导所述免疫效应子细胞的所述效应子功能的固有活性。
14.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域和所述激活受体结合结构域紧密邻近，以允许所述多特异性分子与在同一免疫效应子细胞上共表达的SIRPα和所述激活受体两者结合。
15.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述SIRPα结合结构域和/或所述靶抗原结合结构域包括抗体结构域或抗体模拟结构域；任选地所述抗体模拟结构域包括纤连蛋白结构域、蛋白A的Z结构域(亲和体)、γ-B结晶结构域、泛素结构域、胱抑素结构域、Sac7d结构域、三螺旋卷曲螺旋结构域、脂质运载蛋白结构域、膜受体的A结构域、锚蛋白重复基序、Fyn的SH3结构域、蛋白酶抑制剂的库尼兹结构域、纤连蛋白的III型结构域(微型抗体)、碳水化合物结合模块32-2。
16.根据权利要求15所述的多特异性分子，其中所述抗体结构域包括Fab、VHH、单链Fv(scFv)、双功能抗体、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv片段、二硫键稳定的Fv片段(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、二硫键稳定的双功能抗体(ds双功能抗体)、F(ab)2、scFv二聚体(二价双功能抗体)、骆驼...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种多特异性分子，其包括：
2.根据权利要求1所述的多特异性分子，其中所述共表达所述靶抗原和所述cd47的靶细胞是通过所述免疫效应子细胞的所述效应子功能被消除的癌细胞、受感染细胞或所关注疾病细胞。
3.根据权利要求1所述的多特异性分子，其中在不存在所述靶抗原的情况下，所述多特异性分子诱导所述免疫效应子细胞的最小效应子功能。
4.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中在不存在所述靶抗原的情况下由所述多特异性分子诱导的所述效应子功能不超过在存在所述靶抗原的情况下由所述多特异性分子诱导的所述效应子功能的10％。
5.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述免疫效应子细胞是髓样细胞，任选地所述免疫效应子细胞是巨噬细胞、单核细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、吞噬细胞或嗜碱性粒细胞，任选地所述免疫效应子细胞是巨噬细胞。
6.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述效应子功能包括由所述免疫效应子细胞对共表达所述抗原和所述cd47的所述细胞的吞噬作用。
7.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述激活受体是可片段结晶的γ受体(fcγr)、trem2、凝集素、清道夫受体a1(sra1)、marco、cd36、cd163、cd68、cd205、cd206、fcdr1、cd207、cd209、rage、cd14、cd64、f4/80、cd64、cd32a、cd16a、cd89、cd19、cd28、csfr、pdgfr、msr1、scara3、colec12、scara5、scarb1、scarb2、dectin 1、rage(sr-e1)、lrpl、lrp2、asgp、sr-psox、cxcl16、olr1、scarf1、scarf2、cxcl16、stab1、stab2、srcrb4d、ssc5d、ccr2、cx3cr1、csf1r、tie2、hucrig(l)和cd169受体或补体受体(如cr1和cr3)、pi3k、fcγr1、fcγr2a、fcγr2b2、fcγr2c、fcγr3a、bah、tyro3、axl、traf6、syk、myd88、zap70、fcεr1、fcαr1、baff-r、dap 12、nfam1、mrc1、itgb5、mertk、elmo和cd79b；任选地，所述激活受体是fcγr。
8.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述激活受体结合结构域包括fc结构域，任选地所述fc结构域源自igg1或igg4。
9.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域能够基本上阻断sirpα与cd47之间的相互作用。
10.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域能够完全阻断sirpα与cd47之间的相互作用。
11.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域能够基本上阻断由sirpα与cd47之间的相互作用介导的shp-1募集。
12.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域能够完全阻断由sirpα与cd47之间的相互作用介导的shp-1募集。
13.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域具有最小的诱导所述免疫效应子细胞的所述效应子功能的固有活性。
14.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域和所述激活受体结合结构域紧密邻近，以允许所述多特异性分子与在同一免疫效应子细胞上共表达的sirpα和所述激活受体两者结合。
15.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域和/或所述靶抗原结合结构域包括抗体结构域或抗体模拟结构域；任选地所述抗体模拟结构域包括纤连蛋白结构域、蛋白a的z结构域(亲和体)、γ-b结晶结构域、泛素结构域、胱抑素结构域、sac7d结构域、三螺旋卷曲螺旋结构域、脂质运载蛋白结构域、膜受体的a结构域、锚蛋白重复基序、fyn的sh3结构域、蛋白酶抑制剂的库尼兹结构域、纤连蛋白的iii型结构域(微型抗体)、碳水化合物结合模块32-2。
16.根据权利要求15所述的多特异性分子，其中所述抗体结构域包括fab、vhh、单链fv(scfv)、双功能抗体、fab'、f(ab')2、fd、fv片段、二硫键稳定的fv片段(dsfv)、(dsfv)2、双特异性dsfv(dsfv-dsfv')、二硫键稳定的双功能抗体(ds双功能抗体)、f(ab)2、scfv二聚体(二价双功能抗体)、骆驼化单结构域抗体、纳米抗体、四功能抗体、结构域抗体或二价结构域抗体。
17.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其包括多特异性抗体，所述多特异性抗体包括靶抗原结合抗体结构域、sirpa结合抗体结构域和fc结构域。
18.根据权利要求17所述的多特异性分子，其中所述靶抗原结合抗体结构域与所述fc结构域的n末端连接。
19.根据权利要求18所述的多特异性分子，其中所述靶抗原结合抗体结构域包括fab结构域，任选地所述fab结构域包括与所述fc结构域的所述n末端之一连接的重链。
20.根据权利要求18所述的多特异性分子，其中所述多特异性分子包括两个靶抗原结合抗体结构域，所述两个靶抗原结合抗体结构域中的每个靶抗原结合抗体结构域包括fab结构域，任选地所述fab结构域中的每个fab结构域分别包括与所述fc结构域的每个n末端连接的重链。
21.根据权利要求18到20中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域与所述fc结构域或所述靶抗原结合抗体结构域连接。
22.根据权利要求21所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域与所述fc结构域的c末端连接。
23.根据权利要求21所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域与所述fc结构域的n末端连接，条件是所述sirpα结合结构域和所述靶抗原结合抗体结构域不与所述fc结构域的同一n末端连接。
24.根据权利要求21所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域与靶抗原结合fab结构域的轻链的c末端连接。
25.根据权利要求17所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合抗体结构域与所述fc结构域的n末端连接。
26.根据权利要求25所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合抗体结构域包括fab结构域，任选地所述fab结构域包括与所述fc结构域的所述n末端之一连接的重链。
27.根据权利要求25所述的多特异性分子，其中所述抗体包括两个sirpα结合抗体结构域，所述两个sirpα结合抗体结构域中的每个sirpα结合抗体结构域包括fab结构域，任选地所述fab结构域中的每个fab结构域分别包括与所述fc结构域的每个n末端连接的重链。
28.根据权利要求25到27中任一项所述的多特异性分子，其中所述靶抗原结合结构域与所述fc结构域或所述sirpα结合抗体结构域连接。
29.根据权利要求28所述的多特异性分子，其中所述靶抗原结合结构域与所述fc结构域的所述n末端连接，条件是所述靶抗原结合结构域和所述sirpα结合结构域不与所述fc结构域的同一n末端连接。
30.根据权利要求28所述的多特异性分子，其中所述靶抗原结合结构域与sirpα结合fab结构域的轻链的c末端连接。
31.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述靶抗原包括肿瘤表面抗原。
32.根据权利要求31所述的多特异性分子，其中所述肿瘤表面抗原是pd-l1、密封蛋白18.2、bcma、cd19、cd20、cd22、cd24、cd25、cd30、cd33、cd38、cd44、cd52、cd56、cd70、cd96、cd97、cd99、cd123、egfr、her2、her3、cd117、c-met、egfr、egfrviii、erbb3、erbb4、vegfr1、vegfr2、ror1、pthr2、b7-h1(pd-l1)、b7-h2、b7-h3、b7-h4、b7-h5、b7-h6、b7-h7、trop-2、gpc-3、epcam、dll-3、粘连蛋白-4、密封蛋白6、muc-1、psma、gd3、fap、cea或epha2。
33.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域包括：
34.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域包括：
35.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域包括与选自由以下组成的组的抗sirpα抗体相同的hcdr和lcdr：c25、c15、c42、c59和c73，其中：
36.根据前述权利要求中任一项所述的多特异性分子，其中所述sirpα结合结构域进一步包括重链hfr1、hfr2、hfr3和hfr4中的一者或多者和/或轻链lfr1、lfr2、lfr3和lfr4中的一者或多者，其中：
37.根据前述权利要求中任一项所述的多特异...
【专利技术属性】
技术研发人员：卢宏韬，孙大为，耿亚男，王静，蒋海侠，吴志浩，高瑞，牛晓峰，邱阳生，
申请(专利权)人：科望苏州生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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