【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及edil3蛋白的应用和一种压疮用水凝胶敷料。
技术介绍
1、压疮又称褥疮，压力性溃疡，由于患者长期处于受压状态，组织持续缺血缺氧导致皮肤溃烂坏死，多发生在长期卧床患者，具有糖尿病等慢性基础病的患者中，给社会医疗带来极大的负担与挑战。正常伤口往往通过炎症，增殖和重塑三个阶段会在两周内完成愈合，压疮伤口愈合往往超过两周，即使解除压迫状态，但由于组织内血液循环减少、免疫系统功能受损、以及持续的炎症循环，伤口愈合停滞在炎症期无法正常向增殖和重塑期迈进。中性粒细胞和巨噬细胞的大量募集虽然对清除坏死组织防止感染起到重要作用，但同时过度募集也使得成纤维细胞无法大量增殖，新生血管形成受阻，细胞得不到充足的养分供应，无法形成足够的肉芽组织填充伤口。目前对于压疮的治疗修复主要集中在抗菌清创，预防感染，以及减轻压力的敷料等方面，然而很少有有效可推广的伤口敷料既抑制炎症同时促进血管生成。因此抑制创面严重的炎症反应对于压疮修复尤其重要，同时促进血管生成也能加快压疮组织的修复。所以，本研究提供既能提供与皮肤机械强度，又具有快速修复压疮创面和抗炎功能的综合多功能系统的伤口敷料。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术的目的提供edil3蛋白在制备治疗压疮药物中的应用，根据该应用，还提供一种压疮用的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料，该水凝胶敷料既具有一定的机械强度，不会轻易破碎，又具有快速修复压疮创面，和抗炎功能。
2、为了实现上述目的，本专利技术所
3、1.edil3蛋白在制备治疗压疮药物中的应用
4、2.一种压疮用的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料，所述水凝胶敷料为edil3蛋白包裹在丝素蛋白中形成nps@edil3纳米颗粒，并负载于丝素蛋白和胶原蛋白的水凝胶中。
5、3.负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法，包括以下步骤：
6、a.将edil3蛋白和丝素蛋白按质量比1:5-1:15配置溶液，逐滴加到正在涡旋的丙酮溶液中，涡旋30秒以上，离心去上清，得到包裹edil3的丝素蛋白纳米粒子nps@edil3，加水洗涤纳米粒子2-4次；
7、b.卡波姆加水溶解，再加1mol/l naoh充分搅拌；再加入聚乙烯醇溶液和丝素蛋白溶液，充分搅拌；
8、c.配制1％-2％(w/v％)胶原蛋白溶液，加入0.1mol/l naoh至ph7.0；
9、d.快速将步骤b和步骤c的溶液混合，再加入步骤a中制备的纳米粒子nps@edil3，充分混匀，在25-30℃下放置12-24小时，得到负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料。
10、优选的，步骤a中将edil3蛋白和丝素蛋白按质量比1:10配置溶液。
11、进一步，所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法中，步骤a中edil3蛋白浓度为0.4-0.8mg/ml，丝素蛋白浓度为1-4mg/ml。
12、进一步，所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法中，步骤b中丝素蛋白浓度为20％(w/v％)，步骤c中胶原蛋白为1％(w/v％)。
13、进一步，所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法中，步骤c中胶原蛋白溶液是步骤b中丝素蛋白溶液的体积比为1:1-1:4。
14、优选的，步骤c中胶原蛋白溶液是步骤b中丝素蛋白溶液的体积比为1:3。
15、优选的，聚乙烯醇溶液的质量分数20％(w/v％)。
16、进一步，所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法中，所述edil3蛋白的制备方法为：
17、i.将3xflag标记的edil3慢病毒转染cho，用cho专用培养基培养3-5天后，使用4μg/ml嘌呤霉素处理5-7天；用胰酶消化cho细胞，离心得到细胞沉淀；
18、ii.用cho 18无血清培养基重悬细胞并在摇床中以40–80rpm/min的转速使cho悬浮培养3-5天后，离心收集cho细胞沉淀物；
19、iii.用ripa和蛋白酶抑制剂pmsf裂解cho细胞；再超声20-30秒离心收集蛋白质上清液。
20、进一步，所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法中，所述edil3蛋白的制备方法还包括纯化蛋白质上清液，用带抗flag抗体的磁珠或凝胶亲和柱进行亲和纯化。
21、优选的，用带抗flag抗体的磁珠进行亲和纯化得到edil3蛋白。
22、进一步，所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法中，所述胶原蛋白的制备方法为：将大鼠麻醉处死后剥除尾巴皮肤使胶原纤维暴露，取出鼠尾胶原，剪碎，加pbs溶液洗涤后离心，弃上清液；将胶原蛋白沉淀加入0.5–1％的醋酸溶液，在4℃下摇晃振荡48小时使胶原蛋白溶解；将溶解后的胶原蛋白溶液，以12000rpm/min离心10分钟,收集上清液，并缓慢地加入到10％ nacl溶液中盐析2分钟，直到大量絮状胶原蛋白沉淀出现；再将絮状胶原蛋白在4℃下离心收集胶原蛋白沉淀，挤出多余水分，加入0.1mol/l的hcl完全溶解胶原蛋白沉淀成胶原蛋白溶液，4度保存。
23、上述任一项制备方法得到的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料也在本专利技术所保护的范围中。
24、4.上述任一项制备方法或所制备得到的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料在制备治疗压疮药物中的应用。
25、本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过研究胚胎成纤维细胞细胞外囊泡包含的800-1000多种蛋白质中，层层筛选出对压疮创面伤口有治疗作用的蛋白edil3，证实其可促进小鼠血管内皮细胞的增殖以及抑制巨噬细胞的募集作用，进一步本专利技术提供一种新型多功能混合水凝胶材料，是将edil3蛋白包裹在丝素蛋白中形成nps@edil3纳米颗粒，并负载于丝素蛋白和胶原蛋白的水凝胶中。该水凝胶材料具有良好的机械强度，能承受超过200kpa的应力。包裹了edil3的丝素蛋白纳米粒子又得到良好的释放率，在第一天释放率为8.9％，第三天释放率达到50.7％，第7天97％，释放时间长达7天，具有很好的缓释效果，避免了蛋白直接使用会失活的局限。可充分作为压疮创面伤口的敷料使用。在小鼠模型中可看到，相比较于对照，本专利技术提供的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料在第5天和第11天的愈合率分别为78％和95％，显著超过对照组。而且肉芽组织长度的统计测量显示，使用负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的小鼠压疮伤口收缩比其他组快，有且只有使用负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料处理组能观察到新形成的表皮和真皮以及皮肤附属物数量最多，而其他三组则看到表皮尚未完成修复，仍有残留的血痂。充分说明本专利技术的水凝胶敷料可作为临床压疮创面伤口治疗的本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.EDIL3蛋白在制备治疗压疮药物中的应用。
2.一种压疮用的负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料，其特征在于，所述水凝胶敷料为EDIL3蛋白包裹在丝素蛋白中形成NPs@EDIL3纳米颗粒，并负载于丝素蛋白和胶原蛋白的水凝胶中。
3.权利要求2所述负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.权利要求3所述的负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤a中EDIL3蛋白浓度为0.4-0.8mg/ml，丝素蛋白浓度为1-4mg/ml。
5.权利要求3所述的负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤b中丝素蛋白浓度为20％(w/v％)，步骤c中胶原蛋白为1％(w/v％)。
6.权利要求3-5任一项所述的负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，所述EDIL3蛋白的制备方法为：
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述EDIL3蛋白的制备方法还包括纯化蛋白质上清
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述胶原蛋白的制备方法为：将大鼠麻醉处死后剥除尾巴皮肤使胶原纤维暴露，取出鼠尾胶原，剪碎，加PBS溶液洗涤后离心，弃上清液；将胶原蛋白沉淀加入0.5–1％的醋酸溶液，在4℃下摇晃振荡48小时使胶原蛋白溶解；将溶解后的胶原蛋白溶液，以12000rpm/min离心10分钟,收集上清液，并缓慢地加入到10％NaCl溶液中盐析2分钟，直到大量絮状胶原蛋白沉淀出现；再将絮状胶原蛋白在4℃下离心收集胶原蛋白沉淀，挤出多余水分，加入0.1mol/L的HCL完全溶解胶原蛋白沉淀成胶原蛋白溶液，4度保存。
9.权利要求1-8任一项制备方法得到的负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料。
10.权利要求1-8任一项制备方法或权利要求9所述的负载NPs@EDIL3的SF/Col水凝胶敷料在制备治疗压疮药物中的应用。
...【技术特征摘要】
1.edil3蛋白在制备治疗压疮药物中的应用。
2.一种压疮用的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料，其特征在于，所述水凝胶敷料为edil3蛋白包裹在丝素蛋白中形成nps@edil3纳米颗粒，并负载于丝素蛋白和胶原蛋白的水凝胶中。
3.权利要求2所述负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.权利要求3所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤a中edil3蛋白浓度为0.4-0.8mg/ml，丝素蛋白浓度为1-4mg/ml。
5.权利要求3所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，步骤b中丝素蛋白浓度为20％(w/v％)，步骤c中胶原蛋白为1％(w/v％)。
6.权利要求3-5任一项所述的负载nps@edil3的sf/col水凝胶敷料的制备方法，其特征在于，所述edil3蛋白的制备方法为：
7.根据权利要求6所...
【专利技术属性】
技术研发人员：唐隽，阚雪薇，姚萍萍，陈嘉琪，
申请(专利权)人：安徽省立医院中国科学技术大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：
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