【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、嵌合抗原受体t细胞(cart)免疫疗法已显示出对复发/难治性(r/r)淋巴瘤和白血病患者的临床结果的显著改善(lee,et al.,the lancet(2015)385(9967):517-28；maudeet al.,new england journal of medicine(2018)378(5):439-48；park et al.,newengland journal of medicine(2018)378(5):449-59；schuster,et al.,new englandjournal of medicine(2019)380(1):45-56；turtle,et al.,science translationalmedicine(2016)8(355):355ra116-355ra116)。尽管抗cd19 cart(cart19)具有显著的临床结果，但超过60％的接受cart19治疗的淋巴瘤患者仍然没有反应或最终复发(schuster,etal.,new england journal of medicine(2019)380(1):45-56)。此外，绝大多数利用目前批准的cart产品治疗的患者都未能通过这些治疗，并且car t细胞由于众多挑战而在对抗实体瘤方面缺乏功效。本领域需要增强cart抗肿瘤功效，以改善用cart细胞治疗的患者的临床结果。本专利技术解决了这一需求。
技术实现思路
1、在一些方面，本专利技术提供了一种分离核酸，其包
2、在某些实施方式中，分离核酸进一步包含在编码car的核苷酸序列和编码bcl-2家族蛋白的变体的核苷酸序列之间的编码2a自切割肽的核苷酸序列。
3、在某些实施方式中，细胞毒性抑制剂是促凋亡药物。
4、在某些实施方式中，bcl-2家族蛋白选自bcl-2、bcl-xl、bcl-w、mcl1、bfl1、bim、bad、bak和bax。
5、在某些实施方式中，bcl-2家族蛋白是人bcl-2或人bax。
6、在某些实施方式中，细胞毒性抑制剂选自小分子、抗体和抑制性核酸。
7、在某些实施方式中，细胞毒性抑制剂是小分子。
8、在某些实施方式中，细胞毒性抑制剂选自维奈托克(venetoclax)(abt-199)、那维妥拉(navitoclax)(abt-263)、abt-737、沙布托克(sabutoclax)(bi-97c1)、奥巴克拉(obatoclax)(gx15-070)、tw-37、at-101、ha14-1、ru486、bam7、a-1331852、a-1155463、bda-366、umi-77、bh3i-1及其任何组合。
9、在某些实施方式中，细胞毒性抑制剂是维奈托克。
10、在某些实施方式中，a)bcl-2家族蛋白是人bcl-2，并且所述变体包含选自以下的突变：f104l、g101v、d103e、d103y、f101c、f101l、v92l、t187i、a131v以及其任何组合；或b)bcl-2家族蛋白是人bax，并且所述变体包含g179e突变。
11、在某些实施方式中，所述变体包含f104l bcl-2。
12、在某些实施方式中，肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd44v6、cd70、cd79a、cd79b、cd80、cd86、cd117、cd123、cd133、cd147、cd171、cd276、cea、密蛋白18.2、c-met、dll3、dr5、egfr、egfrviii、epcam、epha2、fap、叶酸受体α(fra)/叶酸结合蛋白(fbp)、gd-2、糖脂f77、磷脂酰肌醇聚糖-3(gpc3)、her2、hla-a2、icam1、il3ra、il13ra2、lage-1、lewisy、lmp1(ebv)、mage-a1、mage-a3、mage-a4、黑色素a(melan a)、间皮素(mesothelin)、mg7(糖基化cea)、mmp、muc1、柄蛋白4/fap、nkg2d-配体(mic-a、mic-b和ulbp 1至6)、ny-eso-1、p16、pd-l1、psca、psma、ror1、ror2、tim-3、tm4sf1、vegfr2和其任意组合。
13、在某些实施方式中，肿瘤抗原是cd19。
14、在某些实施方式中，抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、fab、fab’、f(ab’)2、fv、单链可变片段(scfv)、线性抗体、单结构域抗体(sdab)和抗体模拟物(如设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、亲合体(affibody)、monobody(monobody)(adnectin)、affilin、affimer、affitin、α体(alphabody)、avimer、kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
15、在某些实施方式中，抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
16、在某些实施方式中，胞内结构域包括共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
17、在某些实施方式中，胞内结构域包括选自以下的蛋白质的共刺激结构域：tnfr超家族中的蛋白质、cd28、4-1bb(cd137)、ox40(cd134)、pd-1、cd7、light、cd83l、dap10、dap12、cd27、cd2、cd5、icam-1、lfa-1、lck、tnfr-i、tnfr-ii、fas、cd30、cd40、icos、nkg2c和b7-h3(cd276)，或其变体，或源自杀伤免疫球蛋白样受体(kir)的胞内结构域。
18、在某些实施方式中，胞内结构域包括选自以下的蛋白质的胞内信号传导结构域：人cd3ζ链(cd3ζ)、fcγriii、fcsri、dap10、dap12、fc受体的胞质尾、携带基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的胞质受体、tcrζ、fcrγ、cd3γ、cd3δ、cd3ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b和cd66d，或其变体。
19、在某些实施方式中，胞内信号传导结构域包括cd3ζ的细胞内信号转导结构域或其变体。
20、在一些方面，本专利技术提供了包含本文所述的分离核酸的载体。
21、在某些实施方式中，所述载体是慢病毒载体。
22、在一些方面，本专利技术提供了包含本文本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种分离核酸，所述分离核酸包含：
2.根据权利要求1所述的分离核酸，其进一步包含在编码CAR的核苷酸序列和编码Bcl-2家族蛋白的变体的核苷酸序列之间的编码2A自切割肽的核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂是促凋亡药物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述Bcl-2家族蛋白选自Bcl-2、BCL-XL、BCL-W、MCL1、BFL1、BIM、BAD、BAK和BAX。
5.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述Bcl-2家族蛋白是人Bcl-2或人BAX。
6.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂选自小分子、抗体和抑制性核酸。
7.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂是小分子。
8.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂选自维奈托克(ABT-199)、那维妥拉(ABT-263)、ABT-737、沙布托克(BI-97C1)、奥巴克拉(GX15-070)、TW-
9.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂是维奈托克。
10.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中：
11.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述变体包括F104L Bcl-2。
12.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(AFP)/HLA-A2、AXL、B7-H3、BCMA、CA-1X、CD2、CD3、CD4、CD5、CD7、CD8、CD19、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD44v6、CD70、CD79a、CD79b、CD80、CD86、CD117、CD123、CD133、CD147、CD171、CD276、CEA、密蛋白18.2、c-Met、DLL3、DR5、EGFR、EGFRvIII、EpCAM、EphA2、FAP、叶酸受体α(FRa)/叶酸结合蛋白(FBP)、GD-2、糖脂F77、磷脂酰肌醇聚糖-3(GPC3)、HER2、HLA-A2、ICAM1、IL3Ra、IL13Ra2、LAGE-1、Lewis Y、LMP1(EBV)、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A4、黑色素A、间皮素、MG7(糖基化CEA)、MMP、MUC1、柄蛋白4/FAP、NKG2D-配体(MIC-A、MIC-B和ULBP 1至6)、NY-ESO-1、P16、PD-L1、PSCA、PSMA、ROR1、ROR2、TIM-3、TM4SF1、VEGFR2和其任意组合。
13.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述肿瘤抗原是CD19。
14.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、单链可变片段(scFv)、线性抗体、单结构域抗体(sdAb)和抗体模拟物(如设计的锚蛋白重复蛋白(DARPin)、亲合体、monobody(adnectin)、affilin、affimer、affitin、α体、avimer、Kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
15.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述抗原结合结构域是单链可变片段(scFv)。
16.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内结构域包括共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
17.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内结构域包括选自以下的蛋白质的共刺激结构域：TNFR超家族中的蛋白质、CD28、4-1BB(CD137)、OX40(CD134)、PD-1、CD7、LIGHT、CD83L、DAP10、DAP12、CD27、CD2、CD5、ICAM-1、LFA-1、Lck、TNFR-I、TNFR-II、Fas、CD30、CD40、ICOS、NKG2C和B7-H3(CD276)，或其变体，或衍生自杀伤免疫球蛋白样受体(KIR)的胞内结构域。
18.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内结构域包括选自以下的蛋白质的胞内信号传导结构域：人CD3ζ链(CD3ζ)、FcγRIII、FcsRI、DAP10、DAP12、Fc受体的胞质尾区、携带基于免疫受体酪氨酸的激活基序(ITAM...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种分离核酸，所述分离核酸包含：
2.根据权利要求1所述的分离核酸，其进一步包含在编码car的核苷酸序列和编码bcl-2家族蛋白的变体的核苷酸序列之间的编码2a自切割肽的核苷酸序列。
3.根据权利要求1或2所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂是促凋亡药物。
4.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述bcl-2家族蛋白选自bcl-2、bcl-xl、bcl-w、mcl1、bfl1、bim、bad、bak和bax。
5.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述bcl-2家族蛋白是人bcl-2或人bax。
6.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂选自小分子、抗体和抑制性核酸。
7.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂是小分子。
8.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂选自维奈托克(abt-199)、那维妥拉(abt-263)、abt-737、沙布托克(bi-97c1)、奥巴克拉(gx15-070)、tw-37、at-101、ha14-1、ru486、bam7、a-1331852、a-1155463、bda-366、umi-77、bh3i-1及其任何组合。
9.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述细胞毒性抑制剂是维奈托克。
10.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中：
11.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述变体包括f104l bcl-2。
12.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd44v6、cd70、cd79a、cd79b、cd80、cd86、cd117、cd123、cd133、cd147、cd171、cd276、cea、密蛋白18.2、c-met、dll3、dr5、egfr、egfrviii、epcam、epha2、fap、叶酸受体α(fra)/叶酸结合蛋白(fbp)、gd-2、糖脂f77、磷脂酰肌醇聚糖-3(gpc3)、her2、hla-a2、icam1、il3ra、il13ra2、lage-1、lewis y、lmp1(ebv)、mage-a1、mage-a3、mage-a4、黑色素a、间皮素、mg7(糖基化cea)、mmp、muc1、柄蛋白4/fap、nkg2d-配体(mic-a、mic-b和ulbp 1至6)、ny-eso-1、p16、pd-l1、psca、psma、ror1、ror2、tim-3、tm4sf1、vegfr2和其任意组合。
13.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述肿瘤抗原是cd19。
14.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述抗原结合结构域选自全长抗体或其抗原结合片段、单特异性抗体、双特异性抗体、fab、fab’、f(ab’)2、fv、单链可变片段(scfv)、线性抗体、单结构域抗体(sdab)和抗体模拟物(如设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、亲合体、monobody(adnectin)、affilin、affimer、affitin、α体、avimer、kunitz结构域肽、anticalin和syntherin)。
15.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述抗原结合结构域是单链可变片段(scfv)。
16.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内结构域包括共刺激结构域和胞内信号传导结构域。
17.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内结构域包括选自以下的蛋白质的共刺激结构域：tnfr超家族中的蛋白质、cd28、4-1bb(cd137)、ox40(cd134)、pd-1、cd7、light、cd83l、dap10、dap12、cd27、cd2、cd5、icam-1、lfa-1、lck、tnfr-i、tnfr-ii、fas、cd30、cd40、icos、nkg2c和b7-h3(cd276)，或其变体，或衍生自杀伤免疫球蛋白样受体(kir)的胞内结构域。
18.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内结构域包括选自以下的蛋白质的胞内信号传导结构域：人cd3ζ链(cd3ζ)、fcγriii、fcsri、dap10、dap12、fc受体的胞质尾区、携带基于免疫受体酪氨酸的激活基序(itam)的胞质受体、tcrζ、fcrγ、cd3γ、cd3-δ、cd3-ε、cd5、cd22、cd79a、cd79b和cd66d，或其变体。
19.根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸，其中所述胞内信号转导结构域包括cd3ζ的胞内信号传导结构域或其变体。
20.一种载体，其包含根据前述权利要求中任一项所述的分离核酸。
21.根据权利要求20所述的载体，其中所述载体是慢病毒载体。
22.一种经修饰的细胞，其包含根据权利要求1-19中任一项所述的分离核酸或根据权利要求20-21中任一项所述的载体，其中所述细胞是免疫细胞或其前体细胞。
23.根据权利要求22所述的经修饰的细胞，其中所述细胞是t细胞、自体细胞、人细胞或其任何组合。
24.一种经修饰的细胞，其中所述细胞是免疫细胞或其前体细胞，并且其中将所述细胞工程化以表达：
25.根据权利要求24所述的经修饰的细胞，其中所述细胞毒性抑制剂是促凋亡药物。
26.根据权利要求24或25所述的经修饰的细胞，其中所述bcl-2家族蛋白选自bcl-2、bcl-xl、bcl-w、mcl1、bfl1、bim、bad、bak和bax。
27.根据权利要求24-26中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述bcl-2家族蛋白是人bcl-2或人bax。
28.根据权利要求24-27中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述细胞毒性抑制剂选自小分子、抗体和抑制性核酸。
29.根据权利要求21-24中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述细胞毒性抑制剂是小分子。
30.根据权利要求24-29中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述细胞毒性抑制剂选自：维奈托克(abt-199)、那维妥拉(abt-263)、abt-737、沙布托克(bi-97c1)、奥巴克拉(gx15-070)、tw-37、at-101、ha14-1、ru486、bam7、a-1331852、a-1155463、bda-366、umi-77、bh3i-1及其任何组合。
31.根据权利要求24-30中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述细胞毒性抑制剂是维奈托克。
32.根据权利要求24-31中任一项所述的经修饰的细胞，其中：
33.根据权利要求24-32中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述变体包括f104l bcl-2。
34.根据权利要求24-33中任一项所述的经修饰的细胞，其中所述肿瘤抗原选自甲胎蛋白(afp)/hla-a2、axl、b7-h3、bcma、ca-1x、cd2、cd3、cd4、cd5、cd7、cd8、cd19、cd20、cd22、cd30、cd33、cd38、cd44v6、cd70、cd79a、cd79b、cd80、cd86、cd117、cd123、cd133、cd147、cd171、cd276、cea、密蛋白18.2、c-met、dll3、dr5、egfr、egfrviii、epcam、epha2、fap、叶酸受体α(fra)/叶酸结合蛋白(fbp)、gd-2、糖脂f77、磷脂酰肌醇聚糖-3(gpc3)、her2、hla-a2、icam1、il3ra、il13ra2、lage-1、lewis y、lmp1(ebv)、mage-a1、mage-a3、mage-a4、黑色素a、间皮素、mg7(糖基化cea)、mmp、muc1、柄蛋白4/fap、nkg2d-配体(mic-a、mic-b和ul...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·鲁埃拉，Y·G·李，
申请(专利权)人：宾夕法尼亚大学董事会，
类型：发明
国别省市：
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