【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程，具体地说是一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1及其编码基因与应用。
技术介绍
1、中国是全球最大的梨生产与消费国，梨产业已成为我国地方经济发展和农民增收致富的支柱产业。然而，梨炭疽病菌引起的梨炭疽病是梨上重大病害之一，每年对我国梨产量造成重大损失，已成为制约我国梨产业健康发展的一个主要因素。2007年后，梨炭疽病在我国黄河故道的梨种植地区迅速蔓延，危害果实病造成梨大面积腐烂，对砀山酥梨、黄冠梨、鸭梨等多个梨品种造成巨大经济损失。2009年后，梨炭疽病在我国南方梨产区逐渐爆发，可危害叶片，造成树叶异常早落，致使浙江、安徽、湖北、江苏、四川等省份的梨产量锐减；
2、梨炭疽病菌的致病因子不明、致病机制不清，是梨炭疽病难以有效防治的主要原因。大量研究表明，病原菌分泌的效应子(effectors)在病菌致病过程中发挥关键作用。梨炭疽病菌基因组序列最早于2012年被公布，预测编码超过700个效应子，且很多效应基因在病菌与寄主互作过程中高表达，但是迄今仅极少数效应子被报道，致病关键效应子的报道更是少之又少。因此，系统性挖掘该病菌效应子，找到关键致病因子，可为其致病机制提供科学基础，对未来梨炭疽病的科学防控具有重要指导意义。
3、为此，本领域技术人员提出了一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1及其编码基因与应用来解决
技术介绍
提出的问题。
技术实现思路
1、为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1及其编码基因与应用，以解决
2、一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1，所述核糖毒素cfribo1为seq id no.1所示氨基酸序列的蛋白质，所述蛋白质可为(a1)、(a2)、(a3)或(a4)；(a1)为seq id no.1所示的蛋白质；(a2)在(a1)蛋白质的n端或c端连接标签得到的融合蛋白质；(a3)将(a1)或(a2)所示的蛋白质经过一个或几个氨基酸残基的取代得到的、来源于梨炭疽病菌且与seq id no.1所示的蛋白质活性相关的由其衍生的蛋白质；(a4)与seq id no.1所示的蛋白质氨基酸序列具有80％及以上同一性，且与seq id no.1所示氨基酸序列具有相似功能的序列；
3、具体的，所述(a3)中的蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代为不超过4个氨基酸残基的取代；所述(a3)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到；所述(a3)中的蛋白质的编码基因可通过将seq id no.2所示的dna序列取代一个或几个氨基酸残基的密码子，在其5’端或3’端连上表1所示的标签编码序列得到。
4、优选的，所述seq id no.1由176个氨基酸残基组成，为了使(a1)中的蛋白便于纯化，可在seq id no.1所示蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上表1所示的标签：
5、表1标签的序列
6、
7、一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1的编码基因，所述编码基因编码如权利要求1-2所述的梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1。
8、优选的，编码所述梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1如seq id no.2所示。
9、优选的，所述seq id no.2由531个核苷酸组成，且seq id no.2编码seq id no.2所示的蛋白质(cfribo1)；
10、优选的，所述编码蛋白质cfribo1的核酸分子可为(b1)或(b2)或(b3)或(b4)所示的dna分子：(b1)编码区如seq id no.2所示的dna分子；(b1)核苷酸序列如seq id no.2所示的dna分子；(b3)在严格条件下与(b1)或(b1)限定的dna分子杂交，且编码cfribo1蛋白质的dna分子；(b4)来源于梨炭疽病菌，且与(b1)或(b2)限定的dna分子具有75％或75％以上同一性、编码cfribo1蛋白质的dna分子；
11、其中，所述dna分子可以是dna，如cdna、基因组dna或重组dna；所述核酸分子也可以是rna，如mrna或hnrna等。
12、本领域普通技术人员可以很容易采用已知的方法，例如定点突变的方法，对本专利技术的编码所述蛋白质cfribo1的核苷酸序列进行突变；那些经过人工修饰的，与本专利技术分离得到的所述蛋白质cfribo1的核苷酸序列具有75％或者更高同一性的核苷酸，只要编码所述蛋白质cfribo1，均是衍生于本专利技术的核苷酸序列并且等同于本专利技术的序列。
13、这里使用的术语“同一性”指天然核苷酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的seq id no.1所示的氨基酸序列组成的蛋白质(cfribo1)的核苷酸序列具有75％或更高的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。
14、优选的，提供所述核苷酸分子相关的生物材料，包括重组载体和重组菌；所述重组载体为重组载体pcoldtf-cfribo1；所述重组菌可以通过所述核酸分子的重组载体导入出发微生物得到。
15、优选的，所述含有上述任意所述核酸分子的重组载体可为在表达载体的多克隆位点插入seq id no.2所示的dna分子得到的重组质粒；所述重组载体pcold tf-cfribo1可为将载体pcold tf的限制性内切酶ndei和bamhi之间的dna小片段替换为seq id no.2所示的dna分子，所到的重组质粒；所述出发微生物为细菌或者真菌；所述细菌具体为大肠杆菌bl21(de3)；
16、优选的，所述含有上述任一所述核酸分子的重组微生物具体可为bl21(de3)/pcold tf-cfribo1；所述bl21(de3)/pcold tf-cfribo1可为将重组质粒pcold tf-cfribo1导入大肠杆菌bl21(de3)得到的重组大肠杆菌。
17、优选的，一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1或其编码基因的应用，所述应用为下述任一种或多种：
18、d1)在调控核糖核酸酶活性中的应用；
19、d2)在调控抗菌活性中的应用；
20、d3)在调控梨炭疽病菌致病力中的应用；
21、d4)在抑制和/或杀灭梨炭疽病菌中的应用。
22、优选的，所述应用中包括通过抑制seq id no.1所述的编码基因中的转录或使其灭活，或抑制所述的rna分子的翻译，或抑制和/或灭活seq idno.1所述的cfribo1蛋白的活性来实现d1)-d4)所述的应用。
23、优选的，所述应用中，通过抑制如上述的编码基因的转录或抑制上述的rna分子的翻译，或抑制和/或灭活上述cfribo1蛋白的活性来调控梨炭疽病菌的致病力，从而能够抑制和/或杀灭梨炭疽病菌。
24、一种降低梨炭疽病菌致病力的方法，包括下述步骤：抑本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种梨炭疽病菌核糖毒素CfRibo1，其特征在于：所述核糖毒素CfRibo1为SEQ IDNO.1所示氨基酸序列的蛋白质。
2.如权利要求1所述一种梨炭疽病菌核糖毒素CfRibo1，其特征在于：所述SEQ ID NO.1由176个氨基酸残基组成。
3.一种梨炭疽病菌核糖毒素CfRibo1的编码基因，其特征在于：所述编码基因编码如权利要求1-2所述的梨炭疽病菌核糖毒素CfRibo1。
4.如权利要求3所述的编码基因，其特征在于：编码所述梨炭疽病菌核糖毒素CfRibo1如SEQ ID NO.2所示。
5.如权利要求4所述的编码基因，其特征在于：所述SEQ ID NO.2由531个核苷酸组成，且SEQ ID NO.2编码SEQ ID NO.2所示的蛋白质。
6.如权利要求5所述的编码基因，其特征在于：提供所述核苷酸分子相关的生物材料，包括重组载体和重组菌；所述重组载体为重组载体pColdTF-CfRibo1；所述重组菌可以通过所述核酸分子的重组载体导入出发微生物得到。
7.一种梨炭疽病菌核糖毒素CfRibo1或
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于：所述应用中包括通过抑制SEQ ID NO.1所述的编码基因中的转录或使其灭活，或抑制所述的RNA分子的翻译，或抑制和/或灭活SEQ IDNO.1所述的CfRibo1蛋白的活性来实现D1)-D4)所述的应用。
9.如权利要求7-8任意一项所述的一种降低梨炭疽病菌致病力的方法，其特征在于：包括下述步骤：抑制如所述的编码基因的转录或抑制所述的RNA分子的翻译，或抑制和/或灭活所述CfRibo1蛋白的活性。
10.如权利要求9所述的一种降低梨炭疽病菌致病力的方法，其特征在于：所述降低梨炭疽病菌致病力为降低梨炭疽病菌对寄主的侵染能力和/或对寄主的致病性，所述蛋白的灭活是通过所述抑制或降低待抑制活性或待灭活的蛋白的编码基因表达来实现，所述编码基因表达为基因敲除。
...【技术特征摘要】
1.一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1，其特征在于：所述核糖毒素cfribo1为seq idno.1所示氨基酸序列的蛋白质。
2.如权利要求1所述一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1，其特征在于：所述seq id no.1由176个氨基酸残基组成。
3.一种梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1的编码基因，其特征在于：所述编码基因编码如权利要求1-2所述的梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1。
4.如权利要求3所述的编码基因，其特征在于：编码所述梨炭疽病菌核糖毒素cfribo1如seq id no.2所示。
5.如权利要求4所述的编码基因，其特征在于：所述seq id no.2由531个核苷酸组成，且seq id no.2编码seq id no.2所示的蛋白质。
6.如权利要求5所述的编码基因，其特征在于：提供所述核苷酸分子相关的生物材料，包括重组载体和重组菌；所述重组载体为重组载体pcoldtf-cfribo1；所述重组菌可以通...
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