【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学领域，具体为一种基于hplc法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法。
技术介绍
1、右旋糖酐与蔗糖的混合物常作为冻干保护剂添加至蛋白质类药物中，以防止蛋白质类药物在冷冻干燥及储存过程中发生变性。经研究表明，该冻干保护剂的保护作用依赖于其浓度，低浓度时，保护作用与浓度呈正相关，当达到最佳保护浓度后，随着浓度的增大，保护作用不再增加，甚至下降，且过高的保护剂浓度对人体亦会产生影响，右旋糖酐与蔗糖的最佳保护浓度为5%，在此浓度下，右旋糖酐能最大程度的提高蛋白质的储藏质量，蔗糖能最大程度的通过氢键与失去水分子的蛋白质分子相连，从而防止蛋白质分子氢键连接位置直接暴露进而引起蛋白质变性。故检测蛋白质类药物（冻干保护剂：蔗糖、右旋糖酐）中的右旋糖酐与蔗糖含量至关重要。
2、目前，蔗糖含量测定多采用高效液相色谱-示差折光检测器法（high-performanceliquid chromatography-refractive index detector，hplc-rid）、高效液相色谱-蒸发光散射检测器法（high-performanceliquid chromatography -evaporative lightscattering detector，hplc-elsd）等。右旋糖酐含量测定鲜有报道，专利技术者检索到《英国药典》收载的右旋糖酐铁注射液采用蒽酮-硫酸比色法进行右旋糖酐20含量检测，方法灵敏度低、操作繁琐费力且易受到其他因素的影响。王丽等人利用高效凝胶渗透色谱法（highperformance
3、此外，2020版《中国药典》蔗糖各论与右旋糖酐20各论中均未收载主成分含量测定方法，原辅材料的纯度对其后续应用至关重要，因此有必要提出技术方案对此空白进行补充，以进一步完善原辅材料蔗糖与右旋糖酐20的质量标准，确保其质量。
技术实现思路
1、专利技术目的：针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种可简便、准确检测右旋糖酐20和蔗糖含量的方法，以实现对右旋糖酐20和蔗糖含量更加严格的质量控制。
2、为实现以上目的，本专利技术设计以下技术方案：一种基于hplc法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，包括以下步骤：
3、s1、制备右旋糖酐20和蔗糖梯度标准溶液
4、取蔗糖对照品及干燥至恒重的右旋糖酐20对照品各适量，精密称定，溶于cacl2·2h2o水溶液中，转至一容量瓶并定容至刻度，摇匀，得到右旋糖酐20和蔗糖标准贮备液，再用cacl2·2h2o水溶液稀释得到一系列右旋糖酐20和蔗糖梯度标准溶液，过滤后备用。
5、s2、制备供试品溶液
6、取供试品适量，cacl2·2h2o水溶液溶解并定容至一容量瓶中，即得供试品溶液，过滤后备用。
7、s3、设置色谱条件
8、采用离子交换色谱柱，示差折光检测器（rid），以cacl2·2h2o水溶液为流动相进行等度洗脱。
9、s4、供试品分析
10、进样右旋糖酐20和蔗糖梯度标准溶液及供试品溶液，记录色谱图，采用外标法计算供试品溶液中右旋糖酐20和蔗糖含量。
11、优选的，所述s1步骤中，所述右旋糖酐20干燥至恒重的温度为105℃。蔗糖对照品无需干燥恒重，按其说明书使用，如中国食品药品检定研究院的蔗糖对照品无需干燥恒重，可以直接使用，用于含量测定。
12、优选的，所述s1步骤中，所述右旋糖酐20和蔗糖标准贮备液的浓度为10mg/ml，右旋糖酐20和蔗糖梯度标准溶液的浓度分别为：1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml及3mg/ml。
13、优选的，所述s1和s2步骤中过滤均采用针头滤器，针头滤器孔径为0.20～0.45μm。
14、优选的，所述s3步骤中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为离子交换色谱柱，所述s3步骤中，所述高效液相色谱法为等度洗脱，流动相为0.011%～0.022%cacl2·2h2o水溶液，0.011%～0.022%cacl2·2h2o水溶液可预防右旋糖酐20在色谱柱上的吸附，更优选的，流动相为0.022%cacl2·2h2o水溶液。
15、优选的，所述s3步骤中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为钙型强阳离子交换色谱柱或钠型强阳离子交换色谱柱的一种。
16、优选的，所述s3步骤中，所述高效液相色谱法的色谱条件为柱温50°c～85°c，流速0.3ml/min～0.6ml/min，检测器温度为30°c～55°c。
17、本专利技术提供了一种基于hplc法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法。具备以下有益效果：
18、1、本专利技术采用离子交换色谱柱进行右旋糖酐20和蔗糖含量测定，经筛选发现离子交换色谱柱较其他色谱柱，更适于糖类的检测。
19、2、本专利技术提供的分析方法流动相为 cacl2·2h2o水溶液，相较于有机溶剂更加环保；流动相浓度为0.011%～0.022%，相较于高浓度溶液，低浓度溶液在使用和处理时更为安全，且减少了对资源的消耗。
20、3、本专利技术提供的分析方法右旋糖酐20和蔗糖峰形尖锐对称，分离度高，分析过程简单易操作、结果准确可靠。
21、4、本专利技术提供的分析方法以测定注射用a型肉毒毒素（衡力®）中右旋糖酐20和蔗糖含量为例进行方法学验证，证明该方法灵敏度高、专属性强、准确度高、重复性及中间精密度好、耐用性佳。
22、5、本专利技术提供的分析方法除可分析注射用a型肉毒毒素（衡力®）中右旋糖酐20和蔗糖含量外，也能够应用于：①一些含右旋糖酐20及蔗糖的水溶性蛋白类药物中右旋糖酐20、蔗糖含量测定；②一些含右旋糖酐20或蔗糖单一成分的水溶性蛋白类药物中右旋糖酐20、蔗糖含量测定；③原辅材料右旋糖酐20的含量测定；④原辅材料蔗糖的含量测定等。
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1.一种基于HPLC法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于HPLC法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述S1步骤中，所述右旋糖酐20干燥至恒重的温度为55～105℃。
3.根据权利要求1所述的一种基于HPLC法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述S1步骤中，所述右旋糖酐20和蔗糖标准贮备液的浓度为10mg/ml，右旋糖酐20和蔗糖梯度标准溶液的浓度分别为：1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml及3mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种基于HPLC法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述S1和S2步骤中过滤均采用针头滤器，针头滤器孔径为0.20～0.45μm。
5.根据权利要求1所述的一种基于HPLC法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述S3步骤中，所述高效液相色谱法采用的色谱柱为离子交换色谱柱，所述S3步骤中，所述高效液相色谱法流动相为0.011%～0.022%CaCl2·2
6.根据权利要求1所述的一种基于HPLC法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述S3步骤中，所述高效液相色谱法的色谱条件为柱温50℃～85℃，流速0.3ml/min～0.6ml/min，检测器温度为30℃～55℃。
...【技术特征摘要】
1.一种基于hplc法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于hplc法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述s1步骤中，所述右旋糖酐20干燥至恒重的温度为55～105℃。
3.根据权利要求1所述的一种基于hplc法测定右旋糖酐20和蔗糖含量的分析方法，其特征在于，所述s1步骤中，所述右旋糖酐20和蔗糖标准贮备液的浓度为10mg/ml，右旋糖酐20和蔗糖梯度标准溶液的浓度分别为：1mg/ml、1.5mg/ml、2mg/ml、2.5mg/ml及3mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种基于hplc法测定右旋糖酐...
【专利技术属性】
技术研发人员：梁姗，李小娟，王爱秀，朱衍志，张锦波，
申请(专利权)人：兰州生物技术开发有限公司，
类型：发明
国别省市：
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