【技术实现步骤摘要】
本申请涉及抗体。更具体地，本申请涉及与pd-l1特异性结合的单域抗体、其制备方法及其用途。
技术介绍
1、临床前和临床结果中越来越多的证据表明靶向免疫检查点成为治疗癌症患者的最有前途的方法。
2、程序性死亡蛋白1(pd-1)是1992年发现的表达在t细胞表面的一个蛋白受体，参与细胞的凋亡过程。pd-l属于cd28家族，与细胞毒性t淋巴细胞抗原4(cytotoxic tiymphocyte antigen 4，ctla-4)具有23％的氨基酸同源性，但其表达却与ctla不同，主要表达在活化的t细胞、b细胞和骨髓细胞上(agata等，okazaki等(2002)curr.opin.immunol.14:391779-82；bennett等(2003)j immunol 170:711-8)，并且在调节免疫系统中的刺激和抑制信号方面具有关键作用(okazaki，taku等(2007)internationalimmunology 19:813-824)。pd-1通过筛选凋亡细胞中的差异表达而被发现(ishida等(1992)embo j 11:3887-95)。
3、pd-1有两种已知的配体，即pd-l1(也称为b7-h1或cd274)和pd-l2(也称为b7-dc或cd273)，它们是b7家族中表达在细胞表面上的成员(freeman等(2000)j exp med 192:1027-34；latchman等(2001)nat immunol 2:261-8；carter等(2002)eur j immunol
4、在活化的t细胞上表达的pd-1和在肿瘤细胞上表达的pd-l1的相互作用负调节免疫应答并抑制抗肿瘤免疫。pd-l1在多种人癌症中大量存在(dong等(2002)nat.med 8:787-9)。pd-l1在肿瘤上的表达与食管癌、胰腺癌和其他类型癌症中存活率降低相关，突出显示该途径可作为肿瘤免疫治疗的有希望的靶标。
5、单域抗体(single domain antibody，sdab)，是指缺失抗体轻链而只有重链可变区的一类抗体，因其分子量小，也被称为纳米抗体(nanobody)。20世纪90年代，单域抗体最早在骆驼科动物中被发现。第一个单域抗体是由骆驼科动物中发现的重链抗体改造而来的(hamers-casterman c，atarhouch t，muyldermans s，robinson g，hamers c，songa eb，bendahman n，hamers r(1993)naturally occurring antibodies devoid of lightchains.nature 363(6428):446-448.)单域抗体虽然结构简单，但仍像整个抗体一样，它能够选择性结合特定的抗原，可以达到与传统抗体相当甚至更高的与特异抗原结合的亲和力。
6、相比于传统抗体，单域抗体具有分子量小、稳定性强、易于重组表达等优点。例如，它们通常表现出高溶解度和稳定性，并且还可以容易地在酵母、植物和哺乳动物细胞中产生(harmsen mm，de haard hj(2007)properties，production，and applications ofcamelid single-domain antibody fragments.applmicrobiol biotechnol 77(1):13–22.)。此外，它们具有良好的热稳定性和良好的组织渗透性。而且它们还在生产中具有成本效益。单域抗体的优势使其适用于各种生物技术和治疗应用。例如，它们可用于治疗疾病，包括但不限于癌症、感染性疾病、炎症性疾病和神经退行性疾病。
7、虽然已开发出针对pd-l1的抗体，但作为治疗剂仍有改善抗pd-l1抗体的需要。此外，目前针对pd-l1的单域抗体很少，因此开发靶向pd-l1的单域抗体在相关疾病的治疗方面将具有重要的意义。
技术实现思路
1、本专利技术通过提供特异性结合pd-l1的抗体，优选单域抗体满足了上述需求。
2、在一个方面，本专利技术提供了一种程序性死亡配体1(pd-l1)结合分子，所述pd-l1结合分子包含重链可变区(vh)，所述vh包含:
3、a)hcdr1：包含seq id no:1所示的氨基酸序列；
4、b)hcdr2：包含seq id no:2所示的氨基酸序列；
5、c)hcdr3：包含seq id no:3所示的氨基酸序列。
6、在一些实施例中，所述pd-l1结合分子包含重链可变区(vh)，所述vh包含:
7、1)seq id no:4所示的氨基酸序列，或与seq id no:4所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
8、2)seq id no:5所示的氨基酸序列，或与seq id no:5所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
9、3)seq id no:6所示的氨基酸序列，或与seq id no:6所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
10、4)seq id no:7所示的氨基酸序列，或与seq id no:7所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
11、5)seq id no:8所示的氨基酸序列，或与seq id no:8所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
12、6)seq id no:9所示的氨基酸序列，或与seq id no:9所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；
【技术保护点】
1.程序性死亡配体1(PD-L1)结合分子，其中所述PD-L1结合分子包含重链可变区(VH)，所述VH包含：
2.根据权利要求1所述的PD-L1结合分子，其中所述VH包含：
3.根据权利要求1或2中所述的PD-L1结合分子，其进一步包含一个或多个氨基酸残基突变但仍保持与PD-L1特异性结合。
4.根据权利要求3所述的PD-L1结合分子，其中所述突变中的至少一个在VH序列中但不在任一个CDR序列中。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的PD-L1结合分子，其中所述PD-L1结合分子是PD-1拮抗剂，优选为抗PD-L1抗体。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的PD-L1结合分子，其中所述PD-L1结合分子是嵌合抗体。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的PD-L1结合分子，其中所述PD-L1结合分子是人源化抗体。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的PD-L1结合分子，其中所述PD-L1结合分子是单域抗体，优选为重链单域抗体(VHH)。
9.根据权利要求8中任一项所述的PD-L1结合分子
10.根据权利要求1-9中任一项所述的PD-L1结合分子，其中所述VH与IgG的Fc结构域融合。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的PD-L1结合分子，其中所述VH与人IgG的Fc结构域融合。
12.根据权利要求9所述的PD-L1结合分子，其中所述PD-L1结合分子是来自骆驼科动物的VHH与人IgG的Fc结构域的嵌合抗体。
13.根据权利要求12所述的PD-L1结合分子，其中所述PD-L1结合分子是来自骆驼科动物的VHH与人IgG1或IgG4的Fc结构域的嵌合抗体。
14.根据权利要求1-13所述的PD-L1结合分子，所述Fc结构域为SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:15所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的PD-L1结合分子，其包含：
16.一种抗体-药物缀合物，其包含根据权利要求1-15中任一项所述的PD-L1结合分子，其与一个或多个缀合物部分连接。
17.一种核酸，其编码根据权利要求1-15中任一项所述的抗PD-L1结合分子。
18.根据权利要求17所述的核酸，其包含：
19.一种表达载体，其包含根据权利要求17或18所述的核酸。
20.一种宿主细胞，其包含根据权利要求17或18所述的核酸或根据权利要求18所述的表达载体。
21.一种药物组合物，其包含根据权利要求1-15中任一项所述的PD-L1结合分子，或根据权利要求16所述的抗体-药物缀合物，或根据权利要求17或18所述的核酸，或根据权利要求19所述的表达载体中的一种或多种和药学上可接受的载体。
22.根据权利要求1-15中任一项所述的PD-L1结合分子，或根据权利要求16所述的抗体-药物缀合物，或根据权利要求21所述的药物组合物在制备用于治疗或预防受试者中与PD-L1相关的疾病；或用于抑制或阻断受试者中PD-L1与PD-1结合；或用于治疗或预防受试者中会受益于免疫应答上调的疾病的药物中的用途。
23.根据权利要求22所述的用途，其中所述药物是经口、鼻、静脉内、皮下、舌下或肌肉内给药。
24.根据权利要求22所述的用途，其中所述疾病是增殖性病症或感染，所述增殖性疾病包含癌症。
25.根据权利要求24所述的用途，其中所述癌症选自：乳腺癌、肺癌、结肠癌、卵巢癌、黑色素瘤、膀胱癌、肾癌、肝癌、涎腺癌、胃部癌症、神经胶质瘤、甲状腺癌、胸腺癌、上皮癌、头颈癌、胃癌和胰腺癌。
26.根据权利要求22所述的用途，其中所述感染是慢性感染。
27.一种治疗或预防受试者中与PD-L1相关的疾病；或抑制或阻断受试者中PD-L1与PD-1结合；或治疗或预防受试者中会受益于免疫应答上调的疾病的方法，其包含向需要的受试者施用治疗有效量的根据权利要求1-15中任一项所述的PD-L1结合分子，或根据权利要求16所述的抗体-药物缀合物，或根据权利要求21所述的药物组合物。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述药物是经口、鼻、静脉内、皮下、舌下或肌肉内给药。
29.根据权利...
【技术特征摘要】
1.程序性死亡配体1(pd-l1)结合分子，其中所述pd-l1结合分子包含重链可变区(vh)，所述vh包含：
2.根据权利要求1所述的pd-l1结合分子，其中所述vh包含：
3.根据权利要求1或2中所述的pd-l1结合分子，其进一步包含一个或多个氨基酸残基突变但仍保持与pd-l1特异性结合。
4.根据权利要求3所述的pd-l1结合分子，其中所述突变中的至少一个在vh序列中但不在任一个cdr序列中。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是pd-1拮抗剂，优选为抗pd-l1抗体。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是嵌合抗体。
7.根据权利要求1-5中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是人源化抗体。
8.根据权利要求1-5中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是单域抗体，优选为重链单域抗体(vhh)。
9.根据权利要求8中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述vhh来源于骆驼科动物，所述骆驼科动物包含羊驼或美洲驼。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述vh与igg的fc结构域融合。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的pd-l1结合分子，其中所述vh与人igg的fc结构域融合。
12.根据权利要求9所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是来自骆驼科动物的vhh与人igg的fc结构域的嵌合抗体。
13.根据权利要求12所述的pd-l1结合分子，其中所述pd-l1结合分子是来自骆驼科动物的vhh与人igg1或igg4的fc结构域的嵌合抗体。
14.根据权利要求1-13所述的pd-l1结合分子，所述fc结构域为seq id no:15所示的氨基酸序列，或与seq id no:15所示序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
15.根据权利要求1-13中任一项所述的pd-l1结合分子，其包含：
16.一种抗体-药物缀合物，其包含根据权利要求1-15中任一项所述的pd-l1结合分子，其与一个或多个缀合物部分连接。
17.一种核酸，其编码根据权利要求1-15中任一项所述的抗pd-l1结合分子。
18.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：王文义，尹晴晴，李元念，
申请(专利权)人：恒元生物医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：
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