【技术实现步骤摘要】
本申请是关于一种在酸性环境下具有蛋白水解能力的蛋白酶；特别是有关于一种具有麸质蛋白水解能力的天冬氨酸蛋白酶及其用途。
技术介绍
1、麸质(gluten，或称麸质蛋白)是一种存在于小麦、大麦和黑麦等麦类谷物中的蛋白质，常见于面包、饼干或蛋糕等食品中。麸质赋予食品弹性与耐嚼的特性，但是也对胃的消化作用具有高度耐受性。乳糜泻(celiac disease,cd)则是一种因摄取麸质而引起的自体免疫疾病。引发乳糜泻的主要蛋白质，为麸质中的小麦醇溶蛋白(gliadin)，其包含脯胺酸(proline)和麸酰胺酸(glutamine)，而对蛋白酶的水解具有抗性。因此胃蛋白酶难以完全消化小麦醇溶蛋白，并且留下多个麸质免疫胜肽(gluten immunogenic peptides)。麸质免疫胜肽在十二指肠被吸收后，容易与t细胞结合并引起免疫反应，造成小肠绒毛使吸收不良。典型症状包含腹泻、腹胀和腹部绞痛等。
2、口服酶疗法(oral protease therapy)是种具有潜力的乳糜泻辅助疗法。辅助无麸质饮食的口服蛋白酶需在胃的酸性环境下(ph 2.0-4.0)具有活性，并在麸质免疫胜肽进入十二指肠引发免疫反应前，快速切割免疫胜肽。然而，许多研究指出，市面上有许多乳糜泻的蛋白酶补充剂在酸性环境下，对麸质免疫胜肽上t细胞的抗原决定位切割无效。因此迫切需要一种新型的蛋白酶，不仅对于胃蛋白酶具有抗性，并且在胃酸环境下具有麸质蛋白水解能力，及可以有效切割免疫胜肽的抗原决定位。
技术实现思路
1
2、根据本申请的一实施例，所述天冬氨酸蛋白酶包含与seq id no：1、seq id no：2，或seq id no：3所示相同的胺基酸序列。
3、较佳地，本申请的天冬氨酸蛋白酶在ph2.5对麸质蛋白具有较佳的水解能力。
4、根据本申请的一实施例，所述天冬氨酸蛋白酶对于胃蛋白酶的水解具有抗性，且对于麸质免疫胜肽26-mer或33-mer的抗原决定位具有切割能力。
5、根据本申请的一实施例，其中，所述天冬氨酸蛋白酶包含与seq id no：6所示序列至少90％以上相似的胺基酸序列。
6、本申请另一目的是提供一种核酸分子，用以编码本申请的天冬氨酸蛋白酶。所述核酸分子包含与seq id no：4或seq id no：5所示序列至少70％以上相似度的序列。
7、本申请又一目的是提供一种重组质体，其包含一核酸序列及一调控序列，所述核酸序列包含与seq id no：4或seq id no：5所示序列至少70％以上相似度的序列；所述调控序列能够在特定细胞中启动产生由该核酸序列编码的蛋白质。
8、本申请又一目的是提供一种生产天冬氨酸蛋白酶的转形菌株，其包含一宿主细胞及如前述的重组质体。
9、根据本申请的一实施例，所述宿主细胞为解脂耶氏酵母菌(yarrowialipolytica)。
10、本申请又一目的是提供一种天冬氨酸蛋白酶的生产方法，所述天冬氨酸蛋白酶具有麸质蛋白水解能力，包含以下步骤：提供一转形菌株，所述转形菌株包含一重组质体，所述重组质体包含与seq id no：4或seq id no：5所示序列至少70％以上相似度的序列；以一液态培养液培养该转形菌株，使该转形菌株产生所述天冬氨酸蛋白酶至液态培养液中；以及取出该液态培养液并进行纯化，以取得所述天冬氨酸蛋白酶。
11、根据本申请的一实施例，所述天冬氨酸蛋白酶具有一组胺酸标签(his-tag)，本申请纯化天冬氨酸蛋白酶的步骤包含：收集该液态培养液上方的澄清液，以体积1：10的比例加入一结合缓冲液(由磷酸钠、氯化钠及咪唑组成，ph值为6.0)形成一第一混合溶液，并在冰上平衡；将第一混合液与一具有二价阳离子的层析胶体进行结合；以结合缓冲液清洗未与所述层析胶体结合的蛋白质；及利用由60％的结合缓冲液和40％的0.1m甘胺酸-盐酸(ph值为2.5)形成的一第二混合溶液，将所述天冬氨酸蛋白酶冲提出来。
12、本申请另一目的是提供一种酵素补充剂，用于代谢含麸质蛋白食品，其包含一天冬氨酸蛋白酶，所述天冬氨酸蛋白酶对于胃蛋白酶的水解具有抗性，且对于麸质免疫胜肽26-mer或33-mer的抗原决定位具有切割能力；所述天冬氨酸蛋白酶包含与seq id no：1、seq id no：2，或seq id no：3所示序列至少70％以上相似度的胺基酸序列。
13、综上所述，本申请的天冬氨酸蛋白酶具有以下优点：(1)在胃的酸性环境具有蛋白质水解活性，(2)可辅助胃蛋白酶的水解作用，以及(3)能够水解麸质免疫胜肽。本申请的天冬氨酸蛋白酶可以用于制备治疗乳糜泻、麸质过敏或麸质不耐症等疾病的药物或蛋白酶(酵素)补充剂。
14、有关本申请的其它功效及实施例的详细内容，配合图式说明如下。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种天冬氨酸蛋白酶，用于水解麸质蛋白的用途，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶在pH2.0至pH4.0之间对麸质蛋白具有水解能力，该天冬氨酸蛋白酶包含与SEQ ID NO：1、SEQID NO：2，或SEQ ID NO：3所示序列至少70％以上相似度的胺基酸序列。
2.根据权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶在pH2.5对麸质蛋白具有较佳的水解能力。
3.根据权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶对于胃蛋白酶的水解具有抗性，且对于麸质免疫胜肽26-mer或33-mer的抗原决定位具有切割能力。
4.根据权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶包含与SEQID NO：6所示序列至少90％以上相似的胺基酸序列。
5.一种核酸分子，用以编码如权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，具有水解麸质蛋白的用途，其特征在于，包含选自下列组合之一序列：
6.一种重组质体，其特征在于，包含如权利要求5所述的核酸分子及一调控序列，该调控序列能够启动产生由该核酸分子编码的蛋白质。
...【技术特征摘要】
1.一种天冬氨酸蛋白酶，用于水解麸质蛋白的用途，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶在ph2.0至ph4.0之间对麸质蛋白具有水解能力，该天冬氨酸蛋白酶包含与seq id no：1、seqid no：2，或seq id no：3所示序列至少70％以上相似度的胺基酸序列。
2.根据权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶在ph2.5对麸质蛋白具有较佳的水解能力。
3.根据权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶对于胃蛋白酶的水解具有抗性，且对于麸质免疫胜肽26-mer或33-mer的抗原决定位具有切割能力。
4.根据权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，其特征在于，该天冬氨酸蛋白酶包含与seqid no：6所示序列至少90％以上相似的胺基酸序列。
5.一种核酸分子，用以编码如权利要求1所述的天冬氨酸蛋白酶，具有水解麸质蛋白的用途，其特征在于，包含选自...
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。