【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及特异性结合epha2的新型抗体或其抗原结合片段，包含抗体的抗原结合可变片段的嵌合抗原受体，和表达嵌合抗原受体的免疫细胞。
技术介绍
1、用于治疗癌症的方法一直在稳定地发展和变化，并且诸如手术、化疗和放疗等方法至今仍在使用。然而，这些用于治疗癌症的常规方法通常只在癌症尚未转移的早期阶段有效，并且如果癌症已经转移，即使进行手术，将来也存在高的复发可能性。近年来，研究人员一直在探索利用免疫反应来治疗癌症的方法。
2、具体而言，存在对使用免疫细胞来增强它们或基因修饰它们并将它们重新输注至患者中的细胞疗法的日益增长的兴趣，所述细胞疗法例如肿瘤浸润淋巴细胞(til)、嵌合抗原受体(car)和t细胞受体(tcr)。具体而言，嵌合抗原受体是被设计为将抗原特异性传递给t细胞或自然杀伤细胞(nk细胞)的人工受体，由细胞外结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域组成，这允许受体通过结合癌细胞特异抗原来激活免疫细胞并提供特异性免疫。并且表达这些嵌合抗原受体的t细胞已被命名为car-t细胞(kershaw等人，nat.rev.immunol..5(12):928-940,2005；restifo等人，nat.rev.immunol.,12(4):269-281,2012)，并且表达car的自然杀伤细胞已被命名为car-nk细胞。
3、上文的嵌合抗原受体的细胞内信号传导结构域主要基于cd3ζ的细胞内信号传导结构域，即t细胞受体的信号传导亚基(第一代car)。它们已经发展到包含促进免疫细胞生长和分化的共刺激分子的细胞内信
4、另一方面，epha2(肝配蛋白(ephrin)a型受体2)，一种由人类epha2基因表达的蛋白质，已知在包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌等的各种类型的癌症中过表达，并且已知会促进癌细胞的生长和侵袭。此外，据报道，epha2的表达与癌症患者的生存率相关。针对这种技术背景，需要研究通过以下来治疗癌症的策略和方法的另一方面：开发靶向特别地在癌细胞中过表达的上文的epha2的抗体，以及使用所述抗体的car-t和car-nk治疗。
技术实现思路
1、技术问题
2、本专利技术的目的是提供可以特异性结合主要在癌细胞中表达的epha2的抗体或抗原结合片段。
3、此外，本专利技术的目的是提供新型嵌合抗原受体，所述新型嵌合抗原受体当在免疫细胞上表达时，可以增强针对癌细胞的细胞毒性或细胞溶解活性。
4、此外，本专利技术的目的是提供用于表达嵌合抗原受体的多核苷酸和表达载体。
5、本专利技术的目的还是通过在免疫细胞的表面表达嵌合抗原受体而提供具有针对癌症的治疗效果的免疫细胞。
6、此外，本专利技术的目的是提供使用免疫细胞的用于治疗癌症的药物组合物。
7、技术方案
8、为了实现上文的目的，在本专利技术的一方面，提供特异性结合肝配蛋白a型受体2(epha2)的抗体或抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含具有seq id no:1或seq id no:9的氨基酸序列的重链cdr1、具有seq id no:2或seq id no:10的氨基酸序列的重链cdr2和具有seq id no:3或seq id no:11的氨基酸序列的重链cdr3；所述轻链可变区包含具有seq id no:4或seq id no:12的氨基酸序列的轻链cdr1、具有seq id no:5或seq id no:13的氨基酸序列的轻链cdr2和具有seq id no:6或seq idno:14的氨基酸序列的轻链cdr3。
9、在本专利技术的另一方面，提供包含以下的嵌合抗原受体(car)：细胞外结合结构域，其包含特异性结合epha2(肝配蛋白a型受体2)的抗原结合位点；跨膜结构域；和细胞内信号传导结构域，其中特异性结合epha2的抗原结合位点是包含重链可变区和轻链可变区的单链可变片段(scfv)，所述重链可变区包含具有seq id no:1或seq id no:9的氨基酸序列的重链cdr1、具有seq id no:2或seq id no:10的氨基酸序列的重链cdr2和具有seq id no:3或seq id no:11的氨基酸序列的重链cdr3，所述轻链可变区包含具有seq id no:4或seqid no:12的氨基酸序列的轻链cdr1、具有seq id no:5或seq id no:13的氨基酸序列的轻链cdr2和具有seq id no:6或seq id no:14的氨基酸序列的轻链cdr3。
10、在本专利技术的另一方面，提供包含编码嵌合抗原受体的核苷酸序列的多核苷酸和包含该多核苷酸的表达载体。
11、本专利技术的另一方面提供在免疫细胞的表面表达嵌合抗原受体的免疫细胞。
12、本专利技术的另一方面提供包含免疫细胞的用于治疗癌症的药物组合物。
13、有利效果
14、本专利技术的抗体、其抗原结合片段和利用所述抗体及其抗原结合片段的嵌合抗原受体，可以特异性结合主要在癌细胞中表达的epha2，并且从而具有随着信号转导在表达嵌合抗原受体的免疫细胞中发生，而显著增强免疫细胞的细胞毒性或细胞溶解活性和促进细胞因子的分泌的作用。此外，它具有增强与免疫细胞共培养的癌细胞脱颗粒的作用。
15、因此，本专利技术的抗体、使用所述抗体的嵌合抗原受体和表达car的免疫细胞可以是对治疗癌症有用的。
16、然而，本专利技术的作用不限于上文所提到的那些，并且从以下描述中，未提到的其他作用对于本领域技术人员将是显而易见的。
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1.特异性结合肝配蛋白A型受体2(EphA2)的抗体或其抗原结合片段，其包含：
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述重链可变区具有SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:15的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述轻链可变区具有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:16的氨基酸序列。
4.嵌合抗原受体，其包含：
5.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述特异性结合EphA2的抗原结合位点是抗EphA2抗体的单链可变片段，其包含具有SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:15的氨基酸序列的重链可变区。
6.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述特异性结合EphA2的抗原结合位点是抗EphA2抗体的单链可变片段，其包含具有SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:16的氨基酸序列的重链可变区。
7.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述细胞外结构域还包含选自铰链结构域和间隔基结构域中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的嵌合抗原受
9.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域是来源于选自以下中的至少一种的跨膜结构域：T细胞受体(TCR)的α、β或ζ链、CD28、CD3ε、CD45、CD4、CD5、CD8、CD9、CD16、CD22、CD33、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。
10.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述细胞内信号传导结构域来源于选自以下中的至少一种：T细胞受体(TCR)ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。
11.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述细胞内信号传导结构域包含至少一个来源于选自以下中的一种的初级信号传导结构域：T细胞受体(TCR)ζ、FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD5、CD22、CD79a、CD79b和CD66d；和
12.多核苷酸，其包含编码根据权利要求4至11中任一项所述的嵌合抗原受体的核苷酸序列。
13.表达载体，其包含根据权利要求12所述的多核苷酸。
14.免疫细胞，其在它的表面表根据达权利要求4至11中任一项所述的嵌合抗原受体。
15.根据权利要求14所述的免疫细胞，其中所述免疫细胞选自自然杀伤细胞(NK细胞)、T细胞、自然杀伤T细胞(NKT细胞)、细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、巨噬细胞和树突细胞。
16.用于治疗癌症的药物组合物，其包含根据权利要求14所述的免疫细胞。
17.根据权利要求16所述的药物组合物，其中所述癌症是选自以下中的至少一种：肺癌、胃癌、卵巢癌、宫颈癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、食道癌、皮肤癌、甲状腺癌、肾癌、肝癌、头颈部癌、膀胱癌、前列腺癌、血液癌、多发性骨髓瘤、急性髓系白血病、恶性淋巴瘤、胸腺癌、骨肉瘤、纤维性肿瘤和脑癌。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.特异性结合肝配蛋白a型受体2(epha2)的抗体或其抗原结合片段，其包含：
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述重链可变区具有seq id no:7或seq id no:15的氨基酸序列。
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合片段，其中所述轻链可变区具有seq id no:8或seq id no:16的氨基酸序列。
4.嵌合抗原受体，其包含：
5.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述特异性结合epha2的抗原结合位点是抗epha2抗体的单链可变片段，其包含具有seq id no:7或seq id no:15的氨基酸序列的重链可变区。
6.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述特异性结合epha2的抗原结合位点是抗epha2抗体的单链可变片段，其包含具有seq id no:8或seq id no:16的氨基酸序列的重链可变区。
7.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体，其中所述细胞外结构域还包含选自铰链结构域和间隔基结构域中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的嵌合抗原受体，其中所述铰链结构域或所述间隔基结构域是选自myc表位、cd8铰链结构域和fc中的至少一种。
9.根据权利要求4所述的嵌合抗原受体，其中所述跨膜结构域是来源于选自以下中的至少一种的跨膜结构域：t细胞受体(tcr)的α、β或ζ链、cd28、cd3ε、cd45、cd4、cd5、cd8、cd9、cd16、cd22、cd33、cd37、cd64、cd80、cd86、cd134、...
【专利技术属性】
技术研发人员：金泰暾，李秀然，丁孝荣，姜荣柱，金恩敬，金宥妌，金大暎，金润智，
申请(专利权)人：韩国生命工学研究院，
类型：发明
国别省市：
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