【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医药领域，特别是一种活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法及其应用。
技术介绍
1、动脉粥样硬化（as）斑块破裂可导致血栓形成和血管阻塞等事件的发生。研究发现，炎症浸润和脂质代谢紊乱是as斑块微环境的两个主要特征，二者相互作用形成恶性循环，加剧as疾病的进展。因此，同时改善易损斑块炎症浸润和脂质代谢紊乱是治疗该疾病的关键。目前临床上虽然有一些治疗as的基础药物，但还没有针对as斑块的靶向药物治疗策略。as斑块部位与正常生理血管相比，具有较高的血流剪切力，且活性氧（ros）浓度急剧升高。通过设计一种可靶向as斑块并实现其微环境响应释药的纳米药物递送系统，可以将抗as药物准确地递送至病变部位，降低给药剂量的同时提高病变部位的有效药物浓度，提高药物的治疗效果。
2、白藜芦醇(3,4,5-三羟基芪，res)是一种天然多酚类化合物，在治疗心肌梗死、心律失常、炎症导致纤维化、动脉粥样硬化和血栓形成等心血管疾病方面具有良好的疗效。研究表明，res能够有效抑制炎症相关因子的表达，清除体内自由基，降低ros浓度，由于其抗氧化和抗炎特性，在调控斑块炎症浸润，介导抗as作用方面具有深刻的意义。
3、β-环糊精（β-cd）是现实应用中最常见的一种环糊精，由于其具有较好的生物安全性，成本低且易制备，近年来作为新型药物载体发展迅速。β-cd可通过主-客体包合作用与多种客体分子形成超分子自组装体系从而负载药物，具有非常灵敏的剪切力响应性能，可精准控制药物的释放。此外，基于β-cd外亲水内疏水的特性，通过与客体
4、岩藻多糖（fucoidan，fuc）又称岩藻聚糖硫酸酯，主要来源于海洋褐藻，是一种含岩藻糖的复杂硫酸化多糖，具有细胞识别和黏附作用。p-选择素是一种在活化血小板和受损内皮细胞上过表达的跨膜糖蛋白，fuc可以模拟p-选择素糖蛋白配体1(psgl-1)，对p-选择素具有较高的亲和力，因此，fuc修饰的纳米递药系统可有效靶向as病灶部位，实现药物的定点递送。
5、纳米硒（selenium nanoparticles，senps）作为新型硒源，与一般的有机硒和有机硒相比，具有生物利用性好、天然低毒的特点。由于其抗氧化、抗微生物、抗糖尿病和抗肿瘤活性，senps在生物医药领域的应用越来越广泛。然而，senps因其表面缺少邻近配位的原子导致活性较高，在常温下极不稳定，易聚集形成毒性更大的单质se。因此，在制备senps的过程中一般会使用分散剂来增加senps的分散性。多糖类分子结构中具有羟基，能通过分子间氢键与se结合，防止senps聚集，因此多糖（如fuc）常被用于分散senps。
6、活性氧（ros）敏感的酮缩硫醇（tk）键，可在病变部位高活性氧水平的刺激下发生断裂。
7、但如何首先将β-环糊精（β-cd）通过主客体作用包裹白藜芦醇（res），通过ros敏感的缩硫酮键与岩藻多糖（fuc）连接，然后，岩藻多糖（fuc）与纳米硒（senps）通过se-o键连接，合成纳米递药系统fcd-se/res。fcd-se/res到达as病灶部位后，主动识别p-选择素，受损内皮细胞的高渗透性促使纳米粒进入斑块内部。然后，fcd-se/res响应as部位高剪切力和高胆固醇微环境，定点释放res，降低给药剂量的同时增加了res在as部位的有效浓度，精准改善as病变部位的炎症微环境。此外，tk键可响应as部位的ros断裂，β-cd从纳米粒上游离下来，并与胆固醇形成可溶性包合物，加速胆固醇外排，与res协同发挥抗as作用，多管齐下，实现as的靶向有效的治疗，但至今未见相关报道。
技术实现思路
1、针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本专利技术之目的就是提供一种活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法及其应用，可有效解决活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备，实现在制备治疗动脉粥样硬化药物中的应用问题。
2、本专利技术解决的技术方案是，一种活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，以抗炎药物白藜芦醇（res）作为模型药物，利用具有剪切力敏感性的β-环糊精(β-cd)的疏水空腔负载res，并将β-cd通过ros敏感键tk与岩藻多糖连接，最后通过se-o键修饰于senps表面，构建具有可靶向动脉粥样硬化（as）斑块、ros-剪切力双响应的纳米药物递送系统，以改善as病变部位的炎症和高胆固醇微环境，显著延缓as进程，具体包括以下步骤：
3、（1）活性氧敏感的缩硫酮tk的制备：将2-7g的无水3-巯基丙酸和3-9g的无水丙酮混合在一起，再与催化剂三氟乙酸100μl混合，室温搅拌3-9h，倒入冰水浴中，析出的晶体分别用在4℃冰箱预冷的正己烷和去离子水洗涤10min，洗涤液每次用量为10ml，冷冻干燥，收集得到的白色粉末；
4、（2）fuc-tk-hooc（岩藻多糖键羧基）的制备：称取2-8mg步骤（1）制备的白色粉末溶于2-3ml无水甲酰胺中，并依次加入62μl 2,4,6-三氯苯甲酰氯、62mg二甲氨基吡啶、62μl三乙胺，室温下磁力搅拌20-40min，称取2-8mg岩藻多糖（fuc），加入上述溶液中，密封避光，室温搅拌反应12-36h，10000-12000rpm离心10-30min，收集沉淀；
5、（3）fuc-tk-β-cd（岩藻多糖键β-环糊精）的制备：称取2-8mg步骤（2）所得沉淀和5-14mg单氨基修饰的β-环糊精（此为市售产品）溶于2-4ml无水的n,n-二甲基甲酰胺中，依次加入3.9mg碳二亚胺和2.3mg n-羟基硫代琥珀酰亚胺，磁力搅拌24-72h，10000-12000rpm离心10-40min，收集沉淀产物；
6、（4）fcd/res的制备：称取3-12mg步骤（3）制备的沉淀物，溶于2-4ml n,n-二甲基甲酰胺，搅拌使其溶解，向其中加入2-5mg白藜芦醇（res），继续避光搅拌反应6-18h，旋蒸除去溶剂，用超纯水重新分散，转移至mwco=3500da的透析袋中，透析24h，冷冻干燥，收集产物，得fcd/res；
7、（5）fcd-se/res的制备：吸取10mm的na2seo3溶液2ml、2mg/ml步骤（4）制备的沉淀物溶液0.16ml加入反应瓶中，室温搅拌10-40min，随后缓慢滴加20mm的vc溶液4ml，室温条件下避光搅拌1-3h，反应液由无色变为砖红色，再将反应液转移至4℃下反应12-36h，10000-12000rpm离心10-40min，收集沉淀，即得活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统。
8、本专利技术方法制备的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统具有抗动脉粥样硬化的活性，有效实现在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用。
9、本专利技术制备方法简单，原料丰富本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，以抗炎药物白藜芦醇作为模型药物，利用具有剪切力敏感性的β-环糊精的疏水空腔负载Res，并将β-CD通过ROS敏感键TK与岩藻多糖连接，最后通过Se-O键修饰于SeNPs表面，构建具有可靶向动脉粥样硬化斑块、ROS-剪切力双响应的纳米药物递送系统，以改善AS病变部位的炎症和高胆固醇微环境，显著延缓AS进程，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.根据权利要求1所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，所述的纳米载药系统粒径为80-120nm。
6.权利要求1-5任一项所述方法制备的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统在制备抗动脉粥样硬
7.根据权利要求6所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统在制备抗动脉粥样硬化药物中的应用，其特征在于，所述的药物为注射剂或冻干粉针。
...【技术特征摘要】
1.一种活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，以抗炎药物白藜芦醇作为模型药物，利用具有剪切力敏感性的β-环糊精的疏水空腔负载res，并将β-cd通过ros敏感键tk与岩藻多糖连接，最后通过se-o键修饰于senps表面，构建具有可靶向动脉粥样硬化斑块、ros-剪切力双响应的纳米药物递送系统，以改善as病变部位的炎症和高胆固醇微环境，显著延缓as进程，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药系统的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述的活性氧-剪切力双触发定点切割纳米载药...
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