【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，涉及anks1b抑制剂在改善睡眠障碍疾病中的用途。
技术介绍
1、稳定的觉醒-睡眠节律、高效的睡眠质量是生物体维持生命、获取能量的必然需求。睡眠障碍是下丘脑系统紊乱等导致的中枢疾病，睡眠障碍也与诸多疾病的发生发展关系密切，阿尔兹海默病患者在认知能力下降开始之前表现出睡眠和昼夜节律紊乱，并且这种紊乱会伴随疾病严重程度的加重而恶化。然而，目前临床治疗睡眠障碍的药物主要为经典苯二氮卓类如阿普唑仑、非苯二氮卓类以及辅助药物褪黑素等，但以上药物在使用过程中均表现出不同程度的副作用如记忆减退、嗜睡等，这些不良反应发生大多因为药物选择性较差，多靶点发挥作用。因此，靶向生物标志物的发现是早期预防和治疗睡眠障碍的重要一步，以避免睡眠障碍引起的其他系统功能障碍。
2、非编码rna(ncrna)是一种不翻译成蛋白质的功能性rna分子，其中微小rna(mirna)是微调蛋白质表达水平的短小非编码rna，并且目前基于mirna治疗疾病的研究也在逐步兴起。已有研究通过转录组学分析发现慢性睡眠障碍患者血浆中mir-30c-5p显著升高，可以作为预测或治疗慢性睡眠障碍的生物标志物。也有研究发现mir-137、mir-637和mir-654-5p等通过靶向抑制下丘脑分泌素，大大提高生物觉醒时间从而参与睡眠-觉醒调节。
3、我们的研究结果提出了一个问题，即在某些情况下，anks1b和mir-486b-5p的失调可能是睡眠紊乱的基础。因此，这里报道的anks1b和mir-486b-5p和睡眠调节之间的相互作用可能在
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于，通过分析mir-486b-5p与anks1b的靶向关系并通过双荧光素酶实验验证，提供anks1b抑制剂在制备预防或治疗睡眠障碍药物中的应用。
2、本专利技术采用的技术方案如下：
3、第一方面，本专利技术提供一种anks1b抑制剂在制备预防或治疗睡眠障碍药物中的应用。
4、术语“抑制剂”是指任何可以减少anks1b蛋白活性、降低anks1b基因或蛋白的稳定性、下调anks1b蛋白的表达、减少anks1b蛋白有效作用时间或抑制anks1b基因的转录及翻译的物质，这些物质均可用于本专利技术，作为有效下调anks1b的物质，从而可被用于预防或治疗睡眠障碍。
5、优选地，所述anks1b抑制剂包括减少anks1b蛋白活性、降低anks1b基因或蛋白的稳定性、下调anks1b蛋白的表达、减少anks1b蛋白有效作用时间或抑制anks1b基因的转录及翻译的物质。
6、所述抑制剂类型包括但不限于核酸抑制剂、蛋白抑制剂以及影响蛋白水平的蛋白水解酶、蛋白结合分子。
7、进一步地，所述核酸抑制剂选自：以anks1b或其转录本为靶向序列、且能够抑制anks1b基因表达或基因转录的干扰分子，包括shrna(小发夹rna)、小干扰rna(sirna)、dsrna、微小rna(mirna)、反义核酸，以及能够表达或形成所述shrna、sirna、dsrna、mirna、反义核酸的构建物。
8、进一步地，所述的anks1b抑制剂是mirna或促进mirna表达的试剂。所述的mirna是指一种短片段、非编码单链rna分子，能够通过部分互补结合到目的mrna靶的3’非编码区(3’utrs)，诱发蛋白质翻译抑制，进而抑制蛋白质合成。
9、进一步地，所述mirna为mir-486b-5p，促进mirna表达的试剂为促进mir-486b-5p表达的试剂。
10、本专利技术的促进mir-486b-5p表达的试剂不受限制，只要是能够促进或增强mir-486b-5p或涉及mir-486b-5p上、下游途径的物质的活性或表达，达到有效防治睡眠障碍的效果。
11、本专利技术促进mir-486b-5p表达的试剂可以用于补充内源性mir-486b-5p的缺失或不足，从而有效防治睡眠障碍。
12、进一步地，所述促进mir-486b-5p表达的试剂是mir-486b-5pmimic和mir-486b-5pagomir；
13、mir-486b-5p mimic的序列为seq no.1:
14、uccuguacugagcugccccgagaggacaugacucgacgg ggcuc；
15、mir-486b-5p agomir序列也为seq no.1，但经化学基团修饰；
16、所述mir-486b-5p包括mir-486b-5p前体和成熟mir-486b-5p；本专利技术的mir-486b-5p为天然或人工合成，或使用可以表达mir-486b-5p的dna片段的载体转染细胞获得；所述载体包括病毒载体、真核载体。
17、病毒载体可以是任何适当的载体，包括但不限于逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺病毒相关病毒载体、疱疹病毒(包括单纯疱疹病毒、痘苗病毒及eb病毒)载体、甲病毒载体。
18、真核表达载体可以是任何适当的表达载体，包括但不限于pcmv-myc表达载体、pcdna3.0表达载体、pcdna3.1表达载体、pegfp表达载体、pef bos表达载体、ptet表达载体、ptre表达载体、或者在公知表达载体的基础上经改造的载体，比如pbin438、pcambia1301等。
19、进一步地，所述可以表达mir-486b-5p的dna片段通过如下方式获取：从mirna数据库(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences/)寻找mir-486b-5p在基因组上的位置及具体序列信息，根据基因组序列确定mir-486b-5p初始mirna的位置，在mir-486b-5p初始mirna位置的上下游500-800bp区间内设计特异性引物，扩增引物中间的序列即可获得表达mir-486b-5p的dna片段。
20、本专利技术的有益技术效果是：通过mir-486b-5p–anks1b调控轴调节下丘脑组织中递质水平，从而影响觉醒-睡眠结构变化。因此，mir-486b-5p–anks1b调控轴有望作为作用靶点，开发活性成分，用于制备改善睡眠障碍药物，具有明显的临床应用价值。
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1.Anks1b抑制剂在制备预防或治疗睡眠障碍药物中的应用。
2.一种权利要求1所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述Anks1b抑制剂包括减少Anks1b蛋白活性、降低Anks1b基因或蛋白的稳定性、下调Anks1b蛋白的表达、减少Anks1b蛋白有效作用时间或抑制Anks1b基因的转录及翻译的物质。
3.根据权利要求2所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述Anks1b抑制剂包括核酸抑制剂、蛋白抑制剂和影响蛋白水平的蛋白水解酶、蛋白结合分子，以及直接通过上、下游途径的物质的活性或表达促进核酸抑制剂、蛋白抑制剂和影响蛋白水平的蛋白水解酶、蛋白结合分子的物质。
4.根据权利要求3所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述核酸抑制剂包括shRNA、siRNA、dsRNA、miRNA、反义核酸，以及能够表达或形成所述shRNA、siRNA、dsRNA、miRNA、反义核酸的构建物。
5.根据权利要求4所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述miRNA为miR-486b-5p。
6.根据权利要求3所述的Anks1b抑制
7.根据权利要求6所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述促进miR-486b-5p表达的试剂为miR-486b-5p mimic和miR-486b-5pagomir；
8.根据权利要求5所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述miR-486b-5p为天然或人工合成，或使用可以表达miR-486b-5p的DNA片段的载体转染细胞获得。
9.根据权利要求8所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述载体包括病毒载体、真核载体。
10.根据权利要求8所述的Anks1b抑制剂，其特征在于，所述表达miR-486b-5p的DNA片段通过如下方式获取：从miRNA数据确定miR-486b-5p在基因组上的位置及具体序列信息，根据基因组序列确定miR-486b-5p初始miRNA的位置，在miR-486b-5p初始miRNA位置的上下游500-800bp区间内设计特异性引物，扩增引物中间的序列获得表达miR-486b-5p的DNA片段。
...【技术特征摘要】
1.anks1b抑制剂在制备预防或治疗睡眠障碍药物中的应用。
2.一种权利要求1所述的anks1b抑制剂，其特征在于，所述anks1b抑制剂包括减少anks1b蛋白活性、降低anks1b基因或蛋白的稳定性、下调anks1b蛋白的表达、减少anks1b蛋白有效作用时间或抑制anks1b基因的转录及翻译的物质。
3.根据权利要求2所述的anks1b抑制剂，其特征在于，所述anks1b抑制剂包括核酸抑制剂、蛋白抑制剂和影响蛋白水平的蛋白水解酶、蛋白结合分子，以及直接通过上、下游途径的物质的活性或表达促进核酸抑制剂、蛋白抑制剂和影响蛋白水平的蛋白水解酶、蛋白结合分子的物质。
4.根据权利要求3所述的anks1b抑制剂，其特征在于，所述核酸抑制剂包括shrna、sirna、dsrna、mirna、反义核酸，以及能够表达或形成所述shrna、sirna、dsrna、mirna、反义核酸的构建物。
5.根据权利要求4所述的anks1b抑制剂，其特征在于，所述mirna为mir-486b-5p。
6.根据权利要求3所述的an...
【专利技术属性】
技术研发人员：李丽琴，朱思庆，石童，石晶晶，陈学军，张瑞华，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事科学院防化研究院，
类型：发明
国别省市：
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