【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于工业微生物，涉及药品原料的纯化制备方法，具体来说涉及一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，
技术介绍
1、达托霉素(daptomycin)是由lilly(礼来)公司最初研究，cubist制药公司开发的一环脂肽类抗生素；是从小链霉菌(streptomyces parvus)发酵液当中提取得到的十三个氨基酸组成的结构新颖的环脂肽类生物制品，其中十个氨基酸构成环状结构，另有三个氨基酸排列成线状，连接了环外癸酸和色氨酸发生酯化的抗生素；其主要作用于耐药菌，如万古霉素的肠球菌(vre)、对糖肽抗生素中等敏感的金黄色葡萄球菌(gisa)、耐甲氧西林的金葡菌(mrsa)、耐青霉素的肺炎链球菌(prsp)及凝固酶阳性金黄色葡萄球菌(cns)等，均呈现良好活性。其化学式：c2h1on1-o26，分子量：1620.67,结构式为：
2、
3、达托霉素的结构复杂，特别的化学结构决定其稳定性较差，直接化学全合成较困难，现阶段达托霉素都为发酵产物；达托霉素发酵过程中会产生大量的色素、杂质等副产物，发酵液在提取过程中也容易衍变成达托霉素杂质，这就造成后续提取工作较为复杂；现有简单提取工艺难以获得高纯度的最终产物，而复杂苛刻的提取工艺无法大规模的产业化生产。
4、对达托霉素后序的提取纯化方法已经有不少文献报导，已知工艺有：发酵液经陶瓷膜过滤或静态吸附或溶媒萃取、大孔树脂梯度吸附解析、离子交换树脂梯度吸附解析、纳滤浓缩等工艺，上述现有工艺步骤难以制备得到高纯度的达托霉素产品；再经过反相高压制备才能得到大于98％高纯
5、申请号为200910058577.7的专利文献所介绍达托霉素提取方法，仅采用大孔树脂分离纯化达托霉素，得到达托霉素色谱纯度仅为80％-90％,远不能达到质量要求；申请号01805212.6和申请号200810087401.x以及美国专利us6696412b1等公开了达托霉素的纯化方法，利用离子树脂和反相树脂反复纯化，得到纯度为98％的达托霉素；在该方法中使用了两种非常昂贵的树脂，制备条件也非常苛刻，提取最终的收率也不高，此工艺较难进行工业化大规模生产。
6、文献资料《达从发酵液中提取达托霉素的工艺优化》(化学与生物工程013,vol.30no.7)中介绍了达托霉素用丙酮结晶的方法，但结晶纯度只有85％左右，收率80％左右；公开号为cn 108250270 a中介绍用单溶剂甲醇、乙醇、丙酮、丙酮中一种来结晶，不能得到高纯度产品，还需要进行树脂纯化提纯，再进行反复结晶才能得到合格产品，过程较为复杂；公开号cn201910309089.2中介绍制备高纯度达托霉素方法为通过多次大孔树脂层析+乙醇溶剂结晶工艺，此工艺步骤较繁琐，纯化提取周期长，制备总收率低，很难进行工业化放大推广；公开号cn 105481950 b中介绍制备高纯度达托霉素方法核心为达托霉素层析液过反相硅胶nmsil-c18柱，再用丙酮溶剂进行结晶制备得到高纯度产物，此工艺不能直接进行结晶纯化而采用反相柱进行纯化后再结晶，条件较为苛刻，且收率较低。
7、因此寻找能得到高质量、低成本、高效率的提取达托霉素纯化方法产就显得尤为重要，才有可能实现达托霉素的工业化大规模生产。
技术实现思路
1、针对上述
技术介绍
中存在的问题，本专利技术设计的目的在于提供一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，该制备方法制得的的产品纯度高、制备低成本、制备周期短及收率高。
2、具体通过以下技术方案加以实现：
3、一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，该方法包括以下步骤：
4、1)往达托霉素发酵液中加入絮凝剂絮凝后再加入助滤剂进行固液分离，取过滤液；
5、2)将过滤液过大孔树脂进行吸附、除色素杂质及解析，解析液浓缩制得解析浓缩液；
6、3)将解析浓缩液过离子交换树脂吸附、除杂、解析，收取纯度大于85％的解析液，纳滤浓缩到效价50000mg/l以上得到中间体达托霉素；
7、4)往中间体达托霉素浓缩后的浓缩液中加入占达托霉素质量20-50％的乙酸钙，再依次滴加极性溶剂和反极性溶剂，所述极性溶剂的体积是浓缩液体积的1-5倍，反极性溶剂的体积是浓缩液体积的1-8倍，滴加完毕后控温-5℃-30℃，搅拌0.5-5小时析晶抽滤干燥得达托霉素结晶固体。
8、进一步地，步骤1)中，絮凝剂选用聚丙烯型絮凝剂，助滤剂选用珍珠岩。
9、进一步地，步骤2)中，选用浓度为10％的乙醇液进行洗脱除色素杂质，采用30％的乙醇液进行解析。
10、进一步地，步骤3)中，离子交换树脂选用uniq50-xs、nm-q、lx q-650中的任一种，除杂采用100mmol/l nacl洗脱液进行洗脱除杂，解析采用180mmol/l nacl进行。
11、进一步地，步骤4)中，纳滤浓缩到效价80000-100000mg/l，乙酸钙的添加量占结晶前浓缩液达托霉素质量的35％。
12、进一步地，步骤4)中，极性溶剂选用n，n-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、甲醇中的任一种，优选四氢呋喃；反极性溶剂选用丙酮、异丙醇、乙腈、乙醇的任一种，优选丙酮。
13、进一步地，步骤4)中，极性溶剂的体积是浓缩液体积的1.5倍，反极性溶剂的体积是浓缩液体积的2.25倍。
14、进一步地，步骤4)中，控温在20℃-30℃，搅拌时间为1小时。
15、本专利技术制备方法简便，纯化结晶工艺纯度高、收率高、周期用时短，可操作性强；所采用的树脂均为普通树脂，所选用的溶剂用量少，无毒性；生产运行成本较低，其所得到的产品纯度较高，收率稳定；具有很好的医用工业化放大应用前景。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤1）中，絮凝剂选用聚丙烯型絮凝剂，助滤剂选用珍珠岩。
3.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤2）中，选用浓度为10%的乙醇液进行洗脱除色素杂质，采用30%的乙醇液进行解析。
4.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤3）中，离子交换树脂选用UniQ50-XS、NM-Q、LX Q-650中的任一种，除杂采用100mmol/L NaCl洗脱液进行洗脱除杂，解析采用180mmol/L NaCl进行。
5.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤4）中，纳滤浓缩到效价80000-100000mg/L，乙酸钙的添加量占结晶前浓缩液达托霉素质量的35%。
6.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤4）中，极性溶剂选用N，N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、甲醇中的任一种，优选四氢呋喃；反极
7.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤4）中，极性溶剂的体积是浓缩液体积的1.5倍，反极性溶剂的体积是浓缩液体积的2.25倍。
8.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤4）中，控温在20℃-30℃，搅拌时间为1小时。
...【技术特征摘要】
1.一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
2.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤1）中，絮凝剂选用聚丙烯型絮凝剂，助滤剂选用珍珠岩。
3.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤2）中，选用浓度为10%的乙醇液进行洗脱除色素杂质，采用30%的乙醇液进行解析。
4.如权利要求1所述的一种高纯度达托霉素结晶的制备方法，其特征在于步骤3）中，离子交换树脂选用uniq50-xs、nm-q、lx q-650中的任一种，除杂采用100mmol/l nacl洗脱液进行洗脱除杂，解析采用180mmol/l nacl进行。
5.如权利要求1所述的一种高...
【专利技术属性】
技术研发人员：肖剑，王子宝，徐亚强，何志勇，肖楠，
申请(专利权)人：杭州中美华东制药江东有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。