【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及微生物，尤其涉及一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基及其应用。
技术介绍
1、嗜粘蛋白阿克曼氏菌（ akkermansia muciniphila，简称akk菌）2004年从健康成人的粪便样本中被分离出来，是疣微菌门第一个种。akk菌是一种典型的肠道菌，是肠道黏液层的关键微生物，不少的研究学者们已经给出了akk菌在体重管理、疾病预防等方面发挥着重要作用的证据，被称为下一代益生菌新星。pendulum therapeutics公司在2020年6月，推出了首款含有akk菌的食品——pendulum glucose control （pgc），该产品经过临床试验证明了其安全性，打破了akk菌“零应用”的瓶颈。2021年欧盟食品安全局评估经巴氏灭菌的akk菌作为新型食品的安全性，在获得欧盟批准的背景下，目前多个生物制药公司和科研机构在akk菌研究上投入巨大。作为极具关注的下一代益生菌，akk菌具有广阔的发展前景。
2、近年来研究发现，akk菌可在添加有碳酸氢盐缓冲液、脑心浸液肉汤（bhi）（含有0.2%粘蛋白）、pyg肉汤、硫乙醇酸盐的培养基中生长。吴中琴等人的研究表明，akk菌在bhi肉汤（含有0.2%粘蛋白）中经过24 h可到达生长稳定期，od600为0.5-0.6。吴晓玲等人的研究表明，akk菌在硫乙醇酸盐优化培养基中培养44 h后趋于稳定，od600最高为0.76。
3、目前，akk菌常用bhi培养基添加粘蛋白进行培养，而bhi培养基中含有牛心浸粉
4、综上所述，如何快速高效且低成本培养akk菌，为其工业化生产提供切实可行的方法，已成为目前本领域亟待解决的问题。
技术实现思路
1、为解决上述技术问题，本专利技术提供了一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基及其应用。通过将培养基中的粘蛋白替换为透明质酸，降低了培养基成本，缩短了培养周期，同时增加了生物量，为嗜粘蛋白阿克曼氏菌的产业化开发提供了新的方案。
2、为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、第一方面，本专利技术提供了一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基包括透明质酸、糖类物质、酵母提取物、牛肉提取物、蛋白胨和无机盐，所述糖类物质包括葡萄糖、乳糖和蔗糖中的任意一种或至少两种的组合。
4、本申请中提供的培养基适用于所有akk菌的培养，不局限于某一菌株。
5、akk菌对粘蛋白依赖，粘蛋白可显著地促进akk菌的生长，而粘蛋白的价格、原料源等问题限制了在产业化上的应用。本专利技术通过将透明质酸替换粘蛋白，大大降低了原料成本，同时添加乳糖，乳糖与透明质酸协同提升了akk菌的生长速度和生物量。改良的培养基在成本上与普通益生菌的成本相近并且无动物源原料，培养方案更具合规性，具有广阔的应用前景。
6、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基包括透明质酸、乳糖、酵母浸粉、牛肉浸粉、蛋白胨、磷酸氢二钾、柠檬酸钠、硫酸镁和硫酸锰。
7、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述透明质酸的浓度为4-8 g/l（例如4 g/l、5 g/l、6 g/l、7 g/l或8 g/l等），所述糖类物质的浓度为20-24 g/l（例如20g/l、21 g/l、22 g/l、23 g/l或24 g/l等）。
8、优选地，所述酵母提取物包括酵母浸粉和/或酵母浸膏，所述牛肉提取物包括牛肉浸粉和/或牛肉浸膏，所述蛋白胨包括大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母蛋白胨。
9、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述酵母提取物的浓度为15-25g/l（例如15 g/l、17 g/l、20 g/l、22 g/l或25 g/l等），所述牛肉提取物的浓度为8-16 g/l（例如8 g/l、10 g/l、12 g/l、14 g/l或16 g/l等），所述蛋白胨的浓度为5-15 g/l（例如5g/l、8 g/l、10 g/l、12 g/l或15 g/l等）。
10、优选地，所述无机盐包括磷酸氢二钾、柠檬酸钠、硫酸镁、硫酸锰中的任意一种或至少两种的组合。
11、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括吐温，所述吐温包括吐温20和/或吐温80。
12、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述无机盐的浓度为2-8 g/l（例如2 g/l、3 g/l、4 g/l、5 g/l、6 g/l、7 g/l或8 g/l等），所述吐温的浓度为0.5-1.5 g/l（例如0.5 g/l、0.75 g/l、1 g/l、1.25 g/l或1.5 g/l等）。
13、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述磷酸氢二钾的浓度为1-3 g/l（例如1 g/l、1.5 g/l、2 g/l、2.5 g/l或3 g/l等），所述柠檬酸钠的浓度为1-3 g/l（例如1g/l、1.5 g/l、2 g/l、2.5 g/l或3 g/l等），所述硫酸镁的浓度为0.2-0.6 g/l（例如0.2 g/l、0.3 g/l、0.4 g/l、0.45 g/l、0.5 g/l或0.6 g/l等），所述硫酸锰的浓度为0.05-0.25 g/l（例如0.05 g/l、0.1 g/l、0.15 g/l、0.2 g/l、0.25 g/l等）。
14、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括氨基酸和氨基酸衍生物。
15、优选地，所述氨基酸包括色氨酸、丝氨酸、苏氨酸和苯丙氨酸中的任意一种或至少两种的组合，所述氨基酸衍生物包括l-半胱氨酸盐酸盐和/或n-乙酰-d-丙氨酸。
16、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括l-半胱氨酸盐酸盐、色氨酸和丝氨酸。
17、本专利技术通过添加l-半胱氨酸盐酸盐、色氨酸和丝氨酸，协同提升akk菌的生物量并缩短生长周期。
18、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述氨基酸的浓度为1-5 g/l（例如1 g/l、2 g/l、3 g/l、4 g/l或5 g/l等）。
19、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述l-半胱氨酸盐酸盐的浓度为0.5-1 g/l（例如0.5 g/l、0.6 g/l、0.7 g/l、0.8 g/l、0.9 g/l或1 g/l等），所述色氨酸的浓度为0.5-1 g/l（例如0.5 g/l、0.6 g/l、0.7 g/l、0.8 g/l、0.9 g/l或1 g/l等），所述丝氨酸的浓度为0.5-1 g/l（例如0.5 g/l、0.6 g/l、0.7 g/l、0.8 g/l、0.9 g/l或1 g/l等）。
20、优选地，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括复合维生素。
21、优本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基包括透明质酸、糖类物质、酵母提取物、牛肉提取物、蛋白胨和无机盐，所述糖类物质包括葡萄糖、乳糖和蔗糖中的任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述透明质酸的浓度为4-8 g/L，所述糖类物质的浓度为20-24 g/L。
3.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述酵母提取物包括酵母浸粉和/或酵母浸膏，所述牛肉提取物包括牛肉浸粉和/或牛肉浸膏，所述蛋白胨包括大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母蛋白胨；
4.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述无机盐包括磷酸氢二钾、柠檬酸钠、硫酸镁、硫酸锰中的任意一种或至少两种的组合；
5.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括氨基酸和氨基酸衍生物；
6.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克
7.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基组成为：4-8 g/L透明质酸、20-24 g/L乳糖、15-25 g/L酵母浸粉、8-16g/L牛肉浸粉、5-15 g/L蛋白胨、1-3 g/L磷酸氢二钾、1-3 g/L柠檬酸钠、0.2-0.6 g/L硫酸镁、0.05-0.25 g/L硫酸锰、0.5-1.5 g/L吐温、0.5-1 g/L L-半胱氨酸盐酸盐、0.5-1 g/L色氨酸、0.5-1 g/L丝氨酸、0.01-0.03 g/L生物素、0.1-0.3 g/L烟酸、0.3-0.7 g/L吡哆醇、0.05-0.15 g/L核黄素、0.1-0.3 g/L硫胺素、0.05-0.15 g/L对氨基苯甲酸和0.05-0.15 g/L泛酸。
8.如权利要求1-7任一项所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基在培养嗜粘蛋白阿克曼氏菌中的应用。
9.一种培养嗜粘蛋白阿克曼氏菌的方法，其特征在于，所述培养嗜粘蛋白阿克曼氏菌的方法包括：将嗜粘蛋白阿克曼氏菌接种在权利要求1-7任一项所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，进行发酵，得到发酵液。
10.根据权利要求9所述的培养嗜粘蛋白阿克曼氏菌的方法，其特征在于，所述发酵的温度为33-41℃，所述发酵的pH为5-7；
...【技术特征摘要】
1.一种嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基包括透明质酸、糖类物质、酵母提取物、牛肉提取物、蛋白胨和无机盐，所述糖类物质包括葡萄糖、乳糖和蔗糖中的任意一种或至少两种的组合。
2.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中，所述透明质酸的浓度为4-8 g/l，所述糖类物质的浓度为20-24 g/l。
3.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述酵母提取物包括酵母浸粉和/或酵母浸膏，所述牛肉提取物包括牛肉浸粉和/或牛肉浸膏，所述蛋白胨包括大豆蛋白胨、胰蛋白胨、酵母蛋白胨；
4.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述无机盐包括磷酸氢二钾、柠檬酸钠、硫酸镁、硫酸锰中的任意一种或至少两种的组合；
5.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括氨基酸和氨基酸衍生物；
6.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基，其特征在于，所述嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养基中还包括复合维生素；
7.根据权利要求1所述的嗜粘蛋白阿克曼氏菌的培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：方曙光，程文，卢韩杨，许灿海，张启凤，王一川，
申请(专利权)人：微康益生菌苏州股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。