【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及药物检测领域，具体地涉及用于测定全血中他克莫司浓度的方法。
技术介绍
1、他克莫司(tacrolimus)，是一种大环内酯类抗生素，为一种强力的新型免疫抑制剂，临床广泛用于肝、肾等器官移植和自身免疫系统疾病的免疫抑制药。目前他克莫司成药时有不同的剂型，如他克莫司软膏、他克莫司缓释胶囊、他克莫司胶囊、他克莫司颗粒、他克莫司注射液、他克莫司滴眼液等。依据剂型不同，应用于人体时，其吸收方式和吸收程度不同，高灵敏度检测他克莫司将有利于对吸收程度低的药物的临床药代动力学评估。
2、中国专利申请cn 110849694 a公开一种他克莫司全血样本前处理液及其使用方法和应用。与现有技术相比，其优点在于：操作简单，将全血样品血浆破碎后，采用乙腈蛋白沉淀，稀释后直接分析，操作步骤简单；检测灵敏度高，选择性好，检测的定量下限为30pg/ml，可以应用于较小规格如1mg装的他克莫司胶囊或其他给药途径等临床一致性评价中血药浓度分析；检测的样本为全血样本，相对于血浆样品，提取较困难，本专利技术全血样品的提取回收率达到95％以上，提取效率高，能更好的反映受试者药物临床吸收状况。
3、中国专利申请cn 115032302 a公开了一种基于液相色谱串联质谱的血液药物浓度检测方法，其包括：获取含待检药物的测血液样本；分别对液相色谱和质谱进行液相色谱串联质谱参数的设置及优化；将所述全血样品处理后的溶液进样至液相色谱仪串联质谱仪中，随流动相流动并进行检测分析，获得血液样本中的药物浓度曲线；采用标准曲线法，根据血液样本中的药物峰面
4、目前的方法均为针对所有人群的通用方法，然而，实际上不同人群的情况不同，经调研没有发现不同人群血液组成对于他克莫司检测的影响。
5、
技术介绍
中的信息仅仅在于说明本专利技术的总体背景，不应视为承认或以任何形式暗示这些信息构成本领域一般技术人员所公知的现有技术。
技术实现思路
1、为解决现有技术中的至少部分技术问题，本专利技术提供一种用于测定全血中他克莫司浓度的方法。具体地，本专利技术包括以下内容。
2、本专利技术提供一种用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其包括以下步骤：
3、(1)全血样品前处理，其包括向全血样品加入裂解液混合，然后加入沉淀剂进一步混合后离心，取上清液加入稀释剂作为待测样品，其中所述沉淀剂包含能够溶解他克莫司的第一水溶性有机溶剂，所述释释剂包含第二水溶性有机溶剂；
4、(2)将待测样品施加到色谱柱，并通过流动相进行洗脱；和
5、(3)检测作为待分析物的他克莫司。
6、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述裂解液为硫酸锌水溶液。
7、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述沉淀剂进一步包含非离子型表面活性剂。
8、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述流动相包括：流动相a：含0.1-6mm甲酸铵的水溶液；流动相b：醇。
9、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述洗脱条件如下：
10、
11、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述色谱柱为ace 5c18，洗脱时色谱柱温度为52-58℃。
12、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述检测的条件包括：
13、
14、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，所述全血为高脂全血。
15、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中，进一步包括向待测样品加入他克莫司同位素内标工作液的步骤。
16、在某些实施方案中，根据本专利技术所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其中进一步包括制作标准曲线的步骤。
17、在本专利技术实施例中，通过液质联用仪对含有不同浓度的他克莫司的标准溶液进行检测，得到每种浓度的标准溶液对应的检测结果，由于标准溶液中含有内标物，因此，基于各种浓度标准溶液中的他克莫司的浓度、内标物的浓度和多个检测结果拟合得到他克莫司的标准曲线方程。通过向待处理样品内顺次加入内标物和沉淀蛋白试剂，进行涡旋混匀并离心，即可得到能够检测的待测样品。利用液质联用仪在与标准溶液相同的检测条件下进行检测，得到待测样品的检测结果，基于标准曲线方程和检测结果即可得到待测样品中他克莫司的含量。
18、本专利技术的方法各指标均符合2020版中国药典9012生物样品定量分析方法和m10法规要求。本专利技术方法的线性范围为30.0-15000pg/ml。与现有技术相比，本专利技术方法的选择性、基质效应、回收率、残留、标准曲线、批内、批间准确度和精密度、定量下限和灵敏度、稀释可靠性、基质中分析物的短期和长期稳定性、溶液中分析物的短期和长期稳定性、重新进样的重现性、处理后样品在自动进样器中的稳定性、高脂效应均满足要求，具有更低的灵敏度，可满足更小规格或新剂型的他克莫司药物的分析，特别适用于高脂血的检测。
19、他克莫司药物临床等效性试验需要评估服用高脂餐后受试者对他克莫司药物的吸收情况。高脂效应表明本专利技术的方法在测定餐后，即服用高脂餐后受试者对他克莫司吸收浓度的准确性。示例性方法中在特定梯度洗脱条件下，他克莫司出峰时间在1.2min左右，与1.0min处干扰物质可以很好地分离，其高脂效应干扰在5.0％范围内，基质效应(一)中的高脂效应也同时满足接受标准，表明该分析方法有良好的适用性。
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1.一种用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述裂解液为硫酸锌水溶液。
3.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述沉淀剂进一步包含非离子型表面活性剂。
4.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述流动相包括：流动相A：含0.1-6mM甲酸铵的水溶液；流动相B：醇。
5.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述洗脱条件如下：
6.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述色谱柱为ACE 5C18，洗脱时色谱柱温度为52-58℃。
7.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述检测时的模式为多反应监测，离子化模式为正离子模式，数据采集时间为3.5分钟。
8.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述全血为高脂全血。
9.根
10.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，进一步包括制作标准曲线的步骤。
...【技术特征摘要】
1.一种用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述裂解液为硫酸锌水溶液。
3.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述沉淀剂进一步包含非离子型表面活性剂。
4.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述流动相包括：流动相a：含0.1-6mm甲酸铵的水溶液；流动相b：醇。
5.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克莫司浓度的方法，其特征在于，所述洗脱条件如下：
6.根据权利要求1所述的用于测定全血中他克...
【专利技术属性】
技术研发人员：汤丽玲，金敏，鲁银松，童垚，赵莹莹，王元，张静姝，
申请(专利权)人：杭州颐源医药技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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