【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，具体涉及一种dna聚合酶的制备方法。
技术介绍
1、dna聚合酶在细胞中的功能是作为负责dna合成的酶。在体内，dna聚合酶参与一系列dna合成过程，包括dna复制、dna修复、重组和基因扩增。在体外，dna聚合酶在有金属活化剂存在的情况下，以被复制的dna模板或多核苷酸模板支配的顺序聚合脱氧核糖核苷三磷酸。
2、在聚合酶链式反应(pcr)中，dna聚合酶是不可缺少的组分，被广泛应用于分子诊断、大规模平行测序等检测应用中。dna聚合酶的性能会直接影响扩增效率、灵敏度、保真性等。由于聚合酶链式反应方便、快捷、准确地大规模复制目的基因片段的能力，在生命科学研究与相关领域，如医学检测、感染性疾病检测、法医学检测等，成为了无法取代的技术手段。但是，目前商业化的dna聚合酶仍然存在延伸效率差，污染物或抑制剂耐受能力差等问题，且dna聚合酶的保存和运输仍需要在-20℃条件下进行，不仅使得其成本较高、操作和运输不便，并且酶的活性有不同程度的下降。因此，有必要研发一种在保存和运输过程中dna聚合酶的活性不会下降的制备方法。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种dna聚合酶的制备方法，以解决dna聚合酶在保存和运输过程中活性会下降的问题。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
3、一种dna聚合酶的制备方法，包括以下步骤：
4、步骤1、将dna聚合酶基因序列插入到表达载体中，构建表达载体；再将构建好的表达载体转化
5、步骤2、将改性碳纳米管加入去离子水中混合，加入海藻酸钠，加热搅拌，湿热灭菌，冷却，加入上述dna聚合酶和磷酸盐缓冲溶液进行混合，真空抽干，冷冻干燥，得到dna聚合酶；
6、所述改性碳纳米管通过如下步骤制备：
7、将壳聚糖加入氯化钠溶液中搅拌，得到预混液；将碳纳米管加入去离子水中，超声分散，加入1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺，搅拌，加入上述预混液中搅拌，离心洗涤，真空干燥得到改性碳纳米管。
8、作为本专利技术的一种优选方案，壳聚糖和氯化钠溶液的用量比为0.03-0.06g：10ml；碳纳米管、去离子水、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺用量比为0.5g：15ml：0.06g：0.09g。
9、作为本专利技术的一种优选方案，改性碳纳米管、去离子水、海藻酸钠、dna聚合酶和磷酸二氢钠溶液的用量重量份比为0.4～0.6：15～24：0.2～0.3：0.8～1.2：20。
10、作为本专利技术的一种优选方案，步骤1中所述分离纯化是离子交换纯化和镍柱纯化。
11、作为本专利技术的一种优选方案，步骤2中湿热灭菌的温度为120-125℃。
12、作为本专利技术的一种优选方案，步骤2中冷冻干燥的温度为-35～-25℃，压力为55～65pa。
13、作为本专利技术的一种优选方案，磷酸盐缓冲溶液通过以下步骤制备：
14、将无水磷酸二氢钠和无水磷酸氢二钠溶于去离子水中，调节ph＝7.2～7.5，得到磷酸盐缓冲溶液。
15、作为本专利技术的一种优选方案，无水磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠和去离子水的用量比为0.1g：0.2g：100ml。
16、本专利技术的有益效果：
17、本专利技术首先将碳纳米管进行修饰，一方面提高其反应分散性及界面性能，另一方面能与海藻酸钠分子链中coo-发生反应生成酰胺键，形成了交联网络，同时有机和无机相结合，增强了交联网络的力学性能和热学性能，再与dna聚合酶进行共混，使dna聚合酶被牢固地固定于交联网络上，从而延长了保存时间并提高了热稳定性，本专利技术所制备的dna聚合酶活力保留率高且具有优良热稳性能，减轻了在保存与运输过程中活力下降的程度，进而提高了pcr反应效率，降低了产品的成本。
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1.一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，壳聚糖和氯化钠溶液的用量比为0.03-0.06g：10mL；碳纳米管、去离子水、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和N-羟基琥珀酰亚胺用量比为0.5g：15mL：0.06g：0.09g。
3.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，改性碳纳米管、去离子水、海藻酸钠、DNA聚合酶和磷酸二氢钠溶液的用量重量份比为0.4～0.6：15～24：0.2～0.3：0.8～1.2：20。
4.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，步骤1中所述分离纯化是离子交换纯化和镍柱纯化。
5.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，步骤2中湿热灭菌的温度为120-125℃。
6.根据权利要求1所述的一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，步骤2中冷冻干燥的温度为-35～-25℃，压力为55～65Pa。
7.根据权利要求1所述的一种DNA
8.根据权利要求7所述的一种DNA聚合酶的制备方法，其特征在于，无水磷酸二氢钠、无水磷酸氢二钠和去离子水的用量比为0.1g：0.2g：100mL。
...【技术特征摘要】
1.一种dna聚合酶的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种dna聚合酶的制备方法，其特征在于，壳聚糖和氯化钠溶液的用量比为0.03-0.06g：10ml；碳纳米管、去离子水、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐和n-羟基琥珀酰亚胺用量比为0.5g：15ml：0.06g：0.09g。
3.根据权利要求1所述的一种dna聚合酶的制备方法，其特征在于，改性碳纳米管、去离子水、海藻酸钠、dna聚合酶和磷酸二氢钠溶液的用量重量份比为0.4～0.6：15～24：0.2～0.3：0.8～1.2：20。
4.根据权利要求1所述的一种dna...
【专利技术属性】
技术研发人员：李森，孙伟，黄策，李娇，
申请(专利权)人：通用生物南京有限公司，
类型：发明
国别省市：
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