【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物，具体涉及一株高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009及其应用。
技术介绍
1、弧菌(vibrio)是一类嗜盐、兼性异养的革兰氏阴性海洋细菌，其广布于河口和沿海生态系统中，是水生动物(包括养殖动物)中的一类重要的病原菌，其致病性受宿主的生理状态及水质环境条件等综合因素的影响较大，同时其传播速度较快、病程较短，对水产养殖业造成巨大的危害。在亚洲，弧菌引起的弧菌病是水产养殖业中导致虾、鱼和贝类大量死亡的最常见疾病之一。
2、截至目前，世界范围内已报道的弧菌病原菌主要有溶藻弧菌、创伤弧菌、河流弧菌、哈维弧菌、副溶血弧菌和拟态弧菌等20多种。
3、哈维氏弧菌是一种革兰氏阴性、发光的海洋细菌，广泛分布于近岸温暖的海洋环境中，是海水生物区系的正常菌群之一，主要引起虾和鱼类的感染病。哈维氏弧菌属杆状或短杆状，菌体弯曲，单生鞭毛，具备一定的运动能力；具有嗜盐性，在盐度较高的近岸海区及外海存活，适宜生存温度为25～28℃。哈维氏弧菌广泛分布于海洋环境中，其病害多发在夏季高温时期，此时水温适宜哈维氏弧菌的生长，而哈维氏弧菌在高密度生长时呈现发光现象，可导致对虾爆发“发光弧菌病”。
4、副溶血弧菌又称作嗜盐菌，是一种革兰阴性杆菌，分布范围广，主要来自生活在海水中的鱼、虾和贝类。联合国粮食及农业组织(fao)发布报告称，一种被称为“对虾早期死亡综合征(ems)”的弧菌病导致亚洲许多国家的养殖虾出现肝胰腺萎缩甚至死亡的现象，经美国亚利桑那大学的科研人员研究表明，副溶血弧菌是引起虾感染ems的主
5、溶藻弧菌是一种条件致病性弧菌，可在水中独立生存，也可作为生物被膜的一部分，或者存在于水产动物的体表和肠道中，可危害鱼类、节肢类、头足类、棘皮类等多种水产动物，且对人有致病性。
6、噬菌体是特异性感染细菌并在细菌细胞内复制的病毒。它们是地球上最丰富，最普遍的生物，在微生物、生理学、进化和治疗方面发挥着重要作用。近年来，使用噬菌体治疗人类和动物的慢性细菌性感染，具有很多成功的案例。噬菌体与抗生素相比具有更高的有效性和安全性。与抗生素相比，噬菌体具有高度的特异性，这种作用机制的优点是噬菌体只会裂解目标菌株，不会导致共生肠道菌群的破坏。同时噬菌体具有自我复制、治疗所需剂量小、无毒性、研发周期短、生产成本低等优势。噬菌体治疗作为消除病原菌的替代手段具有十分广阔、诱人的前景，值得研究者深入探索。
7、大量水产养殖动物致病菌裂解性噬菌体的成功分离及应用表明，利用噬菌体替代抗生素防控水产养殖动物细菌性疾病具有巨大潜力。
技术实现思路
1、为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009及其应用。本专利技术提供的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009对哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的具有强裂解效用，能有效防控水产养殖场中弧菌导致的疾病，极大地降低了各种疾病的病发概率，有益于水产养殖业的健康发展。通过对本专利技术分离得到的噬菌体的生物学特性研究，为下一步研发新的抑菌药物生物控制剂提供了理论指导意义。
2、本专利技术的技术方案是：
3、本专利技术提供了一种高裂解性哈维氏弧菌噬菌体，所述噬菌体为哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009，从山东省青岛市即墨区一水产养殖场中分离得到，已于2023年10月10日保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，保藏编号为cgmcc no.45682，分类学命名为vibrio harveyi bacteriophage。
4、进一步地，所述哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009在电镜下观测到：有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径为100 nm，有一个尾部长120 nm，颈部连着头部和尾部，为有尾目肌尾噬菌体科。
5、进一步地，所述的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009具有seq id no.1所示的核苷酸序列。
6、本专利技术提供的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009的适合生长的温度在30～40℃，最适生长温度为30℃，并且在ph为5～9的效价都能维持在108～1010 pfu/ml较高的水平，当ph＝7时效价最高，同时，本专利技术的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009的生物遗传稳定性较好，在传代过程中，效价整体处于稳定，是生产过程的优异选择。
7、进一步地，本专利技术提供的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009可裂解哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌等3种常见致病性弧菌，并且裂解率较高，经试验验证，本专利技术的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009对200株弧菌的裂解率高达77％。
8、进一步地，本专利技术提供的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009的感染复数为0.1时噬菌体效价最高，为1010pfu/ml。
9、本专利技术提供了一种高裂解性哈维氏弧菌噬菌体在制备预防或治疗哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌感染的疾病的药物中的应用。
10、本专利技术提供了一种高裂解性哈维氏弧菌噬菌体在制备预防或治疗哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌感染的疾病的水产饲料添加剂或环境消毒剂中的应用。
11、进一步地，本专利技术还提供了一种噬菌体组合物，包括上述高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009。
12、进一步地，本专利技术还提供了一种噬菌体药物制剂，包括上述的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009或上述的噬菌体组合物。
13、更进一步地，所述的噬菌体药物制剂中高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009的浓度大于109 pfu/ml。
14、更进一步地，所述的噬菌体药物制剂还包括药学上可接受的辅料，其剂型为粉剂、颗粒剂、冻干剂、溶液剂、乳剂、混悬剂或凝胶剂。
15、另外，本专利技术还提供了一种水产饲料添加剂，包括上述的哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009或上述的噬菌体组合物。
16、与现有技术相比，本专利技术提供的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009具有以下优势：
17、(1)本专利技术于山东省青岛市即墨区田横镇一水产养殖场中发现并分离了一株哈维氏弧菌，并以该菌为宿主分离得到了1株噬菌体rkp-vb23009，其噬菌体对养殖环境中的分离到哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌的具有强裂解效用；同时，该噬菌体具有较强的遗传稳定性，经试验验证，采用本专利技术的噬菌体rkp-vb23009进行传代30次的条件下，仍然可以保持较高水平的效价，高稳定性对于生产运输具有非常重要的意义，能够有效保证噬菌体的质量和效果。
18、(2)本专利技术所得的噬菌体rkp-vb23009可以用于弧菌引起的疾病的防治和治本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株高裂解性哈维氏弧菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为哈维氏弧菌噬菌体RKP-VB23009，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.45682。
2.根据权利要求1所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体，其特征在于，所述哈维氏弧菌噬菌体RKP-VB23009有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径为100nm，有一个尾部长120nm，颈部连着头部和尾部，为有尾目肌尾噬菌体科。
3.一种根据权利要求1或2所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体在制备预防或治疗哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌感染的疾病的药物中的应用。
4.一种根据权利要求1或2所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体在制备预防或治疗哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌感染的疾病的水产饲料添加剂或环境消毒剂中的应用。
5.一种噬菌体组合物，其特征在于，包括权利要求1所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体RKP-VB23009。
6.一种噬菌体药物制剂，其特征在于，包括权利要求1所述的哈维氏弧菌噬菌体RKP-VB23009或权利要求5所述的噬菌体组合物。
<...【技术特征摘要】
1.一株高裂解性哈维氏弧菌噬菌体，其特征在于，所述噬菌体为哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为cgmcc no.45682。
2.根据权利要求1所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体，其特征在于，所述哈维氏弧菌噬菌体rkp-vb23009有一个多面体立体对称的头部，包裹着核酸，直径为100nm，有一个尾部长120nm，颈部连着头部和尾部，为有尾目肌尾噬菌体科。
3.一种根据权利要求1或2所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体在制备预防或治疗哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌感染的疾病的药物中的应用。
4.一种根据权利要求1或2所述的高裂解性哈维氏弧菌噬菌体在制备预防或治疗哈维氏弧菌、副溶血弧菌、溶藻弧菌感染的疾病的水产饲料添加剂或环境消毒剂...
【专利技术属性】
技术研发人员：杜新永，刘长太，宋新慧，王甜甜，刘雨，
申请(专利权)人：瑞科盟青岛生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：
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