【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其是涉及一种dna适配体修饰的纳米粒子及其制备方法与应用。
技术介绍
1、肝癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一。根据世界卫生组织国际癌症研究署2020年12月发布的全球最新癌症数据，原发性肝癌发病率居恶性肿瘤第6位，死亡率居第3位。这主要是由于肝癌的临床治疗效果较差，生存率低。如传统的广谱化疗药物阿霉素，由于其缺乏组织选择性，通常容易产生较严重的全身性毒副作用。
2、目前，用于晚期肝癌患者的一线药物索拉非尼具有抑制肿瘤血管生成和抑制肿瘤细胞增殖双重抗肿瘤作用，然而其高昂的费用以及并发症限制其临床使用。但随着研究的深入，研究人员发现临床早期发现的小肝癌(<3cm)的治疗效果令人满意，其中小肝癌术后5年生存率高达60％-85％。显然，肝癌的“早期发现、早期诊断和早期治疗”，尤其是提高早期小肝癌的诊断率，对改善患者预后、提高生存时间，对改变肝癌诊治现状具有十分重要的现实意义。
3、基于此，本专利技术旨在一种具有增强特异性识别肝癌细胞能力、提高诊断及治疗肝癌效应的。
技术实现思路
1、本专利技术旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本专利技术提出了一种dna适配体修饰的纳米粒子，能够靶向肝癌细胞并诱导肝癌细胞凋亡，且磁共振显像结果表明其具有优异的成像效果，在t1模式下成像信号随浓度加强，在t2模式下成像信号随浓度降低，在肝癌诊断和治疗中具有广泛应用前景。
2、本专利技术还提出一种dna适配体修饰的纳米粒子的制备方法。
3、本专利技术还提出一种dna适配体修饰的纳米粒子在制备靶向肝癌细胞产品或治疗肝癌药物中的应用。
4、本专利技术的第一方面，提供一种dna适配体修饰的纳米粒子，包括：
5、a1)peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒，以及，
6、a2)dna适配体；
7、其中，所述dna适配体包括核苷酸序列如seq id no.1所示的ap、核苷酸序列如seqid no.2所示的ig、核苷酸序列如seq id no.3所示的tl中的至少一种。
8、根据本专利技术实施例的dna适配体修饰的纳米粒子，至少具有如下有益效果：
9、本专利技术的dna适配体修饰的纳米粒子是以peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒为载体，通过修饰靶向性dna适配体制得，该dna适配体修饰的纳米粒子能够显著提高对肝癌细胞凋亡的诱导效果，且当同时修饰多个靶向肝癌细胞的dna适配体时，对肝癌细胞凋亡的诱导表现出协同增效效果。
10、此外，本专利技术对上述靶向肝癌细胞的dna适配体修饰锰锌铁纳米粒子进行核磁性能表征，其磁共振(mri)显像结果表明，本专利技术的锰锌铁纳米粒子在t1模式下成像信号随浓度加强，在t2模式下成像信号随浓度降低，符合核磁共振影像检测所需的信号增强剂特征，有望提高诊断和肝癌治疗效果。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒的粒径为50～150nm。
12、在本专利技术的一些实施方式中，所述peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒含羧基末端。
13、含羧基末端的纳米颗粒可用于药物传递，羧基是一种重要的化学官能团，具有亲水性和可溶性，可以与多种功能分子进行化学反应，形成不同的功能化纳米颗粒。并且羧基末端可以增加纳米颗粒的亲水性，使其更易于溶解和稳定，同时有利于与dna适配体接枝进行化学修饰，实现精准靶向输送。
14、此外，含羧基末端的纳米颗粒还具有较好的生物相容性和生物降解性，可以避免对人体造成不良影响，从而提高药物的安全性和有效性。
15、在本专利技术的一些实施方式中，所述peg(聚乙二醇)的分子量为1500～2500；优选地，所述peg的分子量为2000。
16、peg的分子量对peg化纳米颗粒的性质和应用有着重要的影响，通常较高分子量的peg可以提供更强的空间位阻效应，增加纳米颗粒与周围环境的隔离性，减少颗粒之间的聚集，从而提高纳米颗粒的稳定性。peg能够增加锰锌铁氧体纳米颗粒与血液中蛋白质的作用，形成稳定的包被层，从而减少纳米颗粒被免疫系统清除的几率，并延长其在体内的停留时间，同时还能够减少细胞膜对纳米颗粒的主动摄取，降低纳米颗粒与细胞膜之间的非特异性吸附，对提高纳米粒子特异性靶向肝癌细胞至关重要。
17、在本专利技术的一些实施方式中，所述peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒的饱和磁化强度为80±20emu/g fe。
18、在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒的饱和磁化强度为80±10emu/g fe。
19、可以理解的是，本专利技术中的磁化强度为80±10emu/g fe，表示每克铁(fe)材料的平均磁化强度为80emu/g，其误差范围为±10emu/g。磁化强度可以用来评估含铁纳米材料的磁性能，在核磁共振技术中，通过对样品施加外部磁场并应用射频脉冲，可以对样品中的核自旋进行激发和探测。当纳米颗粒具有较高的磁化强度时，其对外部磁场的响应更强，能够产生更大的核磁共振信号。因此，较高的磁化强度可以提高纳米颗粒在核磁共振技术中的灵敏度和检测限。这对于一些需要高分辨率和高灵敏度的应用，如医学影像、材料表征和磁共振成像等领域非常重要。
20、在本专利技术的一些优选实施方式中，所述dna适配体包括核苷酸序列如seq id no.1所示的ap、核苷酸序列如seq id no.2所示的ig、核苷酸序列如seq id no.3所示的tl中的至少两种。
21、在本专利技术的一些更优选的实施方式中，所述dna适配体包括核苷酸序列如seq idno.1所示的ap、核苷酸序列如seq id no.2所示的ig、核苷酸序列如seq id no.3所示的tl。
22、dna适配体ap靶向细胞膜蛋白gpc3(glypican-3)，其是早期肝癌诊断标志物，在70％以上的肝细胞癌组织中高表达。dna适配体是基于实体瘤模型以及人肝癌细胞系huh7筛选出来的，其能够特异性结合肝癌细胞，结合位点为细胞表面，有助于提高临床实体瘤识别。dna适配体ig靶向跨膜糖蛋白胰岛素样生长因子2受体(insulin-like growth factor2receptor，igf2r)，igf2r是多功能受体，具有多种配体的结合位点，在肝星状细胞活化后高表达。而肝星状细胞活化与肝癌相伴的肝纤维化相关。并且相关研究表明igf2在肝细胞癌中高表达，减少igf2信号传递有益于抑制肝癌发展，因此，推测ig适配体可能通过同时抑制肝星状细胞活化及肝癌细胞存活率起到抑制肝癌的作用。本专利技术发现以peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒为载体，同时修饰上述三种靶向肝癌细胞的dna适配体时，其对肝癌细胞的促凋亡效果表现出协同增效效果，即在等量修饰的情况下，促凋亡效果约为未修饰锰锌铁纳米粒子的3倍，单种修饰或两种修饰的2倍。
23、本专利技术的第二方面，提供了一种第一方面所述dna适配体修饰的纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：
【技术保护点】
1.一种DNA适配体修饰的纳米粒子，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的纳米粒子，其特征在于，所述PEG化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒的粒径为50～150nm；
3.根据权利要求1所述的纳米粒子，其特征在于，所述DNA适配体包括核苷酸序列如SEQID NO.1所示的AP、核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的IG、核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的TL中的至少两种；
4.一种如权利要求1至3任一项所述DNA适配体修饰的纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述混合反应后还包括加入还原剂终止混合反应；优选地，所述还原剂包括β-巯基乙醇。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述反应缓冲液包括MES缓冲液；
7.根据权利要求4至6任一项所述的制备方法，其特征在于，所述PEG化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒、所述交联剂和所述活化剂的质量比为0.1：0.2～0.6：0.8～1.5；
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述PEG
9.如权利要求1至3任一项所述的DNA适配体修饰的纳米粒子在制备靶向肝癌细胞产品或治疗肝癌药物中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述靶向肝癌细胞产品包括但不限于肝癌诊断试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种dna适配体修饰的纳米粒子，其特征在于，包括：
2.根据权利要求1所述的纳米粒子，其特征在于，所述peg化磁性锰锌铁氧体纳米颗粒的粒径为50～150nm；
3.根据权利要求1所述的纳米粒子，其特征在于，所述dna适配体包括核苷酸序列如seqid no.1所示的ap、核苷酸序列如seq id no.2所示的ig、核苷酸序列如seq id no.3所示的tl中的至少两种；
4.一种如权利要求1至3任一项所述dna适配体修饰的纳米粒子的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述混合反应后还包括加入还原剂终止混合反应；优选地，所述还原剂包括β-...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘俐，陈琪，郑婷婷，黄嘉宝，白建华，杨晓婷，胡阿珍，许冰璇，
申请(专利权)人：北京大学深圳医院北京大学深圳临床医学院，
类型：发明
国别省市：
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