【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条、制备方法及应用，属于生物医药。
技术介绍
1、阿尔茨海默病（ad）是一种起病隐匿的进行性发展的神经系统退行性疾病。临床上以记忆障碍、失语、失用、失认、视空间技能损害、执行功能障碍以及人格和行为改变等全面性痴呆表现为特征。神经丝蛋白( neuronal thread proteins, ntps)是表达于脑和神经外胚层肿瘤细胞系中的分子家族，在神经元增殖、分化、大脑发育以及ad神经退行性变的过程中，ntps表达增加，因此检测尿液样本中阿尔茨海默相关神经丝蛋白（ad7c-ntp）的浓度可以辅助诊断ad，作为临床初步筛查。
2、目前现有的上市的同类标记物检测产品多为化学发光法和酶联免疫法，这些检测方法需要依赖专门的设备配合试剂检测，需要专业的医护人员操作，检测成本高。因此开发一款价格便宜、使用简单、适合于在家自测的阿尔茨海默相关神经丝蛋白（ad7c-ntp）检测尿试纸（胶体金法）是十分具有重要意义的。
技术实现思路
1、本专利技术为了解决现有技术中存在的上述缺陷和不足，提供了一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条、制备方法及应用。
2、为解决上述技术问题：
3、本专利技术第一个目的，提供一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条，包括样品垫、胶体金结合垫、nc硝酸纤维素膜、吸水垫及pvc胶板；按照待测样品流动方向样品垫、胶体金结合垫、nc硝酸纤维膜和
4、进一步，所述一抗的浓度为1.3-1.7ng/ml，所述二抗的浓度为1.3-1.7ng/ml；优选地，所述一抗的浓度为1.5ng/ml，所述二抗的浓度为1.5ng/ml。
5、本专利技术的第二个目的，提供一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条的制备方法，包括如下步骤：
6、s1胶体金结合垫的制备：
7、用量筒量取胶体金溶液，加入浓度为0.1m的na2hpo4.12h2o溶液，胶体金溶液与na2hpo4.12h2o溶液的体积比为1%，在磁力搅拌机上用溶度为1m的naoh调节ph值为7.5-8.5，加入一抗继续搅拌30min，加入浓度为100g/l的稳定剂bsa，bsa的体积百分含量为1%，继续搅拌20min，然后10000r转速、10℃离心30min，去除上清，用金标保存液重悬，涡旋混匀，即得胶体金-一抗结合物溶液，备用；
8、用等体积金标稀释液对胶体金-一抗结合物溶液进行稀释，涡旋混匀，用三维点膜喷金仪以喷量为6ul/cm的速度均匀喷涂在宽6mm、长30cm的胶体金结合垫上，然后置于37℃烘箱中烘干2-4h、备用；
9、s2 检测线t和质控线c的制备：将nc硝酸纤维膜平整贴在pvc胶板中央位置，用包被缓冲液分别稀释二抗和羊抗鼠igg多克隆抗体，采用三维点膜喷金仪将稀释好的二抗和羊抗鼠igg多克隆抗体以喷量为1μl/cm的速度均匀分别包被在检测线t和质控线c上，检测线t和质控线c之间的距离为0.5cm，然后置于37℃烘箱烘12-16h、备用；
10、s3 样本垫的制备：将玻璃纤维裁成宽16mm、长30cm的玻纤条，置于网架上，每条玻纤条用3.5ml样本垫处理液喷涂均匀，置于37℃烘箱烘12-16h、备用；
11、s4组装和剪切：将胶体金结合垫贴在靠近检测线t一侧pvc胶板上，且一端与nc硝酸纤维膜搭接0.5mm，将样本垫搭接在胶体金结合垫的另一端，搭接0.5mm，吸水垫贴在靠近质控线c一侧的pvc胶板上，并与nc硝酸纤维膜搭接0.5mm，胶体金结合垫和样本垫上设有保护膜，保护膜与nc硝酸纤维膜搭接1mm；吸水垫上设有保护膜，保护膜与nc硝酸纤维膜搭接1mm；将组装完成的pvc胶板切割2.5mm试纸条，即得成品。其中，所述金标保存液的配置过程如下：80ml超纯水中加入1.79g na2hpo4.12h2o，1g bsa，0.05g 防腐剂proclin300，搅拌至完全溶解，用1m 盐酸调节ph至8.0，加超纯水定容至100ml即为金标保存液。
12、所述金标稀释液的配置过程如下：80ml超纯水中加入1.79g na2hpo4.12h2o，0.5gcasein na，1g tween-20，20g 蔗糖，0.05g 防腐剂proclin300，搅拌至完全溶解，用1m 盐酸调节ph至8.0，加超纯水定容至100ml即为金标稀释液。
13、所述包被缓冲液的配置过程如下：80ml超纯水中加入1.79g na2hpo4.12h2o，0.9gnacl，2g 蔗糖，0.05g 防腐剂proclin300，搅拌至完全溶解，用1m 盐酸调节ph至8.0，加超纯水定容至100ml即为包被缓冲液。
14、所述样本垫处理液的配置过程如下：80ml超纯水中加入3.58g na2hpo4.12h2o，0.5g casein na，0.9g nacl，1g s9，1g pvp，0.05g 防腐剂proclin300，搅拌至完全溶解，用1m 盐酸调节ph至8.0，加超纯水定容至100ml即为样本垫处理液。
15、本专利技术第三个目的，提供一种利用上述的检测试纸条在阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp检测的非疾病诊断的应用。
16、进一步，检测样本为尿液。
17、本专利技术所达到的有益技术效果：本专利技术提高的阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条，该试纸条反应时间短，3-10分钟即可显示结果，不需要借助专业的仪器，可以实现居家自测，直接用肉眼即可读取检测结果，而且该试纸条特异性好，灵敏度高。该试纸条采用免疫胶体金层析技术检测样本中阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp是否存在；具体地，若样本中存在阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp时，阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp作为抗原先与胶体金-一抗反应，形成抗原-一抗-胶体金复合物，然后依靠层析作用在nc硝酸纤维膜上移动，运动到检测线t时，被t线上包被的二抗捕获，形成二抗-抗原-一抗-胶体金复合物，并在检测线t上出现红色色带；反之，若样本无阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp，则检测线t上无显色。无论样本中是否含有阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp，胶体金-一抗均能被质控线c上的羊抗鼠igg多克隆抗体，形成羊抗鼠igg多克隆抗体-一抗-胶体金复合物，从而在质控线上出现红色色带。
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1.一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白AD7C-NTP的检测试纸条，其特征在于：包括样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维素膜、吸水垫及PVC胶板；按照待测样品流动方向样品垫、胶体金结合垫、NC硝酸纤维膜和吸水纸依次粘结在PVC胶板上，其中，胶体金结合垫和吸水垫分别交错搭接在NC硝酸纤维膜的两端，所述样品垫搭接在胶体金结合垫上；按待测样品流动方向，所述NC硝酸纤维膜上依次设有检测线T和质控线C；所述胶体金结合垫上包被有一抗，所述检测线T上包被有二抗，所述一抗和二抗为两条不同的鼠抗人神经丝蛋白AD7C-NTP单克隆抗体IgG，所述质控线C上包被羊抗鼠IgG多克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的阿尔茨海默相关神经丝蛋白AD7C-NTP的检测试纸条，其特征在于：所述一抗的浓度为1.3-1.7 ng/mL，所述二抗的浓度为1.3-1.7 ng/mL。
3.根据权利要求书2所述阿尔茨海默相关神经丝蛋白AD7C-NTP的检测试纸条，其特征在于：所述一抗的浓度为1.5ng/mL，所述二抗的浓度为1.5ng/mL。
4.根据权利要求1-3任一项所述的阿尔茨海默相关神经丝
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述金标保存液的配置过程如下：80mL超纯水中加入1.79g Na2HPO4.12H2O，1g BSA，0.05g 防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M 盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为金标保存液。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述金标稀释液的配置过程如下：80mL超纯水中加入1.79g Na2HPO4.12H2O，0.5g Casein Na，1g Tween-20，20g 蔗糖，0.05g防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M 盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为金标稀释液。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述包被缓冲液的配置过程如下：80mL超纯水中加入1.79g Na2HPO4.12H2O，0.9g Nacl，2g 蔗糖，0.05g 防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M 盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为包被缓冲液。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述样本垫处理液的配置过程如下：80mL超纯水中加入3.58g Na2HPO4.12H2O，0.5g Casein Na，0.9g Nacl，1g S9，1g PVP，0.05g 防腐剂Proclin300，搅拌至完全溶解，用1M 盐酸调节pH至8.0，加超纯水定容至100mL即为样本垫处理液。
9.一种利用权利要求1-3任一项所述的检测试纸条在阿尔茨海默相关神经丝蛋白AD7C-NTP检测的非疾病诊断的应用。
10.根据权利要求9所述的非疾病诊断的应用，其特征在于：检测样本为尿液。
...【技术特征摘要】
1.一种阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条，其特征在于：包括样品垫、胶体金结合垫、nc硝酸纤维素膜、吸水垫及pvc胶板；按照待测样品流动方向样品垫、胶体金结合垫、nc硝酸纤维膜和吸水纸依次粘结在pvc胶板上，其中，胶体金结合垫和吸水垫分别交错搭接在nc硝酸纤维膜的两端，所述样品垫搭接在胶体金结合垫上；按待测样品流动方向，所述nc硝酸纤维膜上依次设有检测线t和质控线c；所述胶体金结合垫上包被有一抗，所述检测线t上包被有二抗，所述一抗和二抗为两条不同的鼠抗人神经丝蛋白ad7c-ntp单克隆抗体igg，所述质控线c上包被羊抗鼠igg多克隆抗体。
2.根据权利要求1所述的阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条，其特征在于：所述一抗的浓度为1.3-1.7 ng/ml，所述二抗的浓度为1.3-1.7 ng/ml。
3.根据权利要求书2所述阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条，其特征在于：所述一抗的浓度为1.5ng/ml，所述二抗的浓度为1.5ng/ml。
4.根据权利要求1-3任一项所述的阿尔茨海默相关神经丝蛋白ad7c-ntp的检测试纸条的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述金标保存液的配置过程如下：80ml超纯水中加入1.79g na2hpo4.12h2o，1g bsa，0.05g 防腐剂proclin300，搅拌至完全溶解，用1...
【专利技术属性】
技术研发人员：茅建，郑志强，
申请(专利权)人：芜湖耄智生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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