【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及分子生物学，具体涉及一种脆红李种质鉴定的srap分子标记及其应用。
技术介绍
1、脆红李(prunus americana)属双子叶植物纲蔷薇目蔷薇科(rosaceae)核果类果树。脆红李主要分布在四川、贵州等西南地区，是本土的一个品种系列，其早果美观、肉厚皮薄、肉脆汁多、耐贮运等特点深受生产者和消费者青睐。脆红李品种间由于在自然界容易杂交，差异较大，加上外来品种的引进，并且随着育种工作的开展，使得脆红李品种资源不仅类型多，体系繁杂，有的地方品种尚无正式品种名称，不利于脆红李种质资源的分类和鉴定。
2、目前对李品种的分子标记主要是ssr、rapd等方式，ssr引物结合位置较容易突变，致使结果发生偏差；rapd技术存在不稳定性；在选择引物的时候需要慎重。需要通过大量的引物筛选、重复实验，确定多态性较高，稳定性较好的引物进行实验，才能准确反应供试品种间的亲缘关系。
3、srap标记技术(sequence-related amplified polymorphism,相关序列扩增多态性)是一种用于基因组的pcr扩增检测的方法，其特点是无需基因组参考信息即可进行操作，并具有简便、稳定和高多态性等优点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种脆红李种质鉴定的srap分子标记及其应用，以解决现有技术中的ssr引物结合位置较容易突变，致使结果发生偏差；rapd技术存在不稳定性的技术问题。
2、为实现上述目的，本专利技术提供了以下技术方案：
3、本专利技术提供的一种脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组，所述引物组包括me1/em6、me1/em10、me1/em11、me2/em2、me2/em3、me2/em7、me2/em8、me2/em10、me2/em11、me5/em2、me3/em9、me7/em2、me3/em10、me5/em3、me7/em7、me7/em3、me4/em8、me4/em11、me4/em9、me8/em1、me5/em1、me9/em5、me7/em1、me8/em7；所述脆红李品种为东早红、东晚红、五月脆、晚红脆、彩红脆、茵红李、羌红脆、川红脆、元红脆、无忧脆、通红脆、红中脆、脆红李、串串红。
4、进一步的，所述的脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组的筛选方法，包括以下步骤：
5、s1、提取置于液氮-196℃脆红李样品新生幼嫩叶片基因组dna；
6、s2、上下游各11个引物，组合成121对引物以‘东早红’和‘无忧脆’dna作为模板进行pcr扩增；
7、s3、产物经凝胶电泳检测后，筛选出扩增效果好，稳定性好的24对引物组。
8、进一步的，所述的脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组的筛选方法，所述pcr体系为taq pcr master mix 7.5μl、浓度为50pmol/μl的正向引物1μl、浓度为50pmol/μl的反向引物1μl、模板dna1μl，以及ddh2o 4.5μl。
9、进一步的，所述的脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组的筛选方法，所述pcr反应的程序步骤为：首先进行94℃的预变性，持续时间为5min；接着进行94℃的变性，持续时间为1min，然后进行35℃的退火，持续时间为1min，再进行72℃的延伸，持续时间为1min，这个循环重复5次；接下来进行94℃的变性，持续时间为1min，50℃的退火，持续时间为1min，72℃的延伸，持续时间为1min，循环重复30次；最后进行72℃的延伸，持续时间为8min；反应结束后样品在4℃保存。
10、一种脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组在脆红李遗传多样性分析、脆红李亲缘关系分析、脆红李种质鉴定中的应用，所述脆红李品种为东早红、东晚红、五月脆、晚红脆、彩红脆、茵红李、羌红脆、川红脆、元红脆、无忧脆、通红脆、红中脆、脆红李、串串红。
11、基于上述技术方案，本专利技术实施例至少可以产生如下技术效果：
12、(1)本专利技术提供的脆红李种质鉴定的srap分子标记及其应用，srap分子标记分析脆红李遗传多样性，无需基因组参考信息，操作简便、稳定和高多态性。
13、(2)本专利技术提供的脆红李种质鉴定的srap分子标记及其应用，筛选24对引物扩增了345个条带，平均每对扩增14.4条，表明srap分子标记可以扩增出更多的条带，适用于脆红李亲缘关系分析。
14、(3)本专利技术提供的脆红李种质鉴定的srap分子标记及其应用，利用筛选出的多态性好的24对srap引物，分析14个脆红李的遗传背景，并将其分成5类，可应用于四川脆红李种质资源的鉴定。
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1.一种脆红李种质鉴定的SRAP分子标记引物组，其特征在于，所述引物组包括Me1/Em6、Me1/Em10、Me1/Em11、Me2/Em2、Me2/Em3、Me2/Em7、Me2/Em8、Me2/Em10、Me2/Em11、Me5/Em2、Me3/Em9、Me7/Em2、Me3/Em10、Me5/Em3、Me7/Em7、Me7/Em3、Me4/Em8、Me4/Em11、Me4/Em9、Me8/Em1、Me5/Em1、Me9/Em5、Me7/Em1、Me8/Em7；所述脆红李品种为东早红、东晚红、五月脆、晚红脆、彩红脆、茵红李、羌红脆、川红脆、元红脆、无忧脆、通红脆、红中脆、脆红李、串串红。
2.根据权利要求1所述的脆红李种质鉴定的SRAP分子标记引物组的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的脆红李种质鉴定的SRAP分子标记引物组的筛选方法，其特征在于，所述PCR体系为Taq PCR Master Mix 7.5 μL、浓度为50 pmol/μL的正向引物1 μL、浓度为50 pmol/μL的反向引物1 μL、模板DNA1 μL，以
4.根据权利要求2所述的脆红李种质鉴定的SRAP分子标记引物组的筛选方法，其特征在于，所述S2中PCR反应的程序包括以下子步骤：
5.一种如权利要求1所述的脆红李种质鉴定的SRAP分子标记引物组在脆红李遗传多样性分析、脆红李亲缘关系分析、脆红李种质鉴定中的应用，所述脆红李品种为东早红、东晚红、五月脆、晚红脆、彩红脆、茵红李、羌红脆、川红脆、元红脆、无忧脆、通红脆、红中脆、脆红李、串串红。
...【技术特征摘要】
1.一种脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组，其特征在于，所述引物组包括me1/em6、me1/em10、me1/em11、me2/em2、me2/em3、me2/em7、me2/em8、me2/em10、me2/em11、me5/em2、me3/em9、me7/em2、me3/em10、me5/em3、me7/em7、me7/em3、me4/em8、me4/em11、me4/em9、me8/em1、me5/em1、me9/em5、me7/em1、me8/em7；所述脆红李品种为东早红、东晚红、五月脆、晚红脆、彩红脆、茵红李、羌红脆、川红脆、元红脆、无忧脆、通红脆、红中脆、脆红李、串串红。
2.根据权利要求1所述的脆红李种质鉴定的srap分子标记引物组的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【专利技术属性】
技术研发人员：刘佳，张国薇，
申请(专利权)人：四川省农业科学院园艺研究所，
类型：发明
国别省市：
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