【技术实现步骤摘要】
本公开涉及核酸检测，具体涉及一种裂解液及检测生物样本中核酸的试剂盒和方法。
技术介绍
1、环介导等温扩增技术（loop-mediated isothermal amplification，lamp）基于链置换dna聚合酶和特殊的引物设计，可在恒温下（通常在60-65℃）进行多轮扩增，短时间内产生大量的目标dna。与常规的pcr相比，lamp具有更高的灵敏度和扩增效率，对于低浓度样本的检测准确度更高；且由于lamp体系中四条引物特异性靶向预扩增dna序列中六段区域，因此扩增过程中不受非靶标dna的影响，具有更高特异性；此外，lamp无需经过模板的热变性、温度循环、电泳等过程，不依赖于精密热循环仪和其他复杂的仪器设备，能极大节约成本和时间，易于在资源匮乏的基层推广应用，且适用于现场快速检测。
2、目前，lamp技术作为一种快速、灵敏且特异性高的核酸扩增方法，已被广泛用于生物医药、环境、水质监测、食品安全等领域。lamp检测中，不需要专门提取dna，直接利用细胞裂解液即可进行扩增、检测，然而，在针对粘性生物样本（例如口腔拭子）的检测过程中，由于有多糖成分的存在，会对lamp扩增过程产生抑制作用，从而降低了lamp检测的灵敏度和检出率。因此，需要开发一种能够提高粘性生物样本中核酸检测效率的方法。
技术实现思路
1、为实现上述目的，本公开提供如下技术方案：
2、一方面，本公开提供一种检测生物样本中核酸的方法，包括：（1）利用裂解液释放粘性生物样本或多糖样本中的核酸，得
3、在一些实施方案中，所述裂解液中sr2+的浓度可选自0.5-100 mm，优选为0.5-50mm；更优选为0.5-25 mm。在一些实施方案中，所述sr2+的浓度可选自0.5 mm、1 mm、5 mm、10mm、15 mm、20 mm或25 mm。在一些实施方案中，所述裂解液中的sr2+为添加srcl2后产生的。
4、在一些实施方案中，所述裂解液中还包含缓冲组分、表面活性剂、稳定剂、螯合剂等。
5、在一些实施方案中，所述缓冲组分为tris，tris的浓度为5-50 mm，优选为10-20mm，更优选为10 mm。
6、在一些实施方案中，所述表面活性剂包括但不限于吐温20、tritonx-100、十二烷基硫酸钠（sds）、十二烷基磺酸钠、十二烷基肌氨酸钠、十二烷基硫酸锂中的至少一种。优选为sds，所述sds的质量分数为0.5-10%，优选为1-5%，更优选为1%。
7、在一些实施方案中，所述稳定剂包括非离子表面活性剂和/或氨基酸，其中，非离子表面活性剂可选自peg200、peg2000、peg400、peg4000、peg800、peg8000等；氨基酸可选自甘氨酸、赖氨酸等。在一些实施方案中，所述螯合剂可选自egta、edta·2na、edta·4na、edta、柠檬酸钠、egta、hedta中的至少一种。优选为非离子表面活性剂peg200，所述peg200的质量分数为1-10%，优选为1-5%，更优选为2%。
8、在一些实施方案中，所述螯合剂优选为edta，所述edta的浓度为0.5-10 mm的edta，优选为1-5 mm，更优选为1 mm。
9、在一些实施方案中，所述裂解液的ph值为7.0-9.0；优选的裂解液ph值为7.0。
10、在一些实施方案中，所述裂解液ph值为7.0-9.0，包含5-50 mm的tris、0.5-10 mm的edta、0.5-10 w/v %的sds、1-10 w/v %的peg200，以及0.5-100 mm的sr2+。在一些实施方案中，所述裂解液ph为7.0，包含10 mm的tris、1 mm的edta、1 w/v %的sds、2 w/v %的peg200，以及0.5-100 mm的sr2+。在一些实施方案中，裂解液中sr2+浓度优选为0.5-50 mm；更优选为0.5-25 mm。在一些实施方案中，所述sr2+的浓度可选自0.5 mm、1 mm、5 mm、10 mm、15 mm、20 mm或25 mm。
11、在一些实施方案中，所述lamp扩增反应的扩增体系包含缓冲液、mgso4、dntp、bstdna聚合酶、引物组及荧光指示剂。在一些实施方案中，在扩增体系中，所述mgso4的终浓度为2-10 mm；所述dntp的终浓度为1-2 mm；所述bst dna聚合酶的终浓度为0.16-0.48 u/μl。在一些实施方案中，扩增体系中还包含灭菌无酶水。在一些实施方案中，所述缓冲液中包含tris-hcl、kcl、(nh4)2so4、mgso4及triton x-100。
12、在一些实施方案中，所述荧光指示剂可选自羟基萘酚蓝(hnb)、钙黄绿素、sybrgreen、evagreen、syto等。在一些实施方案中，所述荧光指示剂优选为syto。
13、在一些实施方式中，所述引物组为针对目标核酸序列设计的特异性lamp引物组，包含一对外引物f3/b3、一对内引物fip/bip、可选的还包含环引物loopf和/或loopb。在一些实施方案中，所述扩增体系中f3/b3引物对的浓度为0.1~0.4 μm，所述fip/bip引物对的浓度为0.8~3.2 μm。在一些实施方案中，所述loopf和/或loopb引物对的浓度为0.4~1.6 μm。其中“引物对的浓度”是指引物对中每条引物的浓度。
14、在一些实施方案中，所述lamp反应的扩增体系包含1×缓冲液、8 mm mgso4、1.6 μm fip/bip引物对、0.2 μm f3/b3引物对、0.8 μm loopb引物、1.4 mm dntp、syto染料和0.32 u/μl bst dna聚合酶。在一些实施方案中，所述1×缓冲液的ph为7.0-9.0，包含10-30mm tris-hcl、50-150 mm kcl、5-20 mm (nh4)2so4、1-5 mm mgso4及1-3 w/v % triton x-100。在一些实施方案中，所述1×缓冲液的ph为8.8，本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种检测生物样本中核酸的方法，包括：
2.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述裂解液中Sr2+的浓度为0.5-100 mM。
3.如权利要求1或2中所述的方法，其特征在于，所述裂解液中的Sr2+为添加SrCl2后产生的。
4.如权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，所述裂解液中还包含缓冲组分、表面活性剂、稳定剂和螯合剂。
5.如权利要求4中所述的方法，其特征在于，所述缓冲组分为5-50 mM的Tris；所述表面活性剂为0.5-10 w/v %的SDS；所述稳定剂为1-10 w/v %的PEG200；所述螯合剂为0.5-10mM的EDTA，所述裂解液的pH为7.0-9.0。
6.如权利要求1-5中任一所述的方法，所述粘性生物样本选自痰液、宫颈粘液、鼻咽拭子、口腔拭子、生殖器拭子或灌洗液。
7.一种裂解液，其特征在于，包含Sr2+，所述Sr2+的浓度选自0.5-100 mM。
8.一种检测生物样本中核酸的试剂盒，其特征在于，包含如权利要求7所述的裂解液。
9.根据权利要求8
10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述LAMP扩增反应体系包含1×缓冲液、MgSO4、dNTP、Bst DNA聚合酶、引物组及荧光指示剂。
...【技术特征摘要】
1.一种检测生物样本中核酸的方法，包括：
2.如权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述裂解液中sr2+的浓度为0.5-100 mm。
3.如权利要求1或2中所述的方法，其特征在于，所述裂解液中的sr2+为添加srcl2后产生的。
4.如权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于，所述裂解液中还包含缓冲组分、表面活性剂、稳定剂和螯合剂。
5.如权利要求4中所述的方法，其特征在于，所述缓冲组分为5-50 mm的tris；所述表面活性剂为0.5-10 w/v %的sds；所述稳定剂为1-10 w/v %的peg200；所述螯合剂为0.5-10mm的edt...
【专利技术属性】
技术研发人员：谈忠鸣，周璐，程晓庆，聂俊伟，鲍倡俊，
申请(专利权)人：江苏省疾病预防控制中心江苏省公共卫生研究院，
类型：发明
国别省市：
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