【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测试剂，具体涉及一种香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂及其制备方法。
技术介绍
1、香草扁桃酸（vanillymandelic acid，vma），其结构式如式ⅵ所示：
2、式ⅵ。
3、香草扁桃酸即3-甲氧基-4-羟基苦杏仁酸，是肾上腺髓质、交感神经节等部位的嗜铬细胞分泌的儿茶酚胺类激素（肾上腺素、去甲肾上腺素）的主要代谢物，可反映体内肾上腺髓质激素的浓度水平。尿液中香草扁桃酸的测定可间接反映体内儿茶酚胺的分泌，对肾上腺髓质增生的诊断也有着重要的临床意义。尿液中vma的多寡由交感神经、肾上腺髓质功能状态决定。vma升高则说明肾上腺功能活跃，交感神经兴奋性增高。儿茶酚胺分泌增多则导致其代谢产物vma的增多。vma可用来诊断充血性心力衰竭(chf)临床综合症。已有研究报道，中枢性睡眠呼吸障碍的存在加重了充血性心力衰竭患者夜间的缺氧，导致左室射血分数(lvef)降低，对左心功能产生负面影响。存在睡眠呼吸障碍，常引起夜间反复的睡眠呼吸暂停及低通气，出现夜间的反复微醒觉。睡眠呼吸暂停、低氧、睡眠中微醒觉、胸内负压增加及变化过度均可导致体内儿茶酚胺的增加。研究表明：实验组与对照组lvef相同情况下，实验组慢性充血性心力衰竭(chf)患者组较对照组vma水平高。
4、检测香草扁桃酸的方法有重氮法、微柱法、高效液相色谱法、电化学发光法、分光光度法等。重氮法不需特殊仪器，曾在临床得到广泛应用。但其易受药物、饮食等干扰而出现假阳性结果，且操作繁琐费时。微柱法原理是通过阴离子交换树脂将尿中vma
5、因此，针对现有技术中存在的缺陷，研发一种性能指标达到临床检测要求，灵敏度高、特异性强、稳定性好、结果准确，可应用于全自动生化分析仪的高通量、快速化检测的香草扁桃酸检测试剂已成为国内外体外诊断试剂行业的热点。
技术实现思路
1、为了克服现有技术的不足，本专利技术所采用的技术方案是：
2、本专利技术一方面提供了一种香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，包括：r1试剂与r2试剂；
3、所述r1试剂由香草扁桃酸-共轭蛋白偶联物和r1缓冲液组成，所述r2试剂由抗香草扁桃酸特异性抗体包被的胶乳微球和r2缓冲液组成；
4、所述的香草扁桃酸-共轭蛋白偶联物由香草扁桃酸衍生物与共轭蛋白偶联而成，其结构式如式ⅰ所示：
5、
6、式ⅰ；
7、所述香草扁桃酸衍生物，结构式如式ⅱ所示：
8、
9、式ⅱ；
10、所述共轭蛋白为血清白蛋白；所述r1缓冲液为含有聚乙二醇20000与普瑞克宁300的tirs缓冲液；
11、所述的抗香草扁桃酸特异性抗体为香草扁桃酸免疫原免疫实验动物后得到的抗体；所述的香草扁桃酸免疫原由式ⅱ所示的香草扁桃酸衍生物与载体蛋白偶联而成，其结构式如式ⅲ所示：
12、
13、式ⅲ；
14、所述的载体蛋白是具有免疫原性的蛋白质或多肽；所述的实验动物为哺乳动物；
15、所述抗香草扁桃酸特异性抗体包被的胶乳微球由抗香草扁桃酸特异性抗体通过连接分子与胶乳微球偶联而成；
16、所述连接分子为马来酰亚胺-聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，其结构式如式ⅳ所示：
17、
18、式ⅳ；
19、式ⅳ中n为1-12之间的任意整数；
20、所述胶乳微球为表面带有氨基、羧基、羟基、巯基、酰肼基或氯甲基中任意一种基团修饰的聚苯乙烯胶乳微球，直径范围为50-450nm；
21、所述r2缓冲液为含有普瑞克宁300的磷酸钠缓冲液。
22、优选地，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、羊血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白中的一种。更优选地，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
23、优选地，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血清白蛋白、甲状腺球蛋白、丙种球蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述哺乳动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种。更优选地，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血蓝蛋白；所述哺乳动物为家兔。
24、优选地，所述连接分子为马来酰亚胺-十二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，其结构式如式ⅴ所示：
25、
26、式ⅴ；
27、优选地，所述胶乳微球为表面带有氨基修饰的聚苯乙烯胶乳微球，直径为200nm。
28、本专利技术另一方面提供了一种上述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，所述的制备方法包含以下步骤：
29、（a1）r1试剂的制备：将香草扁桃酸-共轭蛋白偶联物溶解于纯化水中，然后添加聚乙二醇20000、普瑞克宁300、三羟甲基氨基甲烷，搅拌均匀，将ph值调节至7.0-9.0，制得r1试剂；
30、（a2）r2试剂的制备：将抗香草扁桃酸特异性抗体包被的胶乳微球加入纯化水中，然后添加磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、普瑞克宁300，搅拌均匀，将ph值调节至7.0-9.0，制得r2试剂。
31、具体地，上述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法包含以下步骤：
32、（a1）r1试剂的制备：将香草扁桃酸-共轭蛋白偶联物按照终浓度质量分数为0.01%的比例溶解于纯化水中，然后添加终浓度质量分数为0.1%的聚乙二醇20000、0.05%的普瑞克宁300，终浓度摩尔浓度为100.0mmol/l的三羟甲基氨基甲烷，搅拌均匀，将ph值调节至8.0，制得r1试剂；
33、（a2）r2试剂的制备：将抗香草扁桃酸特异性抗体包被的胶乳微球按照终浓度质量分数为2.0%的比例加入纯化水中，然后添加终浓度摩尔浓度为8.0 mmol/l的磷酸氢二钠本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，包括：R1试剂与R2试剂；
2.根据权利要求1所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、羊血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白中的一种。
3.根据权利要求2所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
4.根据权利要求1所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血清白蛋白、甲状腺球蛋白、丙种球蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述哺乳动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种。
5.根据权利要求4所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血蓝蛋白；所述哺乳动物为家兔。
6.根据权利要求1所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述连接分子为马来酰亚胺-十二聚乙二醇-丙烯酸琥珀酰亚胺酯，其结构式如式Ⅴ所示：
7.一种如权利要求1所述的香草扁桃
8.根据权利要求7所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述香草扁桃酸-共轭蛋白偶联物的制备方法，包含以下步骤：
9.根据权利要求7所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述抗香草扁桃酸特异性抗体包被的胶乳微球的制备方法，包含以下步骤：
10.根据权利要求9所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂的制备方法，其特征在于，所述抗香草扁桃酸特异性抗体的制备方法，包含以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，包括：r1试剂与r2试剂；
2.根据权利要求1所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为牛血清白蛋白、兔血清白蛋白、羊血清白蛋白、马血清白蛋白或人血清白蛋白中的一种。
3.根据权利要求2所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
4.根据权利要求1所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血清白蛋白、甲状腺球蛋白、丙种球蛋白、卵清白蛋白、血蓝蛋白或多聚赖氨酸中的一种；所述哺乳动物为家兔、山羊、小鼠、绵羊、豚鼠或马中的一种。
5.根据权利要求4所述的香草扁桃酸胶乳增强免疫比浊检测试剂，其特征在于，所述具有免疫原性的蛋白质或多肽为血蓝蛋白；所述哺乳...
【专利技术属性】
技术研发人员：付卫，成志鹏，张小可，
申请(专利权)人：苏州博源医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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