【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学，具体涉及一种gc法分离测定骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法。
技术介绍
1、骨化三醇是一种钙代谢调节药，其化学名称为(5z，7e)-9，10-开环胆甾-5，7，10(19)-三烯-1α，3β，25-三醇一水合物，分子式为c27h44o3·h2o，分子量为434.65，结构式如式ⅰ所示。骨化三醇可用于治疗骨质疏松和佝偻病等疾病的治疗。口服骨化三醇可以恢复肠道对钙的正常吸收，纠正低血钙，缓解肌肉骨骼疼痛，同时有助于降低过高的血清碱性磷酸酶和甲状腺素水平。
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3、sm1是合成骨化三醇的重要片段，为骨化三醇的关键起始物料，将其命名为骨化三醇起始物料sm1(简称：cat-sm1)。cat-sm1的分离和杂质的控制对骨化三醇的质量及杂质追溯有关键性的作用。cat-sm1的化学名称为(1r，3ar，7ar)-1-((r)-6-羟基-6-甲基庚-2-基)-7-甲基八氢-1d-茚-4-醇，其分子式为c18h34o2，分子量为282.46。cat-sm1结构式如式ⅱ所示。
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5、研究表明，cat-sm1在合成过程中会引入其特有的工艺杂质：杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c、杂质sm1d和杂质sm1e。杂质sm1a的化学名称为(1r，3as，7ar)-1-((r)-6-羟基-6-甲基庚-2-基)-7-甲基八氢-1h-茚-4-醇，分子式为c18h34o2，分子量为282.46，结构式如式ⅲ所示。杂质sm1b的化学名称为(1r，3ar，7ar)-1-((s)-6-羟
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7、从cat-sm1的合成工艺分析，上述杂质在cat-sm1中存在的可能性较大，若在cat-sm1中不进行检测控制，会影响终产品骨化三醇的纯度和质量，增加患者使用该药品的安全性风险，且增加后续中间体和终产品杂质追踪的难度。但目前无法定标准，也无文献或专利报道骨化三醇起始物料sm1及前述5个杂质在同一个分析方法中的检测。仅有部分现有技术报道了骨化三醇及其有关物质的检测方法，例如，公开号为cn116466016b的专利公开了一种骨化三醇口服液中有关物质含量的测定方法，其采用高效液相色谱法对骨化三醇口服液中骨化三醇前体和降解杂质进行检测。公开号为cn109752471a的专利公开了一种骨化三醇的检测方法，其通过hplc法对骨化三醇进行检测，色谱柱为c18柱，流动相a为甲醇，流动相b为甲醇和乙腈。但是这些方法均难以实现骨化三醇中杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c、杂质sm1d和杂质sm1e的有效测定。
8、因此，为了避免杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c、杂质sm1d和杂质sm1e这5种杂质对产品纯度和质量产生影响，需建立新方法将骨化三醇起始物料sm1及其5种杂质进行分离检测，以控制骨化三醇起始物料sm1和骨化三醇的质量。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术的目的之一在于提供一种利用气相色谱法分离骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法，该方法可在110分钟内或大于110分钟的时间同时实现骨化三醇起始物料sm1及其5种杂质的有效分离，为后续骨化三醇起始物料sm1及其5种杂质的定性和定量检测提供了支持。
2、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
3、利用气相色谱法分离骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法，所述杂质包括杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c、杂质sm1d、杂质sm1e中的任一种或多种；所述骨化三醇起始物料sm1的结构式如式ⅱ所示，所述杂质sm1a的结构式如式ⅲ所示，所述杂质sm1b的结构式如式ⅳ所示，所述杂质sm1c的结构式如式ⅴ所示，所述杂质sm1d的结构式如式ⅵ所示，所述杂质sm1e的结构式如式ⅶ所示；
4、所述气相色谱法是采用毛细管柱为色谱柱，采用聚乙二醇作为色谱柱固定相，采用氮气作为载气；通过调节柱温，使用程序升温依次将杂质sm1e、杂质sm1d、杂质sm1b、杂质sm1a、骨化三醇起始物料sm1和杂质sm1c进行分离；柱温为100℃-260℃；
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6、从上述各结构式可知：各杂质与主成分(cat-sm1)紫外吸收非常弱，且液相色谱-反相系统几乎无保留，考虑到cat-sm1与杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c沸点能满足气相检测要求，故而选择采用气相色谱法对其进行分离和测定。但cat-sm1与杂质sm1a、杂质sm1b互为异构体，且杂质sm1d和杂质sm1e沸点比其他组分沸点高很多，在气相分析方法中要兼顾沸点差异很大的杂质的检出，且使异构体杂质较好的分离检测是本方法的难点，也是本方法的创新所在。
7、作为优选，洗脱时间为110分钟。
8、进一步，柱箱升温程序为：起始温度为100-150℃，维持2-3分钟；以1-2℃/min的速率升温至210-230℃，维持8-15分钟；以4-6℃/min的速率升温至240-260℃，维持20-25分钟。
9、更进一步，柱箱升温程序为：起始温度为150℃，维持2分钟；以1℃/min的速率升温至220℃，维持10分钟；以5℃/min的速率升温至250℃，维持22分钟。
10、进一步，进样口温度为180℃-230℃，优选为200℃。
11、进一步，流速为0.5-3ml/min，优选为0.9-1.1ml/min，更优选为1.0ml/min。
12、作为优选，色谱柱固定相为100％聚乙二醇。
13、作为更优选，色谱柱为agilent db-wax，其规格为30m×0.32mm，0.25μm。
14、作为优选，进样体积为2μl。
15、本专利技术的目的之二在于提供一种定性鉴别骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法，该方法可对样品中含量低于0.02％的杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c、杂质sm1d和杂质sm1e进行定性，且具有较低的检测限。
16、为实现上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
17、定性鉴别骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法，包括如下步骤：本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.利用气相色谱法分离骨化三醇起始物料SM1及其杂质的方法，其特征在于，所述杂质包括杂质SM1a、杂质SM1b、杂质SM1c、杂质SM1d、杂质SM1e中的任一种或多种；所述骨化三醇起始物料SM1的结构式如式Ⅱ所示，所述杂质SM1a的结构式如式Ⅲ所示，所述杂质SM1b的结构式如式Ⅳ所示，所述杂质SM1c的结构式如式Ⅴ所示，所述杂质SM1d的结构式如式Ⅵ所示，所述杂质SM1e的结构式如式Ⅶ所示；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱箱升温程序为：起始温度为100-150℃，维持2-3分钟；以1-2℃/min的速率升温至210-230℃，维持8-15分钟；以4-6℃/min的速率升温至240-260℃，维持20-25分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进样口温度为180℃-230℃；流速为0.5-3ml/min。
4.定性鉴别骨化三醇起始物料SM1及其杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，检测器温度为200-300℃。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于
7.定量检测骨化三醇起始物料SM1及其杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，分离前，以无水乙醇、乙醇、甲醇、二氯甲烷中的任一种或多种作为溶剂配制待测样品。
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，当检测品色谱图中存在与杂质SM1c保留时间一致的色谱峰时，若检测品色谱图的峰面积≤对照品中对应色谱峰的峰面积，表示样品合格；若检测品色谱图的峰面积＞对照品中对应色谱峰的峰面积，表示样品不合格。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述杂质SM1e在浓度2.683μg/ml～46.953μg/ml范围内，Y＝0.0672X-0.0112，R＝1.0000；所述杂质SM1d在浓度1.978μg/ml～34.619μg/ml范围内，Y＝0.0712X-0.0081，R＝1.0000；所述杂质SM1b在1.925μg/ml～33.685μg/ml范围内，Y＝0.715X-0.0056，R＝1.0000；所述杂质SM1a在2.058μg/ml～36.012μg/ml范围内，Y＝0.0677X-0.0043，R＝1.0000；所述骨化三醇起始物料SM1在浓度3.192μg/ml～106.416μg/ml范围内，Y＝0.0733X+0.0297，r＝1.0000；其中，Y为Y轴，表示峰面积；X为X轴，表示浓度，R表示相关系数。
...【技术特征摘要】
1.利用气相色谱法分离骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法，其特征在于，所述杂质包括杂质sm1a、杂质sm1b、杂质sm1c、杂质sm1d、杂质sm1e中的任一种或多种；所述骨化三醇起始物料sm1的结构式如式ⅱ所示，所述杂质sm1a的结构式如式ⅲ所示，所述杂质sm1b的结构式如式ⅳ所示，所述杂质sm1c的结构式如式ⅴ所示，所述杂质sm1d的结构式如式ⅵ所示，所述杂质sm1e的结构式如式ⅶ所示；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，柱箱升温程序为：起始温度为100-150℃，维持2-3分钟；以1-2℃/min的速率升温至210-230℃，维持8-15分钟；以4-6℃/min的速率升温至240-260℃，维持20-25分钟。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进样口温度为180℃-230℃；流速为0.5-3ml/min。
4.定性鉴别骨化三醇起始物料sm1及其杂质的方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，检测器温度为200-300℃。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，当保留时间为61.4±0.5min时，判定为所述杂质sm1e；当保留时间为62.9±0.5min时，判定为所述杂质sm1d；当保留时间为73.3±0.5min时，判定为所述杂质sm1b；当保留时间为74.0±0.5min时，判定为所述杂质sm1a；当保留时间为77.3±0.5min时，判定为所述骨化三醇起...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁雄英，
申请(专利权)人：重庆华邦胜凯制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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