【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及天然化合物应用领域，具体涉及天然化合物蒲公英甾醇、阿魏酸单独和联合用药作为抑制马立克氏病病毒复制以及抗马立克氏病发生药物的应用。
技术介绍
1、鸡感染致病型血清i型马立克氏病病毒(mdv)要引起马立克氏病(md)，md是一种高致死性、内脏多发性肿瘤的病毒性传染病。鸡是mdv最重要的自然宿主，mdv属于细胞结合性的疱疹病毒科，其分子结构和基因组成与α疱疹病毒相似。
2、目前防御md的主要手段是接种md疫苗，有研究表明，接种md疫苗能保护鸡群不发生md恶性肿瘤，但md疫苗免疫的鸡仍可感染mdv，md疫苗并不能阻止mdv在鸡体内的复制、成熟和释放。因此，经md疫苗免疫的鸡也就成为mdv新的传染源，加上疫苗的免疫压力，进而促进了mdv毒力不断增强，出现了毒力更强的mdv毒株。因此，mdv仍然是养禽业的重要威胁。但阻止mdv在鸡细胞内的复制是扼制mdv增殖、扩散和毒力增强的有效办法，也是控制md暴发，增强疫苗的防御效果的关键。
3、蒲公英甾醇也称蒲公英固醇，其cas号为1059-14-9，英文名字taraxasterol，其分子式为c30h50o，相对分子质量为426.72。蒲公英甾醇是从蒲公英中分离得到的一种五环三萜类化合物。蒲公英甾醇具有良好的免疫调节以及抗炎剂作用，但至今未见任何关于蒲公英甾醇抗马立克氏病或任何抑制mdv病毒复制及活性的报道。
4、阿魏酸的中文其他名称有阿巍酸、阿藯酸、阿魏黢、纳米阿魏酸等，英文名称为ferulic acid，cas号为1135-24-6,分子式为c1
技术实现思路
1、本专利技术为了抗鸡md的发生，抑制mdv在鸡细胞内的复制，提高md疫苗防御效果，扼制mdv毒力的增强，提供了一种蒲公英甾醇、阿魏酸单独用药以及联合用药作为抑制mdv复制和抗鸡马立克氏病药物的新用途，基于mdv编码的mdv049蛋白酶和us3蛋白激酶活性抑制系统，以及细胞接种病毒和马立克氏病动物模型，筛选出蒲公英甾醇、阿魏酸单独用药以及联合用药在安全用药量下能有效地抑制mdv的复制、攻毒实验动物模型肿瘤的产生。
2、本专利技术提供了一种抑制mdv复制的药物，包括蒲公英甾醇、阿魏酸单独用药以及联合用药。本专利技术所述的蒲公英甾醇、阿魏酸单独用药以及联合用药，具有抗mdv和md的效果。
3、本专利技术所用到的药物或其他试剂均为商业化试剂或人工合成的试剂混合而成，所述药物，包括蒲公英甾醇、阿魏酸或其他所用到试剂的制备或提取方法为现有
技术实现思路
，不是本专利技术保护的主题。
4、蒲公英甾醇抑制mdv编码的mdv049蛋白酶活性，阿魏酸抑制mdv编码的us3蛋白激酶活性，mdv049蛋白和us3的功能还未见详细的阐明。本专利技术对5000余个化合物进行高通量筛选，幸运的发现，所述蒲公英甾醇具有抑制mdv049蛋白酶活性的作用，阿魏酸具有抑制us3蛋白激酶活性。经过本专利技术的研究，所述蒲公英甾醇通过抑制mdv049蛋白酶以及阿魏酸通过抑制us3蛋白激酶实现了细胞水平抑制mdv复制，而对鸡细胞本身的信号通路和蛋白没有产生显著的抑制作用。
5、蒲公英甾醇作为蛋白酶抑制剂，阿魏酸作为蛋白激酶抑制剂，可影响细胞内多种信号通路和蛋白的作用。经过本专利技术的研究表明，蒲公英甾醇特异性的抑制mdv049蛋白酶活性，阿魏酸特异的抑制us3蛋白激酶活性。
6、本专利技术提供了一种抑制马立克氏病病毒的药物，包括mdv049蛋白酶抑制剂和/或us3蛋白激酶抑制剂，所述药物包括蒲公英甾醇或阿魏酸或蒲公英甾醇与阿魏酸联合使用。
7、优选的是，所述药物用于抑制细胞内马立克氏病病毒复制，所述蒲公英甾醇在细胞水平作用浓度为0.5～350μm，或所述阿魏酸在细胞水平作用浓度为3～300μm，或0.5～350μm的蒲公英甾醇与3～300μm的阿魏酸的联合用药。优选的，在此联合用药浓度范围内，蒲公英甾醇：阿魏酸摩尔浓度比在2：1-1：8的条件下均能发挥协同抑制mdv复制作用，进一步优选的在1：2的联合用药条件下抑制效果最佳。优选的，在此联合用药浓度范围内，蒲公英甾醇：阿魏酸摩尔浓度比为2：1、1：1、1：4、1：8。
8、通过向感染mdv的鸡细胞的培养体系中添加所述蒲公英甾醇、阿魏酸单独用药和联合用药，mdv复制受到显著的抑制。优选的，所述蒲公英甾醇、阿魏酸是在感染了mdv的cef细胞(鸡胚成纤维细胞)或者df-1细胞(鸡胚成纤维细胞系)水平上抑制病毒的复制。
9、上述任一项优选的是，所述蒲公英甾醇、阿魏酸在细胞水平的作用浓度分别，蒲公英甾醇为0.5～350μm，阿魏酸为3～300μm，以及在这些浓度范围内的联合用药。所述细胞水平优选的细胞为cef细胞或df-1细胞。
10、上述任一项优选的是，所述蒲公英甾醇细胞水平的作用浓度优选为0.5～350μm，进一步优选的是，0.5μm的蒲公英甾醇在cef细胞水平抑制mdv的复制，优选的，0.5μm、2μm、5μm、10μm、50μm、100μm、200μm、350μm及其间范围的蒲公英甾醇均有效抑制感染mdv的细胞内mdv的复制，同时对细胞本身没有毒副作用。蒲公英甾醇的浓度大于0.5μm时可显著减少病毒的复制。当浓度达到5μm时，基本上可以完全抑制病毒在细胞内的复制和对细胞的感染，并且在此浓度范围药物对细胞没有造成显著伤害。
11、上述任一项优选的是，所述阿魏酸细胞水平的作用浓度优选为3～300μm，进一步优选的是，14μm的阿魏酸在cef细胞水平抑制mdv的复制，优选的，3μm、5μm、10μm、20μm、50μm、80μm、150μm、200μm、250μm、300μm及其间范围的阿魏酸均有效抑制感染mdv的细胞内mdv的复制，同时对细胞本身没有毒副作用。阿魏酸的浓度大于3μm时可显著减少病毒的复制。当浓度达到10μm时，基本上可以完全抑制病毒在细胞内的复制和对细胞的感染，并且在此浓度范围药物对细胞没有造成显著伤害。
12、上述任一项优选的是，0.5～350μm蒲公英甾醇、3～300μm阿魏酸单独用药或联合用药，优选为，所述蒲公英甾醇、阿魏酸在上述任一项优选范围内的单独用药和联合用药，
13、上述任一项优选的是，所述mdv为血清i型mdv。
14、上述任一项优选的是，所述药物在动物体内使用，在动物体内使用剂量为：0.3～340mg/(kg·d)的蒲公英甾醇，或3～400mg/本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种抑制马立克氏病病毒的药物，包括MDV049蛋白酶抑制剂和/或US3蛋白激酶抑制剂，其特征在于，所述药物包括蒲公英甾醇或阿魏酸或蒲公英甾醇与阿魏酸联合使用。
2.如权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物用于抑制细胞内马立克氏病病毒复制，所述蒲公英甾醇在细胞水平作用浓度为0.5～350μM；或所述阿魏酸在细胞水平作用浓度为3～300μM；或0.5～350μM的蒲公英甾醇与3～300μM的阿魏酸的联合用药，且在此联合用药浓度范围内，蒲公英甾醇：阿魏酸摩尔浓度比为2：1-1：8。
3.如权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物在动物体内使用，在动物体内使用剂量为：0.3～340mg/(kg·d)的蒲公英甾醇，或3～400mg/(kg·d)的阿魏酸作用剂量为，或0.3～340mg/(kg·d)的蒲公英甾醇与3～400mg/(kg·d)的阿魏酸的联合用药，且在此联合用药剂量范围内，蒲公英甾醇：阿魏酸用药量比为2：1-1：8。
4.如权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药物的给药方式包括口服、腹腔注射或肌肉注射。
5.如权利要求4
6.蒲公英甾醇在抑制MDV049蛋白酶活性中的应用。
7.阿魏酸在抑制US3蛋白激酶活性中应用。
8.蒲公英甾醇或阿魏酸或蒲公英甾醇与阿魏酸联合使用在预防或治疗马立克氏病药物制备中的应用。
9.蒲公英甾醇或阿魏酸或蒲公英甾醇与阿魏酸联合使用在抑制马立克氏病患病鸡体内肿瘤形成的药物制备中的应用。
10.蒲公英甾醇或阿魏酸或蒲公英甾醇与阿魏酸联合使用在抑制体内或体外培养体系中马立克氏病病毒复制的药物制备中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种抑制马立克氏病病毒的药物，包括mdv049蛋白酶抑制剂和/或us3蛋白激酶抑制剂，其特征在于，所述药物包括蒲公英甾醇或阿魏酸或蒲公英甾醇与阿魏酸联合使用。
2.如权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物用于抑制细胞内马立克氏病病毒复制，所述蒲公英甾醇在细胞水平作用浓度为0.5～350μm；或所述阿魏酸在细胞水平作用浓度为3～300μm；或0.5～350μm的蒲公英甾醇与3～300μm的阿魏酸的联合用药，且在此联合用药浓度范围内，蒲公英甾醇：阿魏酸摩尔浓度比为2：1-1：8。
3.如权利要求1所述的药物，其特征在于，所述药物在动物体内使用，在动物体内使用剂量为：0.3～340mg/(kg·d)的蒲公英甾醇，或3～400mg/(kg·d)的阿魏酸作用剂量为，或0.3～340mg/(kg·d)的蒲公英甾醇与3～400mg/(kg·d)的阿魏酸的联合用药，且在此联合用药剂量范围内，蒲公英甾醇：阿魏酸用药量比为2：1-1：8。
4.如权利要求3所述的药物，其特征在于，所述药物的给药方式包括口服、腹腔注射或肌肉注射。
5.如权利要求4所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：张晶，邓国辉，许家翠，艾永兴，张亦凡，范青松，冯婧涵，王浩荣，杨丽影，罗娜，王传奇，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：
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